酱腌菜中三氯蔗糖的检测

徐娜 栾竹青 刘志敏

摘 要：实验利用液相色谱质谱联用的检测方法（LV-MS）进行检测，样品经水超声提取，亚铁氰化钾和乙酸锌溶液去除蛋白等杂质后，用甲醇和水作为流动相进行梯度洗脱，资生堂MGⅡC18色谱柱（5 μm，100 mm×2.1 mm）分离，电喷雾负离子模式电离，以395/359为定量离子，395/36为定性离子，进行定性定量分析，方法定量限为0.5mg/kg。

关键词：酱腌菜；三氯蔗糖；液相色谱质谱；联用法

1 引言

三氯蔗糖（Sucralose）是以蔗糖为原料的新型甜味剂[1-2]，由于食用后不会引起血糖波动的特点[3-4]，深受糖尿病患者青睐；同时它也不受温度环境的影响[5-6]，具有高稳定性，商家比较喜欢，在乳制品、水果罐头、酱油、酒类、坚果类以及酱腌菜等食品中均有添加。但它毕竟是一种添加剂，少量添加能改善食品的口感，增加人们的食欲，但如果添加太多，会对味觉造成刺激，因此国家标准GB2760-2014中对不同食品中的三氯蔗糖添加量规定了最大使用量，实验主要研究了酱腌菜中三氯蔗糖的含量，标准中规定其最大使用量为0.25g/kg。

2 实验部分

2.1 材料与仪器

实验试剂：乙腈（德国默克），色谱纯；亚铁氰化钾（天津市恒兴化学制造有限公司）分析纯；乙酸锌（天津市恒兴化学制造有限公司）分析纯；标准品（DR公司），纯度99%。

实验仪器：液相色谱串联质谱仪（Thermo TSQ Quantum），配有电喷雾离子源；分析天平（美国奥豪斯）；冷冻离心机（美国贝克曼）。

2.2 标准溶液的配置

标准品溶液：称取10mg（精确至0.001mg）三氯蔗糖标准品置于100mL容量瓶中，先用少量水溶解，再用水定容至刻度，混匀，配成100mg/L的标准溶液。

标准工作液：分别量取50、100、200、400、600 μL与1000 μL的标准溶液于10mL容量瓶中，加水定容至刻度，配成0.5、1、2、4、6 mg/L和10 mg/L的标准工作溶液。

2.3 样品的处理

准确称取均匀样品1.0g（精确至0.01g）于50mL刻度离心管中，加10mL水涡旋混匀，于超声波中超声30min，冷却，加亚铁氰化钾及硫酸锌各1mL（蛋白质多的样品），8000r/min离心5min，取上清液过0.22μm滤膜，上机检测。

2.4 色谱质谱条件

液相条件：C18色谱柱，流动相为水和甲醇，流速0.3 mL/min，梯度洗脱。

质谱条件：电喷雾离子源，负离子扫描，多反应监测，喷雾电压、鞘气、辅助气、毛细管传输温度以及碰撞能量调节使质谱灵敏度达到最佳。

3 结果

3.1 色谱质谱条件的优化

流动相优化如下：色谱柱为C18，100mm×2.1mm×5μm或相当，柱温30℃；流动相：水与甲醇的具体比例见表1，流速0.3mL/min。

3.2 质谱条件

离子源：电喷雾离子源ESI。扫描模式：负离子扫描。检测方式：多反应检测（MRM）。如表2选择两对定性离子395/359，395/36.0，其中定量离子为395/359，采集时间分别为100ms，碰撞能量分别为14ev和51ev，其相应及灵敏度满足要求。喷雾电压：3500V。鞘气30，辅助气10，毛细管传输温度350℃。

3.3 三氯蔗糖的标准谱图

三氯蔗糖的标准图谱见图1。

3.4 线性方程

配置混合标准系列工作液，浓度为0、0.5、1、2、4、6 mg/L以及10mg/L。分别以选定的定量离子峰面积与浓度绘制标准曲线，三氯蔗糖在0～10mg/L范围内呈良好線性，r2均大于0.99。

3.5 回收率试验

取同一批阴性样品，加入适量的混合标准液，加标量为0.5、1.0、2.0 mg/kg 和5.0mg/kg，每个浓度做6个平行，求其平均回收率，并计算批内相对标准偏差。结果如表3所示。

4 讨论

4.1 方法

目前三氯蔗糖的检测方法多为分光光度法和液相色谱法（配示差和蒸发光散射检测器），但该方法的前处理较麻烦，灵敏度不高，因此选用液相色谱质谱的方法进行检测。

4.2 质谱条件的优化

取100mg/L的标准品用蠕动泵的方式直接进入质谱检测，由于化合物本身含有较活泼的羟基，在负离子源模式下的响应值及稳定性要高于正离子源模式，因此选用负离子源模式；调试离子源的喷雾电压，查看化合物Q1离子图的响应，发现化合物在喷雾电压3500V的条件下，Q1的响应最高，因此设定喷雾电压3500V，根据化合物的响应选取合适的气流量；在Q3的模式下选取响应值较高、较稳定的2个子离子，在MRM模式下，选取各子离子响应最高最稳定的碰撞能量，因此根据选好的各参数设定该方法的质谱条件。

4.3 液相条件的优化

实验过程中选用了甲醇和1‰甲酸水、甲醇和水、乙腈和水、乙腈和1‰甲酸水为流动相，分别进行了等度和梯度洗脱，结果发现甲醇和水梯度洗脱该化合物峰形和响应最好，最稳定，因此选用甲醇和水为流动相，进行梯度洗脱。

4.4 数据分析

实验过程中从不同的超市和市场抽取了20份酱腌菜进行三氯蔗糖检测，结果如表4所示。

从检测数据分析，三氯蔗糖含量最低的是鱼酸菜14.2mg/kg，含量最高的是山地萝卜214mg/kg，但是这些酱腌菜中三氯蔗糖的含量均符合GB2760-2014标准要求，可放心食用。

参考文献

[1]康维民.三氯蔗糖的特性及在食品加工中的应用[J].中国食品添剂，2002（2）：78-80.

[2]Johns，Paul，Dowlati，et al.Determination of acesulfame and sucralose in oral electrolyte maintenance solution by liquid chromatography[J].Journal of AOAC International，2003（1）：79-85.

[3]陈晓霞，游景水，杨祖伟，等.高效液相色谱法测定保健食品中三氯蔗糖的含量[J].食品安全质量检测学报，2015（5）： 1883-1888.

[4]张莉.高效液相色谱法测定饮料中三氯蔗糖的含量[J].中国卫生检验杂志，2007（10）：1784-1786.

[5]熊丽蓓，戴承兵，何倩琼，等.高效液相色谱法测定食品中三氯蔗糖含量的研究[J].上海预防医学杂志，2005（4）：156-158.

[6]王忠一.高效液相色谱法测定果冻中三氯蔗糖[J].食品安全导刊， 2017（4）：77.

通讯作者：徐娜（1980—），女，山东烟台人，本科，工程师。研究方向：食品检测。