王丽, 朱兆云, 王京昆, 曾榕姗, 符德欢,朱高倩, 周培军, 李双良
(1.云南省药物研究所,云南昆明 650111;2.云南白药集团创新研发中心,云南昆明 650111;3.云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室,云南昆明 650111;4.桂林医学院,广西桂林 541010)
乌头药用始载于《神农本草经》,被列为下品[1]。乌头属植物多具有祛风除湿、散寒止痛的功效,可用于风寒湿痹、关节疼痛、心腹冷痛、寒疝作痛、麻醉止痛等[2]。《中华人民共和国药典》1990—2015 年版及《卫生部药品标准》第1 ~19册中含有乌头类的中成药制剂约有340种,占比较大。可见乌头属植物有较高的药用价值和开发前景。毛茛科乌头属植物全世界约有350种,我国约有167种,大多分布于云南北部、四川西部和西藏东部的高山地带[3]。云南省成为乌头属植物的集中分布区域之一,约有66 种,25 变种,4 变形[4]。由于乌头属植物种类繁多,形态分类困难,药材性状相似,市场药材难辨,品种使用混乱。本研究特选取滇产主流药材黄草乌及同属易混淆且文献报道较少或未见报道的马耳山乌头和中甸乌头进行生药学比较,以期为澄清药材混乱,以及进一步开发利用这3种滇产乌头药材提供鉴别依据,现将研究结果报道如下。
1.1 药材实验药材经中国科学院华南植物园杨亲二研究员鉴定,详细信息见表1。
1.2 仪器TS-12A生物组织自动脱水机、BM-Ⅸ生物组织包埋机/包埋冷冻台、QP-Ⅵ生物组织切片机、CS-IV 型生物组织摊片烤片机(湖北省孝感市宏业医用仪器公司);Nikon ECLIPSE E400 显微镜(日本尼康公司)。
1. 3 试剂无水乙醇(分析纯,安徽安特生物化学有限公司);石蜡(56~58 ℃,上海永华石蜡有限公司);TO 型生物透明剂(广西岑溪市松香厂);番红(上海三爱思试剂有限公司);固绿(上海化学试剂站);甘油(上海申博化工有限公司,批号:0605101);中性树胶(无锡市江原实业技贸总公司);水合氯醛(上海善普化工科技有限公司)。
表1 3种乌头药材信息Table 1 The information of the three species of Aconitum materials
2. 1 原植物鉴别通过观察黄草乌、马耳山乌头、中甸乌头原植物形态特征,发现其具有各自独特的形态特征,可作为物种之间的区别点,主要表现在植物生长方式、叶及叶柄的长度等方面。3种乌头属植物形态特征比较见图1、表2。
2. 2 性状鉴别通过观察黄草乌、马耳山乌头、中甸乌头药材性状特征,包括形状、表面颜色、须根疏密、侧根多少、表面纹理等。发现3种乌头药材性状特征存在一定的差异,主要表现在药材表面颜色及侧根数目等方面,其特征比较见图2、表3。
2.3 显微鉴别
2.3.1 块根横切面特征 相关文献报道显示,大多乌头属植物母根、子根的上、中、下段组织特征存在差异[5]。本研究针对黄草乌、马耳山乌头、中甸乌头母根、子根的上、中、下段组织特征进行比较,观察后生皮层、皮层细胞列数,石细胞多少,筛管群有无,形成层是否连续,维管束个数,木质部导管排列形状,髓部是否明显等,结果发现3种乌头在石细胞多少、筛管群有无、维管束个数等方面均存在差异。具体特征见图3 ~8、表4。
表2 3种乌头属药材植物形态特征Table 2 The appearance characteristics of the three species of Aconitum plants
图2 3种乌头药材性状图Figure 2 The characteristics of the three kinds of Aconitum medicinal materials
2.3.2 块根粉末特征 对3 种滇产乌头块根粉末进行水合氯醛及醋酸甘油制片后观察,发现3种滇产乌头块根内含物种类相同,均为后生皮层细胞、石细胞、淀粉粒、导管、纤维、薄壁细胞,仅在形状或数量上有所不同,具体特征见图9、表5。
表3 3种乌头药材性状特征Table 3 The characteristics of the three kinds of Aconitum medicinal materials
图3 黄草乌母根上、中、下段横切面特征图(10×10)Figure 3 The cross-section characteristics of the upper,middle and lower sections of the mother roots of Aconitum vilmorinianum(10×10)
图4 马耳山乌头母根上、中、下段横切面特征图(10×10)Figure 4 The cross-section characteristics of the upper,middle and lower sections of the mother roots of Aconitum delavayi(10×10)
本研究观察了滇产3种乌头药材的原植物、性状、显微特征,结果表明,3 种乌头无论植物形态特征、药材性状特征、横切面组织构造及粉末特征均存在差异。黄草乌为藤本、叶柄与叶片近等长,马耳山乌头为藤本或直立草本、叶柄比叶片长,中甸乌头为直立草本、叶柄比叶片短;黄草乌侧根少、黄褐色,马耳山乌头侧根少、深褐色,中甸乌头侧根多、棕褐色;黄草乌、中甸乌头、马耳山乌头子根、母根的上、中、下段维管束个数及排列、形成层环的形状、筛管群的有无、淀粉粒形状特征及数量均存在差异。本研究所列出3 种乌头的鉴别点,可用于药材的品种鉴定,澄清药材品种混乱。
图5 中甸乌头母根上、中、下段横切面特征图(10×10)Figure 5 The cross-section characteristics of the upper,middle and lower sections of the mother roots of Aconitum piepunense(10×10)
图6 黄草乌子根上、中、下段横切面特征图(10×10)Figure 6 The cross-section characteristics of the upper,middle and lower sections of the subroots of Aconitum vilmorinianum(10×10)
目前,乌头类药材生药鉴定已报道20 余种[5-12]。本研究对滇产3 个物种生药特征进行了初步鉴别,其中中甸乌头为首次报道。乌头类药材种类繁多,为进一步完善乌头属植物的生药学相关资料,乌头属未见报道物种还需进一步研究开发。
图7 马耳山乌头子根上、中、下段横切面特征图(10×10)Figure 7 The cross-section characteristics of the upper,middle and lower sections of the subroots of Aconitum delavayi(10×10)
图8 中甸乌头子根上、中、下段横切面特征图(10×10)Figure 8 The cross-section characteristics of the upper,middle and lower sections of the subroots of Aconitum piepunense(10×10)
表4 3种乌头药材横切组织特征Table 4 The cross-cutting characteristics of the three kinds of Aconitum materials
图9 3种乌头药材粉末特征(10×40)Figure 9 The powder characteristics of the three Aconitum species(10×40)
表5 3种乌头药材粉末特征Table 5 The powder characteristics of the three Aconitum species