高效液相色谱法测定C16-18醇聚氧乙烯醚中乙酸含量

沙 美

(南京威尔药业股份有限公司,江苏 南京 210042)

脂肪醇聚氧乙烯醚是最重要的一类非离子表面活性剂。分子中的醚键不易被酸、碱破坏，所以稳定性较高，水溶性较好，耐电解质，易于生物降解，泡沫小，该类表面活性剂大都以环氧乙烷为乙氧基化试剂，以氢氧化钠或者氢氧化钾为催化剂[1]，在后续反应的精制过程中，会用到乙酸来中和多余的催化剂，使产品本身的性质保持在中性或弱酸性，成品中会残留少量的乙酸，作为杂质会影响到产品质量，常规乙酸方法的测定会采用气相色谱法[2]，但可能会遇到峰型不佳或者检测灵敏度偏低的情况，也有文献报道采用高效液相色谱法[3]，但流动相为甲醇-缓冲液系统，检测波长为210 nm，因为甲醇的截止波长接近210 nm，所以我们改用乙腈和磷酸盐缓冲系统，建立了辅料C16-18醇聚氧乙烯醚中乙酸的测定方法，该方法灵敏度和准确度较高。

1 仪器与试剂

仪器：Thermou3000高效液相色谱仪

试剂：乙酸(ACS，色谱级，批号LOT27Y1709DK)，乙腈(ACS，色谱级，批号LOT45Y1708BR)，磷酸二氢钾(分析纯)，磷酸(分析纯)，C16-18醇聚氧乙烯醚(南京威尔药业股份有限公司，批号20190701k)

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：CAPCELL PAK C18(4.6 mm*250 mm，5 μm)；流动相A：乙腈-pH3.0磷酸盐缓冲液(5∶95)；流动相B：乙腈；柱温35 ℃；进样量20 μl；流速1.0 mL·min-1；检测波长210 nm，流动相梯度见表1。

表1 流动相梯度表

2.2 溶液配制

2.2.1对照品溶液

取乙酸适量，加水溶解并定量稀释至浓度为25 μg/ml的溶液，作为对照溶液。

2.2.2供试品溶液

取本品100 mg，精密称定，置20 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1专属性试验

取空白溶剂和乙酸对照溶液各20 μl，分别注入液相色谱仪，结果空白溶剂在乙酸出峰位置没有干扰。

2.3.2检测限和定量限

取乙酸溶液逐级稀释至S/N约为10作为定量限，S/N约为3作为检测限，结果见表2。

表2 乙酸检测限和定量限

乙酸的定量限浓度为0.25 μg/ml，相当于0.005%可以定量，检测限浓度为0.125 μg/ml，相当于0.0025%被检出。

2.3.3线性范围

分别取浓度约为100 μg/ml的乙酸对照溶液0.5、1.0、2.0、2.5、3.0、4.0、5.0 ml置10 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为不同浓度的对照溶液，分别取不同浓度的乙酸对照溶液20 μl注入液相色谱仪，以浓度C(μg/ml)为横坐标，以峰面积A为纵坐标进行直线回归，结果见表3。

表3 乙酸线性

结果表明：乙酸浓度在5.49～54.90 μg/ml之间时，浓度与峰面积线性关系良好。

2.3.4进样精密度试验

取线性4#溶液连续进样6针，考察进样精密度，结果见表4。

表4 乙酸进样精密度

结果表明乙酸进样的相对标准偏差RSD小于2.0%，说明测定数据间的波动性小，即本方法精密度试验符合要求。

2.3.5重复性

取20190701k批样品适量，精密称定，加水溶解并制成每1 ml含5 mg的溶液，作为供试品溶液，取乙酸适量，精密称定，加水溶解并定量稀释至浓度约为25 μg/ml的溶液，作为对照溶液，按外标法以峰面积计算，平行测定6份，结果见表5。

表5 乙酸重复性

结果表明：该方法的重复性良好。

2.3.6中间精密度试验

不同人员不同时间按照测定方法平行测定6份，结果见表6。

表6 乙酸中间精密度

结果表明：该方法的中间精密度良好。

2.3.7回收率试验

取20190701k样品适量，加水溶解后，按照限度的80%、100%和120%加入一定量的乙酸溶液，每个水平平行操作3份，计算回收量和回收率，结果如下：

表7 乙酸加样回收率

结果表明：该方法测定乙酸，回收率良好。

2.3.8溶液稳定性

取供试品溶液，分别于0、2.5、5、7.5、10和16 h进样，供试品溶液中乙酸的峰面积变化见表8。

表8 乙酸溶液稳定性

结果表明：供试品溶液室温放置16h稳定。

3 讨论

该方法测定C16-18醇聚氧乙烯醚中的残留的乙酸，准确可靠，可以应用到同类辅料的项目中，具有一定的实用意义。