骨康灵液在动物骨折愈合中对VEGF 影响的研究

王琼仙

（昆明医科大学实验动物学部，云南 昆明）

0 引言

骨康灵液是昆明医学院科研中试中心的院内制剂，其生产得到了云南省药监局的批准。骨康灵液的主要药物组成有续断、桃仁、当归、三七等，将所有药物进行炮炙加工，并将其粉碎，并过筛120 目，之后使用浓度为70%-95%的酒精进行浸泡过滤，将其中的有效成分进行提取制备出，该药是一种外用的药液[1,2]。骨康灵液的制备充分显示了传统医学与现代医学的结合，将中西医充分结合起来。其效果主要是接骨生新，能够有效地促进骨折的愈合，发挥出活血化瘀、消肿止痛、舒筋壮骨的作用，同时有清心安神及行气止痛的功效[3,4]。该药的适用范围较广，对于外伤性闭合骨折、跌打损伤、关节红肿等症状均有显著的效果，能够有效地促进筋络的疏通，促进骨组织生新[5,6]，骨康灵液的批准文号为滇药制字(z)05A02434 号。

骨折需要进行骨修复治疗，其修复与重建是需要新的毛细血管生成，血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)对于内皮细胞增殖有促进作用，能够诱导血管的生成与生长，其参与骨折后组织变化过程[7,8]。中医经典理论云：“肢体伤于外而气血伤于内”，发生骨折后局部的气血出现瘀滞，从而导致全身血液运行不畅，出现淤堵。骨康灵液的主要功能是活血化瘀、消肿止痛，对外伤性闭合骨折及跌打损伤、关节红肿疼痛等有较好的疗效。骨康灵液能够促进筋络疏通，促进骨折软组织生新，利于骨折愈合[9,10]。为了探究骨康灵液在动物骨折愈合中对VEGF 的影响，本研究展开了动物分组实验的对照研究，从而总结出骨康灵液对VEGF 表达的影响及对骨折的修复作用。

1 材料与方法

1.1 仪器与药品

仪器：本部门实验室或是本校校医院提供的普通医用诊断X 摄线机，以及手术需要的一些器械等。

药品：本院原制剂室提供，骨康灵液的批准文号为滇药制字(z)05A02434 号。

1.2 动物的分组

30 只成年SD 大鼠，雌雄各半，随机分为两组。对照组(骨折+95%酒精)与实验组(骨折+骨康灵液)。所用的实验动物均从昆明医科大学实验动物学部购买取得，实验动物质量合格证号：SYSK( 滇)2005-0004，许可证号SCXK( 滇) 2011-0004。

1.3 大鼠动物模型建立与药物治疗

骨折模型的制备：30 只SD 大鼠体重（200±20）g，随机选择右侧股骨逆行穿克氏针固定后造模支架制造股骨中段骨折，以对侧进行对照，对患肢进行X 线照射并观察。对伤口进行缝合，注意在手术后根据大鼠的体重进行青霉素的注射，并进行抗感染治疗，连续治疗3d。

分组及给药：骨折造模成功后，将30 只模型大鼠随机分为两组，对照组( 骨折+95% 酒精)15 只，实验组( 骨折+ 骨康灵液)15 只，骨康灵液治疗组在患处使用药棉或是纱布进行包裹，之后使用小木板进行固定处理，再使用骨康灵液将药棉浸湿，每日的浸湿次数为4 次，保证骨折处的药棉处于湿润状态，这样能够将毛孔充分地打开，促进药物的吸收。分别于骨折给药后第7、15、21、30、42d 各组每次处死动物3只；对处死大鼠的双侧股骨进行完整的解剖，并将骨折周围的软组织及骨痂取出，同时将对侧同水平的股骨组织取出，使用10%甲醛固定，进行组织学观察。

1.4 观察指标

检测VEGF 的表达情况，使用的方法为免疫组织化学方法，将切片的阳性细胞数进行记录。阳性细胞胞浆呈棕色染色，计算高倍视野内染色阳性细胞，计算阳性率。

1.5 统计学分析

2 结果

各组大鼠各时间点骨痂组织VEGF 表达阳性细胞率，见表1、图1。

表1 各组大鼠各时间点骨痂组织VEGF 表达阳性细胞率

表1 各组大鼠各时间点骨痂组织VEGF 表达阳性细胞率

注：*表示实验组与对照组比较具有显著性差异，P＜0.05

图1 各组大鼠各时间点骨痂组织VEGF 表达阳性细胞率

3 讨论

3.1 骨康灵液中的血竭、三七、续断、当归促进骨折愈合的现代药理研究

骨折愈合的修复过程较为复杂，且是一个连续的过程，同时在修复的过程中受到多种因素的影响。有相关的研究显示，在骨折的修复过程中，在早期骨建单位的转换周期缩小，有利于骨痂的再建，增加了骨痂量，从而促进骨痂的生长，在后期对骨细胞的活性有很大的提高作用，使得新的骨痂生成，其原因与其中含有丰富的锰元素及锌元素有很大的 关系。当归在中医接骨方药中运用得较多，在现代药理学中证明其具有显著的活血化瘀的效果，能够改善骨折断端的血液循环情况，加快局部血肿的吸收，从而促进骨折的愈合。

本研究结果显示，对两组大鼠进行X 线照射，分别在第15d、21d、30d、42d 出现差异，且差异有统计学意义(P＜0.05)，在21d 时差异达到最大，这种差异随着时间的延长越来越大。这就表明，在骨折的中后期骨康灵液能够促进软骨钙化，促进骨细胞的增殖，增加了骨痂量，提高了骨强度，对骨折的愈合有很好的促进作用。

3.2 骨康灵液的中医认识

中医学认为，骨折需要经过瘀去—新生—骨合的过程[11,12]。主要的理论支撑包括“肾主骨”和“有伤必有瘀”，与现代药理研究相结合总结出该药治疗骨折的原则：以传统的骨伤理论为指导思想，不断筛选和优化常用的药物。骨康灵液使用的主药为血竭、三七、续断、当归，所要达到的目的为补中寓通、补而不滞，该组方注重补肾，同时还在活血上进行调整。这一组方能够充分体现出中医学的整体观念及标本兼治的思想。其药物组成简单，临床疗效肯定，符合临床用药特点。在临床尤其是基层医院中具有很大的应用价值。