芩草止痢颗粒质量标准的研究

刘素梅，方忠意

（河南省兽药饲料监察所，河南 郑州 450008）

芩草止痢颗粒主要含有黄芩、白头翁等药材，具有清热止痢的效果。黄芩苷为方中主药黄芩的特征性有效成分，我们通过高效液相色谱法测定黄芩苷的含量，以及薄层色谱法鉴别方中黄芩和白头翁，可以很好地控制药品质量。

1 试验仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪（Waters e2695，2489 检测器）、电子天平（METTLER XP250）、超纯水处理器（MILLIPORE MILLI-Q）等。

1.2 试药

黄芩苷对照品购自中国食品药品检定研究院；黄芩对照药材购自中国兽医药品监察所；白头翁皂苷B4 对照品购自中国食品药品检定研究院。

甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 黄芩的鉴别

取该品1 g，加甲醇20 ml，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml 使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩对照药材0.3 g，同法制成对照药材溶液。再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述3 种溶液各2 μl，分别点于同一以含4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）为展开剂［1］，展开、取出、晾干、喷以1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，分别显相同的暗绿色斑点。

按处方配比称取除黄芩外其他药材并按制备工艺制备样品作为黄芩阴性对照样品，阴性对照样品同法操作，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上不显斑点，阴性无干扰。

2.1.2 白头翁的鉴别

取该品1.5 g，加甲醇10 ml，超声处理10 min，滤过，取滤液作为供试品溶液，另取白头翁皂苷B4，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法［1］试验，吸取上述3 种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（6.5∶3.5∶1）的下层溶液为展开剂［2-3］，展开、取出、晾干、喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

按处方配比称取除白头翁外其他药材并按制备工艺制备样品作为白头翁阴性对照样品，阴性对照样品同法操作，在与对照品色谱相应的位置上不显斑点，阴性无干扰。

2.2 含量测定

黄芩为该方的主药之一，黄芩苷为黄芩的特征性有效成分，故选择黄芩苷作为控制该品质量的指标成分。

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.2%磷酸溶液（47∶53）为流动相；检测波长为280 nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于2 500。

2.2.2 对照品溶液的制备

精密称取黄芩苷对照品10 mg，置100 ml容量瓶中，加甲醇适量，超声振荡使溶解，放至室温，加甲醇至刻度，制成每1 ml含100 μg的溶液；精密量取10 ml，置50 ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，制成每1 ml 含20 μg 的溶液，过0.45 μm微孔滤膜，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备

取该品0.5 g，精密称定，置100 ml量瓶中，加50%甲醇至近刻度，超声处理30 min，放至室温，用50%甲醇定容至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液5ml，置50 ml 量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀。用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 线性范围

取黄芩苷对照品溶液（100 g/ml），用50%甲醇分别稀释成1、2、5、10、20、50、100 g/ml 的系列对照品溶液，按照浓度由低到高，精密吸取上述溶液各10 μl，进高效液相色谱仪进行分析，记录色谱图，测定其峰面积，并以峰面积值与相对应的对照品溶液浓度进行回归，得标准曲线方程为y=33 146x+4 089，相关系数r=0.99 997，即在1～100 g/ml 范围内，黄芩苷峰面积与浓度有良好的线性关系。

2.2.5 精密度试验

取同一批样品按照供试品溶液的制备方法同时制备6 份，精密吸取上述溶液各10 μl，进高效液相色谱仪进行分析，计算黄芩苷含量及其RSD。结果见表1。该方法具有很好的精密度。

表1 精密度试验结果

2.2.6 回收率试验（准确度）

取精密度项下已知含量的样品0.5 g，分别加入与0.5 g样品所含黄芩苷量相当的对照品，按照供试品溶液的制备方法处理，共制备6 份，精密吸取上述溶液各10 μl，进高效液相色谱仪进行分析，计算黄芩苷含量，以下列公式计算回收率。

回收率＝（实测值-供试品所含被测成分量）/对照品加入量×100%

结果见表2，加样回收率符合要求。

表2 黄芩苷回收率试验结果

2.2.7 专属性试验

按处方配比称取缺黄芩外其他药材并按制备工艺制备样品作为阴性样品，取阴性样品按照供试品溶液的制备方法处理，精密吸取10 μl进高效液相色谱仪进行分析，结果阴性无干扰，见图1～3。

2.2.8 耐用性试验

取两支不同的色谱柱，按照色谱条件与系统适应性项下的色谱条件分别进同一个对照品溶液，计算理论塔板数，结果见表3。结果显示，两种柱子在该色谱条件下柱效都达到4 400以上，方法耐用性良好。

图1 黄芩苷对照品色谱图

图2 供试品色谱图

图3 黄芩阴性对照样品色谱图

表3 不同色谱柱试验结果

3 讨论

白头翁薄层鉴别时查阅相关文献，先后采用正丁醇-乙酸-水系统和三氯甲烷-甲醇-水系统为展开剂，最终采用三氯甲烷-甲醇-水（6.5∶3.5∶1）的下层溶液为展开剂。

流动相选择时分别考察了甲醇-水-冰乙酸和甲醇-水-磷酸系统，结果甲醇-水-冰乙酸色谱峰柱效低，基线噪音大，甲醇-水-磷酸系统优于前者，所以最终选用甲醇-0.2%磷酸溶液（47∶53）为流动相。

用同一批样品考察了70%乙醇回流提取、70%乙醇超声提取、50%甲醇超声提取效果，结果以上提取方法提取效果没有明显差别，但回流提取操作烦琐、耗时费力，所以选择50%甲醇超声提取。

分别考察了超声20、30、40、和50 min的提取效果，结果超声30 min时黄芩苷已经基本提取完全，再延长超声时间没有意义，所以选择30 min作为超声提取时间。