玉山黑猪冷冻精液制作初探

易松强，姜树林，余华阳，陈国良，林春斌，郑小明，林克团，李瑞丽，严 寒，宁 财*

（1.江西省畜牧技术推广站，江西南昌330046；2.江西省玉山黑猪原种场；3.烟台市农业科学院；4.江西省农业科学院）

1 品种介绍

玉山黑猪，又称赣东北黑猪[1]，主产于江西省玉山县，曾广泛分布于上饶市的铅山、横峰、广丰、上饶县等地，已有2 000余年饲养历史。1995年，江西省种畜种禽鉴定委员会将赣东北黑猪命名为玉山黑猪。2006年玉山黑猪被农业部列入第一批《国家级畜禽遗传资源保护名录》；2011年出版的《中国畜禽遗传资源志·猪志》将江浙一带黑猪合称玉江猪，在江西省称玉山黑猪；2013年，“玉山黑猪”获批农产品地理标志登记保护。玉山黑猪为江西省优良地方猪种，是该省第一个国家级地方猪保护品种。主要特性：毛色全黑，头型分狮头（占25%）和马脸型（占75%）两种。狮头型头大，额宽，且有较深的皱纹，嘴筒短、略翘，耳中等大，下垂；躯干背腰不平、腹下垂，体短，体型较小，体质较疏松；四肢关节结实。马脸型头中等大，躯干背腰平直，体长。玉山黑猪具有适应性强、耐粗饲、发情特征明显、繁殖能力强、肉质鲜嫩多汁等特点。主要缺点是生长速度较慢，胴体瘦肉率偏低。

20世纪80年代后期我国大量引进外国瘦肉型猪后，为追求高产肉量和短期经济效益，养猪户纷纷转向养殖外来品种猪，玉山黑猪的饲养数量急剧下降。除保种场外，社会上已无玉山黑猪种公猪，母猪饲养量也已不足1 000头（1981年调查时有生产公猪52头，生产母猪9 700头），2016年玉山黑猪被农业部列为濒危保护品种。

2 种公猪饲养管理

2.1 采精年龄

通常玉山黑猪种公猪在8月龄以上，体重在55kg左右，可以开始调教采精。

2.2 采精训练

人工采精前，应反复训练种公猪在发情母猪或假台畜上进行采精。

2.3 饲养管理

一是提供充足的营养饲料，特别是采精期间补饲适量的新鲜胡萝卜和优质饲料（蛋白质含量不低于17%），每天饲喂1～2个鲜鸡蛋；二是加强运动，增强体质，提高性欲和精子活力，降低畸形率；三是加强栏舍管理，单栏饲养，保证栏舍干净卫生，为种公猪提供舒适环境[2]。

2.4 采精时间

通常每周采集一次，在炎热夏季和寒冷冬季停止采精。

2.5 采精方式

戴干净一次性手套，用手握法采精。采集富含精子的射精部分（中间射精部分大约50～250mL；前、后射精部分丢弃）。

2.6 鲜精预稀释

因采精地（玉山）与制作地（南昌）相隔较远（距离260km），所以应对精液进行预稀释。采集好后，在实验室对原精进行质量检测，活力60%以上的精液进行预稀释处理，通常加1倍量稀释液。用An-Plusa营养稀释液稀释后，后用双层保鲜袋装好，扎紧袋口，防止溢出，袋上用记号笔标识猪号、采精日期、采精量等相关信息。

3 运输

3.1 运输方式

汽车、火车（高铁）。

3.2 运输中温控

使用泡沫箱包装，箱底垫放毛巾或纱布，减少运输途中的震动，然后将袋装精液依次码放好。箱内放置温度计，如果温度较高，放置冰袋（外用棉布或毛巾包住）在泡沫箱里，保证箱内温度在17℃左右。如条件许可，在汽车运输途中可使用17℃车载恒温箱。

4 冻精制作

4.1 鲜精检测及离心

4.1.1 鲜精检测。预稀释精液到达实验室后，记录好猪号、采精日期、精液数量，通过电子显微镜检测活力，活率需在60%以上。

4.1.2 鲜精离心。计算出总精子数A（体积乘密度）后，把预稀释精液放进17℃恒温箱，同温到17℃后，进行离心操作。把预稀释精液装入50～500mL的离心瓶里，在17℃和重力800g的条件下离心15min。离心好后，将上清液小心倒出。

4.2 鲜精稀释和平衡

4.2.1 鲜精稀释。按冻后4亿精子/mL的浓度，算出最需要添加的稀释液体积。把17℃的Androhep CryoGuard冷却营养稀释液缓慢地加到沉淀精液中，以吸吐方式充分混合均匀，合并。再用剩余部分冷却营养稀释液洗涤瓶底，合并。混合后为最终稀释液总量的1/2。

4.2.2 平衡。把精液瓶置于17℃的水浴杯里，一同放进4℃平衡柜，平衡2～4h。

4.3 二次稀释和分装

4.3.1 分装前稀释。按计算好的量，把4℃的Androhep CryoGuard冷冻稀释剂缓慢地加到平衡后的精液中，轻轻晃动混合均匀。

4.3.2 细管分装。在4℃的操作箱里，用冷冻精液分装机把精液装入0.25mL细管里，封口。细管印公猪信息，包括品种、生产日期、公猪号等。

表1 玉山黑猪冷冻精液生产记录表

4.4 冷冻包装

将分装好的细管精液，铺放在冷冻支架上，放入程控冷冻仪（IceCube）的冷冻室里，设置好预定的温度控制曲线，充入液氮进行冷冻制作。冷冻好的细管精液，应及时装入纱布袋内，并标识好猪号、生产日期、支数等信息，放放液氮罐中保存。

4.5 成品检测

冻后1周进行精液质量检测，冷冻好的细管精液要求活力在35%以上、畸形率在15%以下，否则应废弃。

5 结果与分析

玉山黑猪冷冻精液制作从2018年3月28日开始到2019年5月28日结束，共采集12次（见表1），采精种公猪138头次，采精时间集中在每年的4、5、6月份为主，原则上每周采精1次。共采集到9个家系17头公猪，采精公猪年龄在8个月到4岁间，原精总量16 363mL，制作数量为24 995支，经检测合格后，送国家家畜遗传基因库保存数量为22 715支。

根据表1，采精期间，共采集种公猪138头次，其中精液活力在0.6以上的种公猪81头次，有效比重为58.7%；共采集精液总量为16 363mL，活力在0.6以上的精液总量为9 890mL，有效比重为60.4%。平均每次采集精液量为118.6mL。

6 讨论

玉山黑猪鲜精数量及合格率低于外来品种种猪，具体原因：一是鲜精数量。玉山黑猪属于地方品种猪，每次采精量低于外来品种猪，与郭文华[3]“一般来说猪的一次射精量，我国地方品种猪为150～300mL,外国引入品种猪为250～400mL”的结论一致；二是种公猪营养标准。玉山黑猪饲料营养是参考外来公猪进行配比平衡的，对采精玉山黑猪营养需要缺乏系统地分析与测算；三是运输温控。17℃是理想值，运输途中多次转接，会受到诸多因素影响很难控制在17℃范围内；四是冷冻曲线。针对猪精液冷冻制精目前还没有专门研究，参考牛冻精的温控曲线进行制作。

本试验成功制作了玉山黑猪冷冻精液，可以长期保存好玉山黑猪种公猪资源。虽然猪冷冻精液制作目前处于探索阶段，仍有很多需要去完善和改进的地方，比如如何提高玉山黑猪种公猪性欲、单次采精量、精子活力、密度等，但制作玉山黑猪冷冻精液无疑为玉山黑猪地方猪种资源保护提供了一种有效的方式，为深入挖掘和利用玉山黑猪优质地方品种资源奠定基础。