宫颈癌细胞人乳头瘤病毒基因型分布及持续感染分析

刘紫玲 姜玮丽

【摘 要】 目的：分析包头地区妇科门诊就诊的患者高危型人乳头瘤病毒的感染情况，为地区预防宫颈癌的发生提供流行病学基础数据。方法：选取2017年1月至2019年3月就诊于包头市中心医院的6797例妇科门诊患者的宫颈细胞标本，采用聚合酶链反应方法检测鉴定患者高危型人乳头瘤病毒的分型，并统计学分析本地区的感染特点。结果：在6797例患者中，感染高危型人乳头瘤病毒的患者有1133例（16.67%），高危亚型的前三位主要为HPV16型34.07%（386/1133），HPV58型14.56%（165/1133）和HPV52型12.44%（141/1133），仅存在单一亚型感染的病例有887例（78.29%），复合感染占246例（21.71%），同时至少存在与宫颈癌高度相关的HPV16型和（或）HPV18型的病例占阳性人群的40.33%（457/1133）。HPV感染率年龄分布无统计学差异（P>0.05），阳性感染人群主要分布于31～55岁，呈现3年内持续感染的患者占阳性人群的9.36%（35/374）。结论：筛查地区的高危型人乳头瘤病毒的感染情况对于患者及时治疗感染与预防宫颈癌的发生有积极的作用。

【关键词】 高危人乳头瘤病毒;持续感染;宫颈癌

Analysis of genotype distribution and persistent infection of human papillomavirus

Liu Ziling， Jiang Weili*

Department of Clinical Laboratory，Baotou Central Hospital， Baotou， Inner Mongolia 014000

[Abstract] Objective：To analyze the infection of high.risk human papillomavirus of gynecological outpatients in Baotou， and to provide baseline information for the prevention of cervical cancer in this area. Methods： Cervical cell specimens from 6，797 gynecological outpatients who visited baotou central hospital from January 2017 to March 2019 were selected. PCR method was used to detect and identify and genotyping high.risk human papillomavirus in patients， and the infection characteristics in this region were statistically analyzed.Results：Among the 6797 patients， 1133 patients （16.67%） were infected with the high.risk human papillomavirus， and the top three genotypes were mainly HPV16 34.07% （386/1133）， HPV58 14.56% （165/1133） and HPV52 12.44% （141/1133）. 887 patients （78.29%） were infected with a single type. Compound infection accounted for 246 cases （21.71%）， and cases with at least HPV16 and/or HPV18 highly correlated with cervical cancer accounted for 40.33% （457/1133） of the positives. There was no statistically significant difference in the age distribution of HPV infection rate （P>0.05）. Patients with persistent infection within 3 years accounted for 9.36% （35/374） of the positive population. Conclusion： Screening of high.risk HPV infection in patients with timely treatment of infection and prevention of cervical cancer has a positive effect.

[Key words]High.risk human papillomavirus;Persistent infection;Cervical cancer

人乳頭瘤病毒（HPV）是世界范围内极为常见的病毒，也是生殖道感染最常见的病毒[1]。HPV有很多类型，目前已报道的HPV至少有200多种，HPV是通过性传播的，但皮肤与皮肤的生殖器接触也是一种公认的传播方式，大多数性生活活跃的男女都会在生命的某个阶段受到其感染，有些人可能会反复持续感染，一小部分特定类型的HPV持续感染可以发展为宫颈癌。宫颈癌是迄今为止最常见的HPV相关疾病，几乎所有宫颈癌病例都可归因于HPV感染。其中HPV16亚型和HPV18亚型两种亚型的感染导致70%的宫颈癌和宫颈癌前病变。对所有女性来说，HPV感染都有可能发展为慢性癌前病变，进而发展为侵袭性宫颈癌。宫颈癌在免疫系统正常的女性中发展需要15～20年的时间。免疫系统较弱的妇女，如未经治疗的艾滋病毒感染者，只需5～10年。

宫颈癌是生活在欠发达地区的妇女中第二常见的癌症，2018年宫颈癌的新发病例数是57万，死亡病例数是31.1万，欠发达地区分别占84%、85%。欠发达地区自身要加强宫颈癌的预防和治疗意识。宫颈癌的综合控制包括一级预防（HPV疫苗接种）、二级预防（癌前病变的筛查和治疗）、三级预防（侵袭性宫颈癌的诊断和治疗）和姑息治疗。其中筛查和治疗30岁以上妇女的癌前病变是一种具有很高成本效益的预防宫颈癌的方法。

本研究旨在通过发布本地区的HPV感染的基础数据，提高未发生性生活的女性HPV疫苗的接种意识、HPV感染的筛查意识、高危HPV亚型的人群的宫颈癌前病变的早诊意识。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年1月至2019年3月在包头市中心医院就医的女性共6797例（不重复计算同一病人）作为研究对象。年龄15～89岁，平均年龄（43.16±11.50）岁。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂 采用ABI stepone plus实时荧光定量PCR仪（美国ABI公司）。高危型人乳头瘤病毒（HPV）核酸测定试剂盒（荧光PCR法）（上海之江生物科技有限公司），货号：Z.TD.0031.02，可检测高危型HPV包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、82在内的15种亚型。

1.2.2 标本采集 嘱就诊者采样前3d内不要作阴道冲洗、阴道用药，禁止性行为。用试剂盒配套的宫颈脱落细胞采集器（宫颈刷）进行采样。做好标本唯一性标识，并保持细胞保存液管直立放置。保存条件：于4℃保存，在48h内进行检测。-20℃条件下保存1周内检测。

1.2.3 DNA提取 取含有宫颈上皮细胞的细胞保存液1.0mL按照试剂盒提取说明书步骤提取。

1.2.4 基因分型、扩增 按照试剂盒说明书进行，循环参数如下：94℃×2min;93℃×10s-62℃×31s，循环40次;单点荧光检测在62℃。反应体系40μL。结果判定：严格按照说明书进行。

1.3 统计学分析

采用IBM SPSS Statistics 21.0统计学软件进行数据分析，组间计量资料的比较采用t检验;感染率等计数资料以例数或百分比表示，样本率的比较采用χ2检验;年龄危险因素分析采用二元Logistic回归模型。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV感染及各亚型分布情况

6797例女性共检出HPV感染者1133例，HPV感染率为16.67%，高危亚型的前三位主要为HPV16型34.07%（386/1133），HPV58型14.56%（165/1133）和HPV52型12.44%（141/1133）。单一亚型感染占78.29%（887/1133），多重感染者占21.71%（246/1133）。246名多重感染者中，二重亚型感染191例，三重亚型感染39例，四重亚型感染13例，五重亚型感染1例，六重亚型感染2例。单一亚型感染者中，感染率最高的3种亚型分别为16型31.91%（283/887）、58型11.39%（101/887）和52型8.79%（78/887）。见表1。

2.2 不同年龄段女性人群HPV感染分布情况

本研究将年龄分为小于30岁组、30～40岁、41～55岁、大于55岁四组，各年龄段HPV阳性率及阳性构成比见表2。从表2可以获知，各年龄组间HPV感染率无统计学差异（P>0.05），HPV阳性患者主要集中在30～55岁，占阳性患者总数的70.87%。详见表2。

2.3 持续感染状态的分析

1133例HPV感染患者中，374例患者在2年后进行了复查，复查结果显示，其中284例（75.94%）HPV感染患者已转为阴性，90例（24.06%）患者处于持续感染的状态且感染的HPV亚型与首次检查结果相比，均存在相同亚型，呈现持续感染状态的90例患者在距离首次检测3年时再次复检发现有35例（9.36%）患者仍然处于感染状态，且35例患者检查结果与首次存在相同的亚型。见图1。35例持续感染状态的患者的病理结果显示，有7例已发生宫颈癌前病变（宫颈上皮内瘤样变，子宫颈/体平滑肌瘤等）。

3 讨论

高危HPV亚型感染已证实为宫颈癌的明确病因，特别是HPV16亞型和HPV18亚型可以归因于70%以上的宫颈癌的发生，HPV检测能有效判断子宫颈癌发病的风险，在预防宫颈癌的发生HPV感染受到了高度的重视[2]。

我国是最大的发展中国家，HPV的监测结果显示，不同的地区HPV感染亚型及感染率也不尽相同，这可能是由于检测方法不同、研究对象和地区差异造成的[3]。广州地区相关报道显示HPV的感染率为28.43%，主要的感染亚型前三位分别是HPV16、52、58。南京市妇幼医院报道显示HPV感染率33.47%，常见亚型分别为HPV16、58、52，而南京六合地区与其研究结果差异很大，HPV的感染率为19.26%，感染较高的高危亚型依次为HPV52、16、53[4.5]。重庆地区HPV感染率为16.91%，HPV亚型感染率最高的依次为HPV52、16、18[6];本研究人群地点主要集中在包头市及其周边的旗县地区，6797例女性共检出HPV感染者1133例，HPV感染率为16.67%，感染率最高的3种亚型分别为HPV16、58、52。从以上数据可见，HPV在人群中的感染率变化较大，但是高危亚型的前三位的分布却基本相似，主要是HPV16、52、58，接近半数的患者含有HPV16和（或HPV18）的感染，因70%的宫颈癌可归因于HPV16和HPV18的感染，所以本地区HPV的感染应给予高度重视。HPV疫苗能很好地阻断HPV感染降低宫颈癌的发生率[7.10]。现有的HPV疫苗主要针对未发生HPV感染的女性人群，主要是未开始性生活的人群，主要有二价（HPV16、18），四价（HPV16、18、6、11），九价（HPV16、18、6、11、31、33、45、42、58）疫苗，大力普遍推广HPV疫苗的接种势在必行。

由于无法接受良好的性观念教育及卫生水平医疗水平的限制，欠发达国家HPV感染负担尤为严重，全球的宫颈癌患病例数及死亡例数仅欠发达地区就占80%以上。加强欠发达地区HPV感染的监测，对全球制定宫颈癌的预防措施极其重要。就宫颈癌的三级预防措施而言，抗HPV感染在一级预防即HPV疫苗接种和二级预防即早期筛查中的角色极其重要[11.12]。本研究就含有HPV16亚型和（或）HPV18亚型的感染专门做了分析，单一感染中HPV16型占31.91%，HPV18型占5.86%，即37.77%的HPV单一亚型感染人群存在HPV16、18型的威胁，双重或多重感染分析显示接近半数的人群含有HPV16、18型的感染。

目前对于HPV的感染年龄有不同的观点[5]，笔者对本地区感染人群进行了年龄分组并做二元logisc回归分析发现，各年龄组间差异无统计学意义。由于就诊者基本都是存在某些妇科问题的人群，所以除了分析不同年龄组的HPV感染率，分析HPV阳性感染者的阳性构成比也非常重要，分析发现约70%的HPV阳性感染者在30～55岁。

HPV持续感染的分析对于宫颈癌的发生必不可少[13.15]，本研究发现，正如报道的那样，90%以上的HPV感染可自行清除，本地区20%以上的阳性感染人群呈现了持续感染的趋势。

总之，本地区高危HPV感染的形势比较严峻，做好HPV感染的卫生宣传教育，并加强HPV感染的筛查，加强女性人群的疫苗接种意识，对遏制宫颈癌及其他相关疾病的发生至关重要。

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