百令胶囊联合美托洛尔对冠心病伴心力衰竭患者炎症、氧化应激水平及血管内皮功能的影响

夏静 于宏梅 徐懿 陈弢 赵德强

冠心病是包括心绞痛、心肌梗死等类型在内的一组疾病，临床症状常表现为胸痛、呼吸困难、体液猪留等。2015年，全世界共有1.1亿人患冠心病，890万人因冠心病而死亡，占所有死亡人数的15.9%，是最常见的死亡原因[1]。冠心病晚期常合并心力衰竭，可对心脏及机体循环功能造成严重损害，是导致病情恶化的重要原因[2]。美托洛尔是一种β受体阻滞剂，能够有效缓解心脏负荷，提高冠心病患者的生存率，改善患者的预后，但是美托洛尔单用可能无法使治疗效应最大化，因此常需要与其他药物联合使用[3]。百令胶囊是以人工虫草菌丝干粉为主要成分的中药，具有免疫调节、抗炎、抗氧化应激、抗纤维化等功能，已在慢性阻塞性肺疾病、肾病综合征、糖尿病肾病等患者中证实具有治疗效果[4,5]。此外，百令胶囊在顽固性心率失常、病毒性心肌炎等部分心血管疾病中也可发挥保护作用[6,7]，但是其在冠心病中的应用笔者尚未见报道。本文旨在探讨百令胶囊联合美托洛尔治疗对冠心病伴心力衰竭患者炎症、氧化应激水平以及血管内皮功能的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年3月至2018年10月我院收治的94例冠心病伴心力衰竭患者为研究对象，随机分为对照组和观察组，每组47例。对照组给予美托洛尔片治疗，观察组在美托洛尔片的基础上给予百令胶囊辅助治疗。收集2组患者的一般资料，包括年龄、性别、NYHA分期、冠心病病程、是否合并高血压、糖尿病、高血脂等病史。患者均签署知情同意书，本研究已获伦理委员会批准。2组患者在年龄、性别比、冠心病病程、NYHA分级、高血压、糖尿病、高血脂方面差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。

表1 2组患者一般资料比较 n=47

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准：冠心病和心力衰竭参照《实用内科学》和《中国心力衰竭诊断和治疗指南2014》进行诊断[8]，美国纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级Ⅱ～Ⅳ级，超声心动图检查左心室射血分数<50%。

1.2.2 排除标准：①心肌梗死或其他疾病导致的心力衰竭；②Ⅱ～Ⅲ度房室传导阻滞以及严重心动过缓；③伴有先天性心脏病、心脏瓣膜病、肝肾功能障碍、精神疾病、慢性阻塞性肺疾病、恶性肿瘤等其他疾病；④对本研究中的药物过敏者。

1.3 治疗方法 2组患者均给予常规治疗方案，包括吸氧、利尿剂、洋地黄制剂、血管紧张素转换酶抑制剂、硝酸酯类等。对照组患者在常规治疗方案的基础上给予美托洛尔片(江西南昌济生制药厂生产)，口服，初始剂量6.25 mg/次，2次/d，根据病情可逐渐增加剂量，每周可增加6.25～12.5 mg/次，最大剂量不能超过100 mg/次。观察组患者在对照组的基础上给予百令胶囊(杭州中美华东制药有限公司生产)辅助治疗，口服，剂量1 g/次，3次/d。2组患者均进行3个月的治疗。

1.4 心功能 使用彩色多普勒超声仪(江苏佳华电子设备有限公司，JH-930)对2组患者治疗前后的心功能指标进行检测，包括左心室射血分数(Left ventricular ejection fraction，LVEF)、左心室舒张末期内径(Left ventricular end-diastolic dimension，LVEDD)、左心室收缩末期内径(Left ventricular end-systolic dimension，LVESD)。

1.5 血清学指标 所有患者在治疗前后抽取5 ml空腹静脉血，室温静置10 min，12 000 r/min离心10 min，留取上层血清。使用酶联免疫吸附试验试剂盒(江苏晶美生物科技有限公司)检测血清中白介素-6(Interleukin-6，IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、C-反应蛋白(C-reactive protein，CRP)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、内皮素-1(Endothelin-1，ET-1)的含量。根据丙二醛检测试剂盒说明书(北京索莱宝科技有限公司)，使用硫代巴比妥酸法检测血清中丙二醛(Malondialdehyde，MDA)的含量。根据一氧化氮(Nitric oxide，NO)检测试剂盒说明书(北京索莱宝科技有限公司)，使用硝酸盐还原酶法检测血清中一氧化氮(Nitric oxide，NO)的含量。

1.6 外周血单个核细胞分离 患者治疗前后抽取5 ml肝素抗凝静脉血，加入5 ml PBS混匀，缓慢的加于10 ml 外周血单个核细胞分离液(北京索莱宝科技有限公司)上方，1 500 r/min离心20 min，可见溶液分成4层：最上层的血浆、第二层为乳白色的外周血单个核细胞层、第三层为透明的分离液、最底层的红细胞。小心的吸取第二层的外周血单个核细胞，加入PBS洗涤，1500 r/min离心20 min，获得外周血单个核细胞。

1.7 蛋白质免疫印迹 向分离得到的外周血单个核细胞中加入100 μl的RIPA裂解液(上海碧云天生物技术有限公司)，充分裂解后，12 000 r/min离心5 min，对上清进行BCA蛋白定量。取40 μg的总蛋白，加入上样缓冲液，沸水中煮5 min。在配置的聚丙烯酰胺凝胶中上样，电泳结束后，将目的蛋白电转至PVDF膜，5%的牛血清白蛋白封闭2 h，加入抗TLR4抗体(英国Abcam公司，1∶500)、抗NF-κB抗体(英国Abcam公司，1∶500)、抗GAPDH抗体(英国Abcam公司，1∶3 000)，4℃孵育过夜。洗涤3次，加入山羊抗兔二抗(武汉博士德生物工程有限公司，1∶5 000)，室温孵育1 h，洗涤3次，滴加ECL显色液(上海碧云天生物技术有限公司)，凝胶成像仪(美国Bio-Rad公司，Gel Doc XR+)下拍照。使用Image Pro Plus 6.0软件测定各个条带的灰度值，将对照组治疗前时目的蛋白与GAPDH的灰度值之比作为1.0。

1.8 血管内皮依赖性舒张功能 参照Celemajer等[9]的报道，使用彩色多普勒超声仪(美国惠普公司，HPsonos2500)对2组患者治疗前后的血管内皮依赖性舒张功能(flow mediated dilatation，FMD)进行检测，具体步骤为：患者取仰卧位，将超声探头放置于肘窝上方3～7 cm处，探头频率为7.5 MHz，测量肱动脉的基础内径(D0)。使用袖带对肱动脉加压充气至39.9 kPa，阻断血流5 min后放气，1 min后测量肱动脉的内径(D1)。计算FMD=(D1-D0)/D0×100%。

2 结果

2.1 2组患者心功能比较 与治疗前比较，2组患者LVEF升高，LVEDD和LVESD降低，差异有统计学意义(P<0.05)；与对照组治疗后相比较，观察组治疗后的LVEF升高，LVEDD和LVESD降低，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 2组患者治疗前后心功能比较

注：与治疗前比较，*P<0.05

2.2 2组患者血清炎性因子含量比较 与治疗前相比较，2组患者治疗后血清中IL-6、TNF-α、CRP的含量降低，差异有统计学意义(P<0.05)；与对照组治疗后比较，观察组治疗后血清中IL-6、TNF-α、CRP的含量降低，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 2组患者治疗前后血清炎性因子含量比较

注：与治疗前比较，*P<0.05

2.3 2组患者血清中氧化应激水平比较 与治疗前比较，2组患者治疗后血清中MDA的含量降低，SOD的含量升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与对照组治疗后比较，观察组治疗后血清中MDA的含量降低，SOD的含量升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 2组患者治疗前后血清中氧化应激水平比较

注：与治疗前比较，*P<0.05

2.4 2组患者血管内皮功能比较 与治疗前比较，2组患者治疗后血清中ET-1的含量降低，NO的含量和FMD升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与对照组治疗后比较，观察组治疗后血清中ET-1的含量降低，NO的含量和FMD升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表5。

2.5 2组患者外周血单个核细胞中TLR4/NF-κB信号通路表达比较 与治疗前比较，2组患者治疗后外周血单个核细胞中TLR4和NF-κB的表达降低，差异有统计学意义(P<0.05)；与对照组治疗后比较，观察组治疗后外周血单个核细胞中TLR4和NF-κB的表达降低，差异有统计学意义(P<0.05)。见表6，图1。

表5 2组患者治疗前后血管内皮功能比较

注：与治疗前比较，*P<0.05

表6 2组患者治疗前后外周血单个核细胞中TLR4/NF-κB信号通路表达比较

注：与治疗前比较，*P<0.05

图1 蛋白质免疫印迹检测外周血单个核细胞中TLR4/NF-κB信号通路的表达

3 讨论

冠心病是在冠状动脉粥样硬化的病理基础上，发生心肌缺血、缺氧甚至坏死的一种心脏病，晚期常合并心力衰竭，是导致其死亡的主要原因。美托洛尔是冠心病的常用药物，可改善患者的远期生存率，但是单独使用往往不能发挥最大效能，常与其他药物联合使用[3]。百令胶囊的有效成分主要是发酵的冬虫夏草菌丝干粉，具有与冬虫夏草相似的药理作用，可以人工合成，有效缓解了冬虫夏草产量不足、价格昂贵的缺陷[10]。百令胶囊具有抗炎、抗氧化、抗纤维化的作用，已在肾病综合征、慢性阻塞性肺疾病、病毒性心肌炎等疾病中证实具有确切的疗效[4-6]，但是百令胶囊对冠心病合并心力衰竭是否具有治疗效应尚不清楚。

本研究，结果显示与治疗前比较，2组患者治疗后LVEF升高，LVEDD和LVESD降低，表明美托洛尔可以改善冠心病合并心力衰竭患者的心功能，与其他学者的报道结果[3]一致。此外，观察组在治疗后的心功能优于对照组，表明百令胶囊和美托洛尔联合给药对心功能的改善效果优于美托洛尔。吴岚等[6]在病毒性心肌炎诱导心肌纤维化的小鼠模型中发现，百令胶囊可以减轻纤维化程度，提高心功能，可能与抑制TGF-β1/MAPK/ERK信号通路有关，而本文则进一步在临床研究中证实了百令胶囊对心功能的改善效应。

高水平的系统性炎性持续存在于冠心病患者，表现为炎性细胞在心肌损伤处的积聚以及IL-6、TNF-α、CRP等一系列炎性因子的释放，可进一步加重心肌组织的局部微环境[11]。此外，外周血单个核细胞中TLR4/NF-κB信号通路的活化是促进炎症因子分泌的上游机制。因此，本文对血清中的炎症因子含量以及外周血单个核细胞中TLR4/NF-κB信号通路的表达情况进行检测，结果显示与对照组治疗后比较，观察组治疗后血清中IL-6、TNF-α、CRP的含量降低，外周血单个核细胞中TLR4和NF-κB的表达降低，表明百令胶囊与美托洛尔联合用药在炎症抑制方面优于美托洛尔单独用药。刘春燕等[12]发现百令胶囊可以下调糖尿病肾病患者血清中IL-6、IL-18等炎性因子的含量，抑制外周血单个核细胞中TLR4 mRNA与蛋白质的表达，与本文在冠心病伴心力衰竭患者中的研究结果一致。

氧化应激失衡是冠状动脉粥样斑块形成的重要机制，血清中氧化应激指标的水平与冠心病患者的病情程度密切相关，常用于反映冠心病患者的治疗情况[13]。本结果显示，与治疗前比较，对照组患者治疗后血清中MDA的含量降低，SOD的含量升高，表明美托洛尔具有一定的抗氧化作用；与对照组治疗后比较，观察组治疗后血清中MDA的含量降低，SOD的含量升高，表明百令胶囊可以进一步增强美托洛尔的抗氧化效应。

血管内皮损伤在冠心病的早期阶段便开始出现，可表现为缩血管因子和舒血管因子表达的失衡。ET-1主要由血管内皮细胞产生，具有缩血管作用，虽然在心肌缺血的早期可以发挥一定的心肌保护作用，但是持续的ET-1高表达可导致心肌重构[14]。NO也主要由血管内皮细胞分泌，可以抑制血小板黏附、聚集和活化，主要发挥舒张血管的作用[15]。本结果显示与对照组治疗后比较，观察组治疗后血清中ET-1的含量降低，NO的含量升高，表明百令胶囊可以有效改善冠心病患者血管内皮细胞相关因子的表达失衡状况。此外，FMD是反映冠心病患者血管内皮功能的直接指标[16]，本结果显示2组患者在治疗后的FMD均升高，而且观察组的FMD较对照组的升高程度更大，表明百令胶囊联合美托洛尔治疗具有更好的血管内皮功能改善作用。

综上所述，百令胶囊可以抑制冠心病伴心力衰竭患者的炎症和氧化应激水平，改善血管内皮功能，具有较好的治疗效应。