市售乌梢蛇的微性状鉴别研究

金捷凯，方成武,2，杨青山,2,3，陈梦轩，姚 强，丁振飞，洪稳稳，王 进

(1.安徽中医药大学药学院，安徽 合肥 230012；2.安徽省中医药科学院 中药资源保护与开发研究所，安徽 合肥 230012；3.安徽道地中药材品质提升协同创新中心，安徽 合肥 230012；4.安徽亚泰天然植物科技有限公司，安徽 金寨 237344)

乌梢蛇又名黑梢蛇、乌蛇、剑脊蛇，为游蛇科动物乌梢蛇Zaocysdhumnades(Cantor)除内脏的干燥体[1]。乌梢蛇是临床上常用动物类中药之一，多于夏、秋二季捕捉，剖开蛇腹，剥去蛇皮留头尾，除去内脏，盘成圆盘状，干燥。其性平，味甘，具祛风活络镇痛、除湿攻毒之功，临床用于风湿顽痹、麻木拘挛、口眼歪斜、中风、抽搐、痉挛、破伤风、麻风、疥癣、瘰疬、恶疮等[2]。现代研究[3-4]表明，乌梢蛇治疗类风湿关节炎具有显著疗效。

市场上乌梢蛇正品主要来源于四川、湖北、湖南、江西、江苏、安徽等地。因乌梢蛇资源有限，价格较高，而乌梢蛇伪品种类多样且价格低廉，导致伪品充斥市场，对临床疗效产生极大影响。目前已有学者对乌梢蛇与其伪品进行研究，已报道过的伪品有王锦蛇、灰鼠蛇、滑鼠蛇、红点锦蛇、赤链华游蛇、黑眉锦蛇等[5-9]，但缺乏系统资料。前期抽样调查发现，市场上乌梢蛇混伪品大致为滑鼠蛇Ptyasmucosus(Linnaeus)、灰鼠蛇Ptyaskorros(Schlegel)、舟山眼镜蛇NajanajaatraCantor、赤链华游蛇Sinonatrixannularis(Hallowell)和白链蛇Dinodonseptentrionalis(Gunthe)。笔者通过中药微性状鉴定法[10]研究市场上乌梢蛇正伪品的微性状鉴别特征，为乌梢蛇药材的鉴别提供参考。

1 材料

1.1 样品 经研究鉴别收集到的样品为乌梢蛇(湖南和四川)、滑鼠蛇(湖南)、灰鼠蛇(国产和进口)、眼镜蛇、白链蛇、赤链华游蛇。市售乌梢蛇药材及常见伪品样品收集情况见表1。

1.2 仪器 Optec奥特光学SZ780 连续变倍体视显微镜：重庆奥特光学仪器有限公司；佳能70D相机：日本佳能有限公司；烧杯、浸泡箱、镊子、接种针、剪刀、吸水纸、平板、重物。

表1 实验药材样品信息

1.3 试剂 自来水。

2 方法

2.1 预实验 本实验需要将蛇皮从蛇体剥离，在体视显微镜下观察研究。为达到实验要求，先设计预实验以探索浸泡时间与蛇皮剥离难易度大致关系。选取长度、大小相近的乌梢蛇饮片，随机均分为甲、乙、丙、丁4组。按照上述分组，将乌梢蛇饮片置于烧杯中。在烧杯内加入足量自来水完全淹没饮片，再用塑封袋包裹烧杯。控制浸泡时间：甲组浸泡16 h、乙组20 h、丙组24 h、丁组28 h。

2.2 微性状鉴别实验 在浸泡箱中注入适量水，将药材样品置于水中完全浸没并浸泡24 h。取出药材样品去除头部及尾部，至上而下将蛇皮从蛇肉上慢慢剥离。将所得蛇皮置于吸水纸上展平，剥离时需注意蛇皮完整。再于蛇皮上方覆盖吸水纸，并在上方置一平板，压上重物置于干燥环境。次日更换吸水纸继续压置。重复2～3周至蛇皮干燥。参照2015年版《中华人民共和国药典》[11]“中药其他方法通则”项下中药的显微鉴别方法及中药微性状鉴定法[10]进行实验。将药材样品蛇皮置于体视显微镜下，观察其头部、体背部、腹部鳞片及去除鳞片各部位的微性状特征，并拍照记录。

3 结果

3.1 预实验结果 4组饮片经鉴定均为正品乌梢蛇饮片。甲组乌梢蛇饮片剥蛇皮时，蛇皮紧紧连接蛇肉，难以剥离；乙组一部分蛇皮与蛇肉较易剥离，另一部分较难剥离，易剥烂，蛇皮剥离不整齐；丙组蛇皮与蛇肉较易剥离，蛇皮相对整齐；丁组蛇皮与蛇肉均酥软，难以剥离，气味严重。根据预实验结果，确定最佳浸泡时间为24 h。4组饮片蛇皮见图1。

3.2 微性状鉴别实验结果

3.2.1 湖南产乌梢蛇微性状特征 湖南产乌梢蛇体前段中央纵线处单鳞蛇皮(将去除鳞片后，该枚鳞片下的蛇皮称为单鳞蛇皮)色泽为棕黄色，具整齐分布的黑色斑点群。蛇体后段单鳞蛇皮色泽为紫黑色，斑点群呈块状或片状，密集。腹部呈淡蓝色，具杂乱分布的斑点群。见图2、图3。

注：A．甲组饮片蛇皮；B.乙组饮片蛇皮；C.丙组饮片蛇皮；D.丁组饮片蛇皮

图1 预实验结果

3.2.2 四川产乌梢蛇微性状特征 四川产乌梢蛇背部单鳞蛇皮呈紫黑色，色泽较湖南产乌梢蛇深。其腹部与湖南产乌梢蛇相似，呈淡蓝色，具杂乱分布的斑点群。见图2、图3。

3.2.3 灰鼠蛇微性状特征 灰鼠蛇单鳞蛇皮均呈黄色或淡黄色，单鳞蛇皮边缘亦为黑色，角隅处尤其明显。国产灰鼠蛇背部单鳞蛇皮中央具稀少黑色斑点。进口灰鼠蛇背部单鳞蛇皮中央斑点群分布密集，腹部单鳞蛇皮均呈黄色。见图2、图3。

3.2.4 滑鼠蛇微性状特征 滑鼠蛇背部横纹处单鳞蛇皮呈黑色；无横纹处单鳞蛇皮呈淡黄色，具杂乱分布斑点群。其腹部单鳞蛇皮呈黄白色或黄色，具片状的斑团块。见图2、图3。

3.2.5 赤链华游蛇微性状特征 赤链华游蛇背部单鳞蛇皮呈黑色；腹部单鳞蛇皮呈红色或黑色；背部与腹部均无斑点群。见图2、图3。

3.2.6 白链蛇微性状特征 白链蛇背部单鳞蛇皮呈白色或黑色，无斑点群。其腹部呈黄色，具斑团块，稀少。见图2、图3。

3.2.7 舟山眼镜蛇微性状特征 舟山眼镜蛇颈部白色斑纹处单鳞蛇皮具黑色斑点。背部单鳞蛇皮呈棕黄色，具整齐分布的黑色斑点群；背部白色横纹处微性状特征与眼镜状白色斑纹处一致；颈腹部白斑纹处单鳞蛇皮呈棕黄色；腹部单鳞蛇皮呈棕黄色。见图2、图3。

注：A.湖南产乌梢蛇；B.四川产乌梢蛇；C.国产灰鼠蛇；D.进口灰鼠蛇；E.滑鼠蛇；F.赤链华游蛇；G.白链蛇；H.舟山眼镜蛇

注：A.湖南产乌梢蛇；B.四川产乌梢蛇；C.国产灰鼠蛇；D.进口灰鼠蛇；E.滑鼠蛇；F.赤链华游蛇；G.白链蛇；H.舟山眼镜蛇

图3 乌梢蛇及伪品腹部微性状特征

4 讨论

乌梢蛇腹部单鳞蛇皮均呈淡蓝色，具杂乱分布的斑点群。其背部单鳞蛇皮分两种情况，湖南产乌梢背部中央纵线处单鳞蛇皮呈黄色，其余均为紫黑色。四川产乌梢蛇背部单鳞蛇皮呈紫黑色，颜色较湖南产乌梢蛇深。而乌梢蛇伪品微性状特征与乌梢蛇差别较大。见表2。

表2 市售乌梢蛇及其常见伪品微性状特征分种检索表

1.单鳞蛇皮无斑点群。

2.背部单鳞蛇皮呈白色或黑色，腹部呈黄色，具斑团块，稀少

白链蛇Dinodon septentrionalis (Gunthe)

2.背部单鳞蛇皮呈黑色；腹部单鳞蛇皮呈红色或黑色

首先，功能分区时充分考虑自然资源条件、环境状况、地理区位、开发利用现状和相关规划，并结合社会经济和可持续发展的需要，围绕主导功能及国防安全需要，依据选划原则进行划分功能区[11]。其次，保护与开发活动合理安排目的在于确保对海洋公园的持续利用，实现对关键或代表性生境、生态系统及生态过程的保护，隔离互相冲突的人类开发活动。在实现部分资源合理利用的同时，保护海域的自然及文化景观，将人类活动的不良影响降至最低。

赤链华游蛇Sinonatrix annularis (Hallowell)

1.单鳞蛇皮有斑点群。

3.腹部单鳞蛇皮呈淡蓝色，具杂乱分布斑点群

乌梢蛇Zaocys dhumnades (Cantor)

3.腹部单鳞蛇皮呈黄色或棕黄色，无斑点群。

4.背部单鳞蛇皮呈棕黄色，具整齐分布的黑色斑点群

舟山眼镜蛇Naja naja atra Cantor

4.背部单鳞蛇皮呈黄色或黑色，具杂乱分布的黑色斑点群。

5.背部单鳞蛇皮边缘为黑色，角隅处尤其明显

计算机网络安全防护是一个动态的过程，计算机病毒层出不穷，防不胜防。在构筑计算机网络信息安全防护体系上，数据备份是必不可少的环节。数据备份分为三个层次：硬件级、软件级和人工级

灰鼠蛇Ptyas korros (Schlegel)

5.背部单鳞蛇皮横纹处呈黑色；无横纹处呈淡黄色

白链蛇Dinodon septentrionalis (Gunthe)

乌梢蛇作为临床常用动物类中药，因其市场需求量大，价格昂贵，使得市场上混伪品种类繁多。经笔者调查收集，研究鉴定出有灰鼠蛇、滑鼠蛇、赤链华游蛇、白链蛇、舟山眼镜蛇等混伪种类。通过微性状鉴别研究发现：四川产和湖南产乌梢蛇体背的单鳞蛇皮均呈紫黑色，腹部均呈淡蓝色，具杂乱分布的斑点群，且湖南产乌梢蛇中央纵线处为黄棕色，具整齐分布的黑色斑点群。而伪品的微性状特征与之相比差异较大。微性状鉴别方法可有效且精准地鉴别乌梢蛇的真伪，弥补传统经验鉴别的不足，且简单便捷，值得推广。