芍药甘草汤及其拆方对超高温环境大鼠Ach、PGE2和HSP70 含量的影响*

★ 左铮云** 吴莹莹 王琳 刘春花 王炳志 姚凤云***

（江西中医药大学中医学院 南昌 330004）

高温作业是当前从事农业、建筑业、环卫、炼油、交通、冶炼、炼焦、石油地质勘探等众多行业群体不可回避的现实问题［1］。然而，众多研究资料表明，高温作业可引起体温、代谢、消化系统、循环系统等多方面的损害，严重的可危及生命［2-4］。如何预防或降低高温环境对高温作业者的损害，维护生命的健康与完美，成为各国领导人、管理者、科学家以及广大劳动者共同关注的突出问题［5］。芍药甘草汤是汉代医家张仲景所创造的“酸甘化阴”配伍的代表方剂，“酸甘化阴”是方剂性味配伍中五味配伍法之一，现代研究表明，酸甘化阴法可以有效补充阴精，减缓阴精的亏耗，甚至对于延长寿命也有着重要意义［6］。本课题组研究发现芍药甘草汤及其拆方能降低高温环境下大鼠的死亡率，并选择Ach、PGE2、HSP70 为主要评价指标，对芍药甘草汤“酸甘化阴”配伍耐高温机理进行探讨。

1 材料

1.1 动物 SPF 级SD 雄性大鼠，7～8 周龄，购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，合格证号：SCXK（湘）2013-0004。

1.2 药品 白芍、甘草均购自北京同仁堂（亳州）饮片有限公司，产地分别是安徽、内蒙古。 批号分别为：301003383P、401133319P。

1.3 主要试剂 大鼠Ach、PGE2、HSP70 酶联免疫（ELISA）试剂盒，均购自武汉优尔生科技股份有限公司，批号为L171109660、L171013561、L171109692。

1.4 主要仪器 电子分析天平（型号为BT-25-S），赛多利斯科学仪器公司生产；漩涡混合器（型号为XW-80A），上海青浦泸西仪器厂生产；智能型人工气候箱（型号为RXZ），宁波江南仪器公司生产；多样品组织研磨机（型号为Tissuelyser 24），上海净信科技生产；酶标仪（型号为Chromate4300），美国Awareness 公司生产；煎药壶（型号为A7），齐家电器有限公司生产；低温离心机（型号为CT14RD），上海天美生化仪器设备工程有限公司生产。

2 方法

2.1 实验动物分组 SPF 级SD 雄性大鼠75 只，在常温（23±2）℃环境适应饲养一周后，按体重随机分为5 组，即常温正常组、高温正常组、芍药甘草汤组、单味白芍组和单味甘草组，每组15 只。

2.2 饲养环境 实验动物分组后均饲养于人工气候箱，高温组仪器条件设置：每天上午9～10 点温度从30℃升至36℃，10～15 点从36℃升至39℃，其它时间段饲养温度均控制在（31±1）℃，湿度为55%；常温组饲养温度为（23±2）℃，湿度为45%，昼夜交替光照，24h 为一个循环。

2.3 实验方案 各组动物分别置于“2.2”环境饲养，每天上午9 时分别灌胃给予各组动物相应的药物1 次，芍药甘草汤组、单味芍药组、单味甘草组给药剂量分别为2.16g/kg、1.08g/kg、1.08g/kg，给药体积均为10mL/kg，每3d 称量一次体重，常温正常组和高温正常组均给予等体积的纯净水。在连续给药/水13d 后参照文献方法处理动物并采集血清、脑、心、肝组织［5］，分离血清及组织匀浆上清液，按照ELISA 试剂盒说明书检测Ach、PGE2、HSP70含量。大鼠处理前禁食但不禁水14h。

2.4 统计学分析 采用SPSS 20.0 软件对实验数据进行统计学分析，实验数据计数资料以表示。两样本间比较采用独立样本t 检验，无序分类资料采用卡方检验Fisher 精确概率法，以P＜0.05表示差异显著，P＜0.01 表示差异极显著。

3 结果

3.1 芍药甘草汤及其拆方对超高温环境大鼠存活情况的影响

表1 芍药甘草汤及其拆方对大鼠存活情况的影响 只（%）

由表1 可知，与高温正常组相比，芍药甘草汤及其拆方组大鼠死亡率均有不同程度降低，死亡率从低到高依次为单味甘草组26.67%、芍药甘草汤组33.33%和单味白芍组46.67%。五组大鼠存活情况比较采用卡方检验，结果显示P＜0.01（P=0.008，t=13.388），说明五组存活情况比较有差异，且差异极显著。

3.2 芍药甘草汤及其拆方对超高温环境大鼠血清Ach、PGE2含量的影响

表2 芍药甘草汤及其拆方对大鼠血清Ach、PGE2含量的影响pg·mL-1

由表2 可知，在超高温环境下，大鼠血清Ach和PGE2含量均呈现上升趋势，其中以Ach 上升的幅度尤为显著（P＜0.01）；各给药组对高温所致大鼠血清Ach 的升高无明显的对抗作用，而对血清PGE2水平的上升均呈现协同作用，其中以芍药甘草汤组和单味白芍组的增高幅度尤为突出（P＜0.05，P＜0.01），单味甘草组PGE2含量虽略有升高，差异无统计学意义（P＞0.05）。

3.3 芍药甘草汤及其拆方对超高温环境大鼠脑、心、肝组织HSP70 含量的影响

表3 芍药甘草汤及其拆方对大鼠心、肝组织HSP70含量的影响 ng·mL-1

由表3 可知，在超高温环境下，大鼠脑、心、肝组织HSP70 含量均呈现上升趋势，其中以脑、肝组织的上升幅度尤为显著（P＜0.05，P＜0.01）；各给药组对超高温所致脑组织HSP70 的升高均有显著的对抗作用（P＜0.05，P＜0.01），但对肝组织HSP70 的升高均无下调趋势，而单味甘草组则可显著下调心肌HSP70 水平（P＜0.01）。

4 讨论

芍药甘草汤始载于《伤寒论》太阳病篇，该方由芍药、甘草两味药组成，是“酸甘化阴”的代表方剂。“酸甘化阴”是通过酸甘药物的配伍以补阴补血、生津补液的一种配伍方法［7］，这里的“阴”即血和津液。当处于高温环境下，机体通过散热来维持机体体温的相对恒定，人体散热主要通过皮肤来完成的，环境温度愈高，人体出汗则愈多［8］。而汗是由人体阳气蒸化阴液所化生［9］，出汗越多，阴液损耗就越大，这与芍药甘草汤可治疗营阴不足之证［10］相符。

在高温环境下，机体因热平衡和水盐代谢紊乱等因素造成体温调节异常，体温调节由中枢和外周神经系统共同协作完成［11］。本课题前期研究表明，高温条件下，Ach 作为一种外周神经递质，可支配心血管功能，使全身血管扩张以达成散热目的［12］。此外，Ach 还有心肌保护作用［13］。本研究结果进一步表明，超高温环境可导致大鼠血清Ach 含量显著上升，但各给药组对其上升均无明显的调节作用。

PGE2是最强的中枢发热介质之一［14-15］，下丘脑视前区（POAH）为主要调节体温变化的中枢区域。PGE2与POAH 区域的EP3 受体结合，继而引起发热［16］。同时，PGE2也是重要的炎症介质，其还可通过上调具有神经保护作用的热休克蛋白（HSPs）而发挥神经保护作用［17］。HSPs 是细胞在受到损伤时细胞内产生的一组具有维持细胞功能稳定的蛋白质［18］，由热和各种有害刺激诱发，其中HSP70 对热的反应最为敏感。机体或细胞受到应激刺激时，HSP70 合成增加， 使机体或细胞受到的耐热性提高，损伤减轻，恢复速度加快，因此HSP70 水平升高可以暂时保护整个器官免受缺血性损伤［19-20］。本研究结果显示，超高温可使大鼠血清PGE2、脑、心、肝组织HSP70 含量均呈现一定的上升趋势，且各给药组对PGE2的上升均呈现不同程度的协同作用，其中芍药甘草汤组和单味芍药组的协同作用尤为显著（P＜0.05，P＜0.01），而各给药组对超高温所致脑组织HSP70 的升高均有显著的下调作用（P＜0.05，P＜0.01），但均对肝组织HSP70 的升高均无下调趋势，单味甘草组则可显著下调心肌HSP70 水平（P＜0.01）。综上所述，课题组认为，芍药甘草汤及其拆方耐大鼠高温死亡机制可能与其刺激机体产生某种类似于HSPs 类物质或通过上调血清PGE2水平增强原有HSP70 作用有关，其结果有待进一步验证。