正交设计优化鲜竹沥液的提取工艺*

★ 张文婷 刘绪平 袁桂平** 陈俊（.江西省药品检验检测研究院/江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心 南昌 33009；. 抚州市食品药品检验所 江西 抚州 344400）

鲜竹沥为江西省特色的中药饮片，始载于《本草经集注》，具有清热化痰、开窍定神之功效，其功用早为祖国医学所认识，且临床疗效独特和明显，深受患者认可。同时，该饮片又是江西省特色中成药品种复方鲜竹沥中的主要原料，临床主要用于痰热咳嗽，痰黄黏稠［1］。现代研究发现，鲜竹沥中富含各种氨基酸、黄酮、维生素、微量元素及愈创木酚，具有很高的药用价值，其中主要为愈创木酚，其次是氨基酸和黄酮类化合物［2-3］。目前主要炮制方法为传统的烧制法和新出现的渗漉法、煎煮法［4］，法定方法为干馏法，主要受干馏时间、温度、流速等影响，而法定方法对这些指标均未做明确说明，可操作性不强，缺乏严格的监控方法，不利于标准化生产［5-6］。本文针对鲜竹沥饮片以上工艺因素采用正交设计进行生产工艺考察，找到最佳炮制工艺。

1 仪器与试药

岛津LC-20A高效液相色谱仪，Sartorius BT25S型十万分之一电子天平。愈创木酚对照品（中国食品药品检定研究院， 批号 111510 200202，供含量测定用），（鲜竹沥：江西天施康中药股份有限公司，批号：20180216、20180217、20180218、20180219 、20180220 、20180221、20180222、20180223、20180224 ）HPLC用水为超纯水， 乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 鲜竹沥的传统炮制 取粉绿竹鲜竹秆截成约30cm长的段，两端去节，对半劈开，架起中部用火烧灼，周围放点燃的木炭加热，坛口下端放一搪瓷碗，承接流出的汁液，加热干馏50min，收集流出的汁液，得黄色澄明液汁，即为鲜竹沥样品。

鲜竹沥的现代生产：采用现代化机械设备自动控制温度、干馏时间和流速。

2.2 愈创木酚的含量测定

2.2.1 方法的选择 经实验摸索，初步选择0.5%磷酸和0.5%三乙胺溶液-乙腈（80∶20）为流动相。

2.2.2 色谱条件 色谱柱 InertSustain AQ C18色 谱柱（4.6 mm×250mm，5μm）流速1.0mL/min ；柱温 25℃，进样量20μL；检测波长为276nm。

2.2.3 对照品溶液制备 精密称取愈创木酚对照品20.45mg，置100mL容量瓶，溶解并稀释至刻度（约200μg/mL）。

2.2.4 标准曲线的绘制 精密吸取上述对照品溶液稀释成约以下浓度 100μg/mL、40μg/mL、20μg/mL、10μg/mL、1μg/mL，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标， 进样浓度为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=21814X+1273，r= 0.9999，表明在10.1945～203.89μg/mL线性关系良好。

2.2.5 样品含量测定 精密吸取鲜竹沥口服液20mL，用稀盐酸调 pH 2～3， 用乙醚萃取 3次（20，10，10mL），合并萃取液，用 5%碳酸氢钠溶液洗涤萃取液，取乙醚层。合并乙醚萃取液，使自然挥干， 残渣精密加入甲醇2 mL溶解，作为供试品溶液。同法制得不加鲜竹沥供试品的空白溶液，记录色谱图［7-8］。对照品和样品的HPLC色谱图见图1-2。

图1 对照品溶液的HPLC图谱

图2 样品溶液的HPLC图谱

2.3 正交试验 法定方法为干馏法，主要受干馏时间、温度、流速等影响，选择这三个因素为考察因素，分别设定3个水平，根据因素水平表见表1，选择正交表L9（34）进行试验，以愈创木酚含量为指标，结果见表2。对正交试验的结果进行方差分析，结果见表 3［8-12］。

表1 正交试验因素水平表

表2 干馏提取工艺正交试验安排及结果

表3 愈创木酚含量方差分析

据正交试验结果进行直观分析可知，A因素的影响 A3＞A2＞A1，B 因素的影响 B2＞B3＞B1，C 因素的影响C1＞C2＞C3。由R值可知各因素对愈创木酚含量的影响大小顺序为A＞B＞C。方差分析表明因素A干馏时间和因素B温度对愈创木酚含量的有显著性意义，是影响鲜竹沥提取工艺的主要因素，在工艺优化中应该重点考虑，C因素（流速）对鲜竹沥提取工艺的影响不具有显著性，从节约时间的角度考虑，可以选择C3。因此结合直观分析可以将A、B、C因素的优化工艺条件确定为A3B2C3。

2.4 最佳工艺验证试验 为进一步考察上述优选工艺条件的稳定性，按最佳工艺条件A3B2C3（时间为180min，温度为200℃，流速为2.0mL/min）平行重复3次试验。按“2.2.5”项下测定愈创木酚的含量，结果见表4。

表4 验证试验结果

3 讨论

现代研究发现，鲜竹沥中富含各种氨基酸、黄酮、维生素、微量元素及愈创木酚，而愈创木酚具有确切的止咳功效。愈创木酚含量的高低可以反应鲜竹沥镇咳效果。传统的提取工艺，耗能大，污染严重，不能精准的控制干馏时间温度且生产规模小，只适合小作坊式生产。本文通过正交设计找到鲜竹沥最佳提取工艺，结果表明该工艺愈创木酚提取率高，简单稳定，重复性好，适合鲜竹沥提取的现代化工业生产。