RP-HPLC测定兰索拉唑制剂中主药及有关物质的含量

刘丹花 高青

【摘要】目的 为更好地测定兰索拉唑制剂中主药及有关物质含量，可采用RP-HPLC法。方法 ShimpackC18（5μm，250 mm×4.6 mm）为色谱柱、甲醇-水-三乙胺-磷酸为流动相、UV 284 nm为检测波长、1 mL·min- 1流速。结果 在16～320 μg·mL- 1（r= 0.9999）内兰索拉唑所取得线性关系较为良好;兰索拉唑制剂（注射剂）与兰索拉唑肠溶片药物的平均回收率与RSD指标参数分别为100.0%与1.08%、99.71%与1.03%。结论 RP-HPLC法的优势主要体现在操作简单、快速、准确、具有良好重现性，在注射用兰索拉唑和肠溶片中有关物质与主药含量的测定与分离中具有很高的应用价值，值得进行大力推广与应用。

【关键词】RP-HPLC测定;兰索拉唑制剂;主药;有关物质;含量

【中图分类号】R917 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095.6681.2020.5..02

兰索拉唑是第二个质子泵抑制类抗溃疡药物，于1992年正式投放于法国市场，国内剂型主要有两种，即胶囊剂、片剂，规格同样有两种即15、30 mg，注射用已经获得FDA批准，但是国内市场上尚未进行销售[1]。为确保国内临床用药的需求得到充分满足，现对注射用与兰索拉唑肠溶片进行了研究，为更好地控制其治疗可使用兰索拉唑含量测定高效液相色谱法，这种是一种操作简单、准确、快速、重现性好的方法，能够更好地分离、测定相关检测对象物质组成、主药的具体含量值。

1 仪器和试药

仪器：本次试验使用的设备包括高效液相色谱仪、紫外检测器及工作站。

试药：准备兰索拉唑对照品与该药物的注射剂、口服肠溶片，准备的甲醇包括色谱醇、分析醇。

2 方法与结果

2.1  色谱条件和行为

（1）色谱柱：Shim-packC18;（2）流动相：甲醇-水-三乙胺-磷酸，1.0 ml/min-1;（3）检测波长：284 nm;（4）进样量20 uL。理论塔板数应大于1500，具体计算时需要严格按照兰索拉唑峰。

2.2  制备对照品、供试品溶液

（1）在棕色量瓶50ml放置精密称取的40 mg对照品，溶解时可以加入甲醇，稀释至刻度，充分摇匀后备用[2]。

（2）取5瓶注射用兰索拉唑、10片去肠溶衣的兰索拉唑肠溶片，将内容物倾出以后研细，进行准确的称量，在25 mL棕色量瓶中放置，溶解时加入流动相并稀释到刻度，充分摇匀后取精密量2 mL，同样在25 mL棕色量瓶中放置，组委供试品1、2溶液备用;另外，关于不含主药空白辅料的制备可分别根据注射用与肠溶片处方比例、制备工艺进行制备，关于空白供试品1、2溶液的制作可严格按照“供试品”项下方法。

2.3  考察线性关系

对照品溶液分别精密程度0.5 mL、2.0 mL、、4.0 mL、5.0 mL、6.0 mL、10.0 mL，在25 mL棕色量瓶中分别放置，稀释到刻度，摇匀后便可得到相应系列溶度;然后分别注入液相色谱仪20 uL，以此将色谱图详细记录下来，关于标准曲线地绘制分别取浓度为横坐标、峰面积为纵坐标。经结果可知，浓度与色谱峰面积在16～320 ug·mL-1内的线性关系满足相关要求

2.4  精密度试验

从兰索拉唑对照品中，取出一部分溶液进行进样处理（重复），溶液取出量控制为20 uL，之后进行峰面积积分制测定时，要求严格根据上述色谱条件，精密度较好的条件为RSD=0.90%（n=6）[3]。

2.5  重复性试验

在同一批注射用、肠溶片中进行精密的称取，关于溶液的制备需要严格按照供试品1、2方法，按照对照品同样的方法进行操作，20 uL进样，认真记录色谱图，其含量的计算需采用外标法，注射用药物、口服用肠溶片两种药物的RSD分别为0.83%、0.90%，结合该结果说明该试验效果好。

2.6  辅料干扰试验

待试验条件最终确定以后，各取20 uL空白供试品1、2溶液，为记录色谱图可将液相色谱仪注入。研究发现，对于兰索拉唑峰辅料不会产生干扰作用，主峰和杂之峰之间具有良好的分离度。

2.7  最低检测限

试验条件确定后，在测定最低检测限进时可根据信噪比（S/N=3）进行，结果可知：在50 ng·mL-1浓度、20ul进样条件下，其峰信号是噪音的3倍，即最低检测限=1 ng。

2.8  回收率试验

称取10瓶处方量辅料，在研体钵中放置、摇匀后研细，然后取10瓶处方量的80%、100%、120%，加入，制作浓度不同的模拟样品，即低、中、高，上述细粉取适量，放置在25 mL棕色量瓶中，通过加入适量甲醇并振荡的方式来溶解主药，稀释到刻度后摇匀，作为供试品溶液;另外，在研钵中放置肠溶片10片处方量辅料，以下同注射用回收率试验制备。取上述两种溶液进样各20 uL，关于项下条件的测定需严格根据含量进行，对回收率进行计算，以此注射用的平均回收率为100.0%、RSD为1.08%，肠溶片尾99.63%、1.03%[4]。

2.9  測定样品含量

对照溶液和供试品1、2溶液各取20 uL，注入液相色谱仪，将色谱图记录下来，关于其含量的计算可采用外标法，结果如下表1。

2.10  检测相关物质

精密称取适量的注射用、肠溶片，在25 mL棕色量瓶中放置，稀释溶解到刻度、溶解，当作供应品溶液;分别取1 mL，在100 mL棕色量瓶中放置参照量瓶刻度值进行溶液稀释处理，待该项工作结束后可轻轻摇匀量瓶，于对照溶液中取出适量溶液，取出量控制为20 uL，使用液相色谱仪对这些溶液作以处理，在设备灵敏度符合检查要求的情况下进行相关物质检查，要求主成分峰峰高参考满量程标准，为其20%、不超过25%，然后各称取20 uL在液相色谱仪中注入，将色谱图到保留主成分峰的3倍记录下来。如果色谱图中存在杂质峰，则需要对各杂质峰面积进行科学的量取，对有关物质量进行科学的计算，如上表1。

3 讨 论

为有效分离兰索拉唑和辅料，可通过HPLC建立的方式，二者之间的分离度不得小于1.5，具有较高的色谱柱效[5]。本品与色谱峰面积具有良好线性关系的浓度范围为16～320 ug·mL-1，经含量测定所取得回收率较高，且重现性良好，辅料和有关物质均不会对其产生干扰，在临床上所具有的可靠性、准确性与灵敏度较高，有助于提高相关制剂质量。

参考文献

[1] 李娇娜，李   丹，赵春杰.RP-HPLC法测定人血浆中兰索拉唑肠溶片血药浓度[J].药物分析杂志，2009，29（03）：395-398.

[2] British Pharmacopoeia Commission.British Pharmacopoeia[S].2017version.London：The Stationery Office，2017：1-968.

[3] British Pharmacopoeia Commission.British Pharmacopoeia[S].2017 version.London：The Stationery Office，2017：1-968.

[4] 刘小均，罗军波，李培海，等.RP-HPLC加校正因子的主成分自身对照法测定盐酸多奈哌齐口腔崩解片中有关物质的含量[J].中国药房，2015，26（12）：1702-1706.

[5] 余永华，马敏康，杨仲杰，等.加校正因子的主成分自身对照法测定培哚普利片中有关物质的含量[J].中国现代应用药学，2017，34（10）：1427-1431.