实时荧光定量PCR 检测妊娠晚期孕妇B 族链球菌感染的临床分析

陈柳玲 袁美英 张志 潘继钊

B族链球菌属于兼性厌氧革兰阳性链球菌,绝大多数寄生在下消化道和泌尿生殖道内,是一种条件致病菌,同时也是围生期孕妇感染的重要致病菌［1,2］。孕妇感染后可以经过产道向新生儿传播,因而有必要注意新生儿B族链球菌感染的途径,即注意观察母婴垂直传播［3］。B族链球菌感染会造成孕产妇发生产褥感染、羊膜绒毛膜炎、泌尿系统感染等,并且与新生儿败血症、胎膜早破、早产有一定的相关性［4］。作者通过分析2017 年6 月～2019 年2 月东莞市黄江医院就诊的60 例妊娠晚期孕妇的临床资料,拟探讨实时荧光定量PCR 检测妊娠晚期孕妇B 族链球菌感染的临床价值,现将研究结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017 年6 月～2019 年2 月东莞市黄江医院就诊的60 例妊娠晚期孕妇作为观察对象,年龄19～46 岁；其中≤24 岁10 例、25～39 岁41 例、≥40岁9例。纳入标准：①孕妇既往没有不良的孕育史；②孕妇无并发糖尿病。排除标准：①排除取样前进行抗生素治疗孕妇；②排除阴道分泌物有衣原体、阴道假丝酵母菌等其他菌群感染者；③排除取样前24 h 应用栓剂或者洗液的孕妇；④排除阴道分泌物涂片不符合本研究要求者。

1.2 方法

1.2.1 标本的采集 将阴道内过多的分泌物擦去,无菌拭子放置在生殖道低位1/3 的位置,逐步旋转1 圈获取分泌物,然后再将拭子插入到肛门括约肌上方2.5 cm的位置获取直肠样本,样本保持密闭,1 h 内送检。

1.2.2 检测方法 通过SLAN-965 实时荧光定量PCR仪和荧光标记探针对样本中B 族链球菌进行检测。检测过程中,采用核酸标记荧光染料和尿嘧啶-N-糖基化酶,避免扩增产物的污染。检测试剂盒为福建泰普生物科学(中国)有限公司生产,测定下限值1.0×103copies/ml,线性范围为(1.0×103～1.0×108)copies/ml,操作步骤按照说明书严格执行。

1.2.3 检测结果判定标准 根据PCR 仪自带分析软件,获得不同样本的Ct 值,Ct 值≤23,并且具有很好的对数增长曲线,结果判定为B 族链球菌感染阳性,Ct 值=30 或者是为Undet,Ct 值＜30 具有很好的对数增长曲线,结果判定为B 族链球菌感染阴性,23＜Ct 值＜30 时提示结果检测为灰区,重复性检测,确认结果。

1.3 观察指标

1.3.1 观察不同年龄段(≤24 岁、25～39 岁、≥40 岁)B族链球菌阳性率。

1.3.2 妊娠晚期孕妇妊娠结局 主要包括宫内感染、胎儿窘迫、胎膜早破、产后出血、早产。

1.4 统计学方法 采用SPSS22.0 统计学软件进行数据统计分析。计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P＜0.05 表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 不同年龄段孕妇B族链球菌阳性率 ≤24 岁孕妇B族链球菌阳性率为0,25～39 岁孕妇B族链球菌阳性率为31.7%,≥40 岁孕妇B族链球菌阳性率为0；25～39 岁孕妇B族链球菌阳性率均高于≤24 岁孕妇和≥40 岁孕妇,差异均有统计学意义(χ2=4.26、3.86,P＜0.05)。见表1。

2.2 妊娠晚期孕妇妊娠结局 B族链球菌阴性组孕妇宫内感染发生率0、胎儿窘迫发生率4.1%、胎膜早破发生率0、产后出血发生率0、早产发生率0 均低于B族链球菌阳性组的15.4%、23.1%、15.4%、15.4%、15.4%,差异均有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表1 不同年龄段孕妇B族链球菌阳性率(n,%)

表2 60 例妊娠晚期孕妇妊娠结局［n(%)］

3 讨论

目前国内研究资料显示［5］,B族链球菌感染是新生儿感染性疾病的主要致病菌。正常部位的B族链球菌会逆行到达胎盘,诱发炎性细胞发挥吞噬作用,降解胎膜蛋白,诱发B族链球菌侵袭胎膜,造成胎膜早破［6］。妊娠晚期孕妇感染B族链球菌与很多妊娠并发症、新生儿并发症有密切关系,如胎膜早破、早产和子宫内膜炎等,为了更好的降低围生期孕产妇感染B族链球菌,美国修订了围生期感染B族链球菌防治指南［7］。我国也在《孕前和孕期保健指南》中建议孕产妇在35～37 孕周进行B族链球菌感染筛查［8］。既往的实验室检查方法只是停留细菌培养上,其检测时间相对较长,对于培养液的要求也较高,操作相对复杂。另外还有免疫学方法,其检测速度虽然较快,但是其敏感度比较差,临床上应用受到限制。实时荧光定量PCR是利用荧光标记探针,对采集样本中的B族链球菌进行检测,其对于B族链球菌特定基因的敏感度和特异度均较高,检测的周期相对较短,操作比较简便［9,10］。

本研究对2017 年6 月～2019 年2 月东莞市黄江医院就诊的60 例妊娠晚期孕妇的临床资料进行分析,结果显示,≤24 岁孕妇B族链球菌阳性率为0,25～39 岁孕妇B族链球菌阳性率为31.7%,≥40 岁孕妇B族链球菌阳性率为0；25～39 岁孕妇B族链球菌阳性率均高于≤24 岁孕妇和≥40 岁孕妇,差异均有统计学意义(χ2=4.26、3.86,P＜0.05)。由此提示25～39 岁年龄段妇女性生活相对较为活跃,人工流产、妊娠期雌激素水平均较高,诱发生殖道细菌微环境改变。B族链球菌阴性组孕妇宫内感染发生率0、胎儿窘迫发生率4.1%、胎膜早破发生率0、产后出血发生率0、早产发生率0 均低于B族链球菌阳性组的15.4%、23.1%、15.4%、15.4%、15.4%,差异均有统计学意义(P＜0.05)。由此提示妊娠期阴道B族链球菌感染后细菌会逆行到达宫腔,诱发宫内感染,细菌侵入胎盘绒毛,造成绒毛的炎性病变,胎盘功能衰退、老化,发生胎膜早破、产后出血,胎儿子宫内处于慢性缺氧状态,胎儿子宫腔内生长受限,发生新生儿缺血、缺氧,出现早产,影响了妊娠结局［11,12］。

综上所述,实时荧光定量PCR 检测妊娠晚期孕妇B 族链球菌感染情况,可以为改善妊娠结局提供可靠的理论依据。