陕西部分规模化猪场仔猪病毒性腹泻感染情况调查

尹宝英, 张 浩，张文娟

(1.咸阳职业技术学院 畜牧兽医研究所，咸阳市动物疫病分子生物学诊断技术研究重点实验室，陕西 咸阳 712000；2.陕西正大有限公司，陕西 咸阳 712000)

猪病毒性腹泻病是由一种或一种以上病毒感染猪只所引发的以腹泻为主的消化道功能障碍性疾病。国内研究报道显示2010年后引起仔猪腹泻致死的主要病毒是猪流行性腹泻病毒(porcineepidemicdiarrheavirus，PEDV)，该病毒临床上常与猪传染性胃肠炎病毒(transmissiblegastroenteritisvirus，TGEV) 和猪轮状病毒(porcinerotavirus，PRV)呈混合感染。主要临床症状表现为呕吐、腹泻、脱水甚至死亡，严重影响仔猪的健康发展。贵州、安徽省、河北省等规模化猪场的进行可疑病原检测结果显示PEDV感染仔猪最为严重，感性强，致死率高，阳性率高达为63.54%，存在与TGEV和PRV混合感染情况[1～6]。因此，笔者研究对2018年期间陕西部分规模化猪场送检的162例患有腹泻的仔猪病料进行病原检测，分析PEDV、TGEV与PRV三种病毒性腹泻在陕西的流行状况，以期为该类疾病的防控提供资料依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料来源 病料源自2018年陕西地区部分规模化养猪场的仔猪的肠道组织、内容物及粪便，共计162份。发病仔猪临床呈现呕吐，腹泻，脱水甚至死亡。病理剖检可见小肠扩张，肠腔内充满黄色液体，肠系膜淋巴结水肿，肠系膜充血。

1.1.2 主要试剂 病毒 RNA/DNA提取试剂盒、总RNA提取液、AMV 反转录酶、rTaq DNA 聚合酶、dNTP、Oligo( dT) 、RNA酶抑制剂、DNA Marker DL 2000购自宝生物工程( 大连) 有限公司。

1.1.3 引物设计 根据GenBank序列使用 Premier 5.0 生物软件设计PEDV、TGEV、PRV基因特异性引物序，引物合成由生工生物工程(上海)有限公司完成，详情见表1。

表1 PCR引物序列

1.2 方法

组织及排泄物中RNA提取按试剂盒提供的操作手册，以总 RNA为模板进行 RT-PCR扩增。PCR反应条件如下：45 ℃ 30 min，94 ℃预变性 5 min；94 ℃变性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸40 s，循环35次；72 ℃延伸10 min。RT-PCR产物经电泳分离，在凝胶成像系统下成像拍照，记录结果。

2 结果

2.1 PEDV、TGEV和PRV感染情况统计

对全年送检的162例腹泻仔猪检测结果进行数据统计，病毒性腹泻病例共74例，占仔猪腹泻送检样的45.68%。其中PEDV的阳性检出率最高，达16.04%，TGEV和PRV的检出率分别为10.49%和9.87%(表2)。

表2 PEDV、TGEV和PRV阳性检出率

2.2 不同日龄腹泻仔猪病毒的感染情况统计

仔猪日龄不同，PEDV、TGEV和PRV的阳性检出率也不同(表3)。1～5日龄仔猪，PEDV、TGEV的阳性率在1-10日龄发病仔猪中检出率最高，达70.26%、64%，而PRV的检出率在10日龄后上升尤其是断奶后高达35.71%。

表3 不同日龄PEDV、TGEV和PRV阳性检出率

2.3 PEDV、TGEV 和PRV 感染的季节性分布

PEDV、TGEV和PRV全年均被检出，其中冬季阳性检出率最高，分别达到35.13%、36%和39.29%，夏季发病率最低( 表4) 。

表4 各季节仔猪腹泻病毒检出率统计结果

3 讨论

近年研究发现，PEDV、TGEV和PRV是我国猪病毒性腹泻的主要病原。笔者研究对2018年陕西部分规模化猪场送检的疑似患有病毒性腹泻的样品进行病原检测。与赵志敏对2015-2016年陕西省腹泻病料中PEDV和TGEV的检出率40.33%、9.97%[7]而言，笔者研究检测数据统计显示2018年PEDV、TGEV、PRV的阳性检出率依次为16.04%、10.49% 和9.87%。其中PEDV的检出率出现明显降低，可见PEDV的流行有所控制，这也与我国整体养殖业疫病防控的重视度加大有绝对的关系。

笔者研究结果表明，仔猪日龄不同，PEDV、TGEV和PRV的检出率也不同。PEDV、TGEV的阳性率在1～10日龄发病仔猪中检出率最高，达70.269%、64%，而PRV的检出率在10日龄后上升尤其是断奶后，可达35.71%。这与新生仔猪抵抗力较低，和缺乏相应抗体有关。另外，PEDV、TGEV和PRV三种病毒在不同季节均有检出，但不同季度差异较大，在寒冷的冬春两季明显高于夏、秋季节，这一结果符合这三种病毒的季节性流行特点。尤其是PEDV在冬季有高达35.13%的检出率。这与低温对于PEDV的变异、感染力增强有关[8]。所以在气温较低的冬春季加强哺乳仔猪的温湿度等饲养管理至关重要。

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