锡林郭勒盟绵羊弓形虫病血清学调查

闫鑫磊，张宏博，韩汶荧，高智慧，汪洋，何雨

(1. 内蒙古农业大学食品科学与工程学院，内蒙古 呼和浩特 010018；2. 内蒙古自治区食品检测检验中心，内蒙古 呼和浩特 010090；3. 内蒙古科鸿科技服务有限责任公司，内蒙古 呼和浩特 010010)

刚地弓形虫(Toxoplasmagondii，T.gondii)是一种重要的人畜共患寄生虫，其对宿主没有选择性，能够寄生于几乎所有温血动物的有核细胞，并给人和动物造成严重的危害[1-3]。全球约三分之一的人口感染弓形虫，我国人群弓形虫抗体阳性率约为10.00%[4]。人感染弓形虫可导致全身器官和组织异常，尤其对孕妇和新生儿危害更为严重[5-6]。动物感染会导致动物生殖障碍及流产，给畜牧业造成巨大的经济损失[7-8]；同时弓形虫可通过动物性产品直接或间接地传播给人类，也对居民食品安全和公众健康构成了严重威胁[9-10]。

内蒙古自治区是畜牧业大省，羊肉产品是当地居民主要的肉食品之一，并以其优良的肉质畅销各地。然而羊弓形虫感染不仅影响当地畜牧业发展，还会对消费者的食品安全造成威胁。牛羊等反刍动物感染主要通过摄入被含有卵囊的猫粪便污染的草料、牧草和饮水[11-12]，其中羊血清阳性率明显高于牛[13-14]。锡林郭勒盟作为内蒙古重要的羊肉产品基地，目前针对该地区绵羊弓形虫感染的系统报道较少。本研究深入锡林郭勒盟8个旗县，以绵羊为研究对象展开弓形虫感染的血清学检测，应用间接ELISA方法检测其弓形虫感染率，以期为保障居民食品安全及家畜弓形虫病的防控提供参考。

1 材料与方法

1.1 样品采集及血清分离

绵羊血液样品采集于锡林郭勒盟东乌珠穆沁旗、西乌珠穆沁旗、苏尼特左旗、苏尼特右旗、太仆寺旗、正镶白旗、多伦县、正蓝旗等8个旗县。样品以5 000 r/min离心15 min，取上清转入经高压灭菌的1.5 mL离心管中，编号后于-20 ℃冰箱保存待用。

1.2 试剂

绵羊弓形虫间接ELISA抗体检测试剂盒，购自泉州市睿信生物科技有限公司。

1.3 试验方法

每次试验均设空白对照1孔，阴性对照、阳性对照各3孔，其余为待检样品孔。提前将需要的板条在室温中平衡20 min；在阴阳对照孔中加入试剂盒中的阴、阳性对照血清各50 μL，样本孔中加入分离的血清上清液10 μL后，再加入样本稀释液40 μL，37 ℃恒温箱中静置45 min；其后将孔内液体倒掉，每孔加入350 μL洗涤液，洗板机洗涤1 min，重复洗涤5次；每孔中加入HRP标记的检测抗体100 μL，封板膜封孔后于37 ℃恒温箱孵育30 min。孵育结束后倒掉液体，每孔加入350 μL洗涤液，洗板机洗涤1 min，重复洗涤5次。其后每孔加入底物A、B各50 μL，37 ℃度避光孵育15 min。每孔中加入50 μL终止液，15 min内在450 nm波长处检测各孔OD值。

1.4 结果判定

在阳性对照样本OD值≥1且阴性对照样本OD值≤0.15的条件下，判定结果的临界值等于阴性对照样本的平均OD值加0.15。若被测样的OD值大于临界值，被测样为阳性；若被测样的OD值小于临界值，被测样为阴性；若被测样的OD值等于临界值则对该样品进行二次测定。

1.5 数据统计与分析

利用Excel 2007建立数据库，SPSS 23.0进行卡方检验分析，数据以感染阳性率表示。

2 结果与分析

2.1 锡林郭勒盟各旗县绵羊弓形虫病流行病学调查情况

从锡林郭勒盟8个地区共采集样品624份，经弓形虫抗体检测，总体阳性率为12.02%。高于总体阳性率的有2个地区，其中最高为苏尼特左旗(20.12%)；低于总体阳性率的有6个地区，其中最低为正蓝旗(5.00%)。具体结果见表1。

2.2 不同性别绵羊弓形虫病流行病学调查情况

由表2可知，所检测的261份雄性绵羊血清中，检测结果为阳性的有39份，阳性率为14.94%；363份雌性绵羊样品中，阳性样品数为36份，阳性率为9.92%。经卡方检验分析，二者无显著性差异(P>0.05)。

表1 弓形虫血清抗体阳性率检测结果

地区样品数量阳性数量阳性率/%东乌珠穆沁旗6669.09西乌珠穆沁旗70811.43苏尼特左旗1693420.12苏尼特右旗55712.73太仆寺旗7068.57正镶白旗5658.93多伦县5858.62正蓝旗8045.00合计6247512.02

表2 不同性别绵羊弓形虫感染血清学检测结果

地区雄性雌性样品数量阳性率/%样品数量阳性率/%东乌珠穆沁旗329.38348.82西乌珠穆沁旗3912.82319.68苏尼特左旗5228.8511716.24苏尼特右旗3112.902412.50太仆寺旗3312.12375.41正镶白旗2213.64345.88多伦县2611.54326.25正蓝旗267.69543.70合计26114.943639.92

2.3 不同饲养方式绵羊弓形虫病流行病学调查情况

由表3可知，在所检测的435份放牧绵羊样品中，弓形虫血清抗体阳性率为8.74%；舍饲绵羊的阳性率为19.58%。对二者阳性率进行卡方检验，显示差异极显著(P<0.01)。

表3 不同饲养方式绵羊弓形虫感染血清学检测结果

地区放牧舍饲样品数量阳性率/%样品数量阳性率/%东乌珠穆沁旗248.33429.52西乌珠穆沁旗7011.4300.00苏尼特左旗4411.3612523.20苏尼特右旗339.0922 18.18太仆寺旗708.5700.00正镶白旗568.9300.00多伦县588.6200.00正蓝旗805.0000.00合计435 8.7418919.58**

注：**表示合计组阳性率差异极显著(P<0.01)。下同

2.4 不同年龄绵羊弓形虫感染血清学检测

以12月龄及以上的绵羊为成年羊，12月龄以下为未成年羊。结果显示成年羊的阳性率为15.20%；未成年羊的阳性率为8.16%。成年的绵羊弓形虫血清抗体阳性率大于未成年绵羊，且二者差异极显著(P<0.01)，详细结果见表4。

表4 不同年龄绵羊弓形虫感染血清学检测结果

地区12月龄以下12月龄及以上样品数量阳性率/%样品数量阳性率/%东乌珠穆沁旗345.8832 12.50西乌珠穆沁旗326.2538 15.79苏尼特左旗9313.9876 27.63苏尼特右旗306.6725 20.00太仆寺旗283.5742 11.90正镶白旗195.2637 10.81多伦县355.7123 13.04正蓝旗110.0069 5.80合计282 8.1634215.20**

2.5 不同月份绵羊弓形虫病流行病学调查情况

由表5可知，全年每个月份均有阳性样品检出。其中8月感染率最高(20.83%)，1月最低(3.57%)。综合分析发现春冬季节感染率较低，夏秋季节较高的趋势，但各月份间感染率不存在显著性差异(P>0.05)。

表5 不同月份绵羊弓形虫感染血清学检测结果

月份样品数量阳性数量阳性率/%12813.5725359.43332412.547068.5756269.6862229.097811113.588481020.8391051615.241036616.67115359.43123438.82合计6247512.02

3 讨论

本研究利用间接ELISA方法检测了锡林郭勒盟8个旗县共624份绵羊血样。结果显示，弓形虫血清阳性率为12.02%。与已报道的国内[15-17]和自治区其他地区[18-19]调查结果相比处于相对较高水平。就研究结果而言，该地区绵羊弓形虫感染情况需引起相关单位和人员重视。

结果显示舍饲绵羊(19.58%)弓形虫血清阳性率极显著高于放牧绵羊(8.74%)，造成这种情况的原因可能是由于舍饲绵羊饲养密度大，聚集性高，因此易发生群体性感染。同时需要指出的是，本研究所采集的舍饲绵羊样品来自东乌珠穆沁旗、苏尼特左旗、苏尼特右旗3个地区，且大多数采集于苏尼特左旗(125/189)，这是苏尼特左旗样品阳性率(20.12%)高于其他旗县的一个重要原因。此外本研究发现年龄也是造成弓形虫感染的风险因素之一，研究数据显示12个月龄及以上绵羊弓形虫感染率(15.20%)高于12个月龄以下绵羊(8.16%)，且二者呈极显著差异。这可能是由于随着年龄增加，动物与外界环境接触时间较长，接触弓形虫卵囊的可能性随之增加，因此感染几率较大。最后研究发现锡林郭勒盟不同月份绵阳弓形虫血清阳性率呈现差异，各月间虽无显著性差异，但可明显看出春冬季节感染率低，夏秋季节高的趋势，说明秋冬季节为弓形虫感染的高发时期，提示在此期间相关人员应加强该疫病的防控力度。

总之，本研究结果为地区性动物疫病防控、畜牧业发展及居民肉类食品安全保障提供了一定数据参考。锡林郭勒盟草场面积广大，绵羊养殖量很大，但本研究样本量有限，因此上述结果仍具有一定的局限性。为获得更加准确的数据，扩大采样范围及采样量是今后研究努力的方向。