HPLC法测定伤风停胶囊中欧前胡素的含量

张 杰 何 艳

湘南学院药学院，湖南 郴州 423000

伤风停胶囊由麻黄、荆芥、白芷、苍术(炒)、陈皮和甘草组成的复方制剂，现行质量标准收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十三册中，具有发散风寒之功效，用于外感风寒、头痛、鼻塞肢体酸重等症状。方中白芷具解表散寒、宣鼻通窍之功效，主治风寒表证、头痛、痹痛、鼻塞不通等症；欧前胡素是白芷中含有的主要香豆素类成分，具抗炎、抗菌、镇痛等药理作用[1-3]。《中国药典》2015年版一部收载的白芷质量标准中采用HPLC法测定欧前胡素作为评价指标[4]，而伤风停胶囊现行质量标准[5]中白芷药材的质量控制仅采用薄层鉴别，无含量测定项，无法有效控制其质量。为此，本实验建立HPLC法测定伤风停胶囊中欧前胡素含量的方法，此法结果准确，重现性好，为有效控制该制剂的质量提供科学依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1260高效液相色谱仪(美国Agilent公司)，AUW-220D电子天平(岛津公司，感量：0.01 mg)，电热恒温水浴锅(北京市永明医疗仪器有限公司)，超声清洗器(昆山超声仪器有限公司)。

1.2 试药 伤风停胶囊(云南A厂家，批号：WXCC1802、WXFA1705和WXEC1805)，欧前胡素对照品(中国食品药品鉴定研究院，批号：110862-201616，纯度：99.6%)。甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂、试药均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为Thermo Hypersil Gold-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为乙腈- 0.1%磷酸(50∶50)，检测波长300 nm；流速1.0 mL·min-1，柱温35 ℃，进样量10 μL。在上述色谱条件下，欧前胡素与其他色谱峰分离较好，且阴性样品无干扰。结果如图1所示。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取欧前胡素对照品适量，置100 mL量瓶中，用70%甲醇溶液定容至刻度，得欧前胡素对照品储备溶液(17.44 μg·mL-1)。

2.3 供试品溶液的制备 取伤风停胶囊样品适量，研细，取约1 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入70%甲醇溶液50 mL，称定重量，超声提取40 min，放冷至室温，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。

2.4 阴性样品溶液的制备 取按处方工艺制成不含白芷的阴性样品适量，研细，按“2.3”项下方法制成缺白芷的阴性样品溶液。

2.5 线性关系考察 精密量取“2.2”项下的对照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、5.0、6.0 mL，分别置于10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取10 μL，注入高效液相色谱仪中，按“2.1”项下色谱条件测定其峰面积，以进样质量浓度(μg·mL-1)为横坐标(X)，峰面积(A)为纵坐标(Y)，进行线性回归。欧前胡素在0.87～10.64 μg·mL-1范围内线性关系良好，回归方程为Y=25.762X+0.181，r=0.9999。

2.6 精密度试验 精密吸取欧前胡素对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪中，连续进样6次，测得其峰面积并计算，欧前胡素峰面积的RSD为0.65%，结果表明仪器的精密度良好。

2.7 稳定性试验 精密吸取同一供试品(批号：WXCC1802)溶液10 μL，分别在0、2、4、6、10、18 h依次进样，测定其峰面积并计算，欧前胡素峰面积的RSD为0.70%，结果表明供试品溶液在18 h内稳定性良好。

2.8 重复性试验 精密称取同一批样品(批号：WXCC1802)6份，照“2.3”项下制备，得供试品溶液，进样10 μL依法测定峰面积，欧前胡素含量为0.1339 mg·g-1，RSD为1.14%(n=6)，表明该方法重复性较好。

2.9 加样回收率试验 取已知含量的样品(批号：WXCC1802)6份，各约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入50 mL含欧前胡素(1.308 μg·mL-1)对照品溶液，按“2.3”项下方法，制备供试品液，进样10 μL，测定欧前胡素含量，计算回收率，结果欧前胡素平均回收率102.42%，RSD= 1.11%。结果见表1。

表1 欧前胡素加样回收率试验结果 (n=6)

2.10 含量测定 取不同批号的样品，研细，约1 g，精密称定，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别吸取供试品溶液各10 μL，依法测定峰面积，计算含量。结果显示3批伤风停胶囊中欧前胡素的含量分别为0.1339 mg·g-1、0.1607 mg·g-1和0.3809 mg·g-1。

3 讨论

3.1 测定波长的选择 采用二极管阵列检测器在波长190～400 nm对欧前胡素照品溶液进行紫外扫描，其在248 nm和300 nm附近具有最大吸收峰，参考《中华人民共和国药典》2015年版一部“白芷”项下欧前胡素的检测波长[3]，故本实验选用300 nm作为检测波长。

3.2 洗脱系统的选择 依据文献方法[6-7]，本实验比较了甲醇-0.1%磷酸溶液、甲醇-水溶液、乙腈-0.1%磷酸溶液作为流动相，实验结果表明，采用乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相，欧前胡素的分离效果较好，干扰成分少，分离度达到要求。

3.3 供试品制备方法的选择 本实验比较了不同溶剂(乙醇、70%乙醇、甲醇、70%甲醇)进行超声和加热回流提取，结果显示，采用70%甲醇超声提取时，欧前胡素提取率高，且干扰少；同时考察了超声提取30、40、50、60 min，试验结果表明超声提取40 min时，欧前胡素基本提取完全，故选择超声提取40 min。

3.4 含量测定结果的分析 3批伤风停胶囊样品含量测定结果表明，该制剂中欧前胡素的含量相差约3倍，其原因可能是不同批次原药材的差异所致，因此生产厂家应予以重视。

综上所述，所建立的高效液相方法简单易行，专属性好，为提高伤风停胶囊质量控制提供科学依据。