金匮肾气丸对环磷酰胺造模小鼠血常规的影响

蒋 平，钟枝梅，张 亮，刘莹莹，卢道强，汪 林，左瑞华

金匮肾气丸对环磷酰胺造模小鼠血常规的影响

蒋 平1,2，钟枝梅1，张 亮1，刘莹莹1，卢道强1，汪 林1，*左瑞华1,2

（1. 皖西学院生物制药工程学院，安徽，六安 237012；2. 安徽省中药资源保护与持续利用工程实验室，安徽，六安 237012）

为了探究金匮肾气丸对环磷酰胺造模小鼠血常规的影响。将30只雄性小白鼠均分为空白组、模型组和治疗组。治疗组小鼠给予1.2 g/kg剂量的金匮肾气丸进行灌胃，1次/d；在治疗的第7 d，模型组和治疗组小鼠给予50 mg/kg.剂量环磷酰胺进行腹腔注射，1次/w，连续用药35 d。实验结束后对所有小鼠称重并采集血液进行血细胞分析。与空白组相比，模型组小鼠的体重、中性粒细胞总数、中性粒细胞百分比、单核细胞百分比、血小板总数和血小板压积显著降低（< 0.05），白细胞总数、淋巴细胞总数、淋巴细胞百分比、单核细胞总数、红细胞压积、红细胞分布宽度变异系数和平均血小板体积显著增高（< 0.05）；与模型组相比，在治疗结束后，小鼠的体重、中性粒细胞百分比、单核细胞百分比、血小板总数、血小板压积显著升高（< 0.05），白细胞总数、淋巴细胞总数、淋巴细胞百分比、单核细胞总数显著降低（< 0.05）。金匮肾气丸能有效改善环磷酰胺导致小鼠血常规，对肿瘤性疾病治疗过程中应用金匮肾气丸防治环磷酰胺毒副作用具有参考意义。

金匮肾气丸；环磷酰胺；血常规

环磷酰胺是临床中常用的烷化剂类抗肿瘤药，具有良好的抗肿瘤效果，但是也伴有免疫抑制、骨髓抑制、器官损伤等不良反应的发生。有研究指出，环磷酰胺能抑制小鼠的红细胞、白细胞、淋巴细胞、单核细胞等[1]生长分裂，并可导致小鼠的免疫力低下。因此，如何解决环磷酰胺的临床不良反应是目前临床上迫切需要解决的问题。蔡涛等[2]研究表明，环磷酰胺导致的不良反应是中医肾阳虚的范畴，因此，利用治疗肾阳虚的药物可以达到有效治疗疾病的目的。金匮肾气丸是原载于《金匮要略》的补肾益精方，具有益补肾阳的功效。有报道显示，金匮肾气丸对环磷酰胺引起的骨髓抑制[3]、生殖损伤[4]、免疫抑制[5]等均具有良好的疗效。但是金匮肾气丸对环磷酰胺引起小鼠血常规异常的影响鲜有研究报道。因此，本研究以环磷酰胺为造模药物，建立小鼠血常规异常模型，研究金匮肾气丸对环磷酰胺所致小鼠血常规异常的影响，以期为临床应用金匮肾气丸防治环磷酰胺所致临床不良反应提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 实验动物

昆明种小白鼠30只，体重(18 ± 2)g，购自安徽医科大学实验动物中心。所有小鼠饲养在湿度55%~65%温度20~24℃的环境中，自由采食和饮水。

1.2 实验试剂和仪器

金匮肾气丸（北京同仁堂，批号：17031244）；BC-2600VET迈瑞血细胞分析仪及配套试剂均由深圳迈瑞公司提供。

1.3 方法

1.3.1 动物分组与给药方法

按照随机数表法，将购买的30只小鼠分成3组，即空白组（CT）、模型组（CP）和金匮肾气丸治疗组（JKT），每组10只。治疗组小鼠给予1.2 g/kg.剂量的金匮肾气丸（提前溶于生理盐水制成悬液）进行灌胃，1次/d，连续35 d，空白组和模型组给予相同体积的生理盐水灌胃；在治疗的第7 d，模型组和治疗组小鼠给予50 mg/kg.剂量环磷酰胺进行腹腔注射，1次/w，共注射5次，空白组小鼠给予相同体积的生理盐水腹腔注射。最后一次注射环磷酰胺12 h后，水合氯醛麻醉，处死所有小鼠，并称重和采集抗凝血。

1.3.2 血细胞分析仪分析血细胞

按照三分类迈瑞血细胞分析仪（BC-2600VET）的要求，选择检测物种为小鼠，检测采集的小鼠抗凝血并分析数据。

1.3.3 统计学分析

所有数据均采用SPASS 19.0 进行单因素方差分析，结果以均值±标准差的形式表示，< 0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 金匮肾气丸对环磷酰胺造模小鼠体重的影响

结果显示，与空白组相比，模型组小鼠的体重均显著降低（< 0.05）；与模型组相比，在治疗的1~14 d，金匮肾气丸治疗组小鼠的体重无显著差异（> 0.05），从第14 d开始小鼠的体重逐渐增加，并到治疗结束均显著增加（< 0.05），结果见图1。

图1 金匮肾气丸对环磷酰胺造模小鼠体重的影响

2.2 金匮肾气丸对环磷酰胺造模小鼠白细胞的影响

结果显示，与空白组相比，模型组小鼠的白细胞总数、淋巴细胞总数、淋巴细胞百分比、单核细胞总数显著升高（< 0.05），中性粒细胞总数、中性粒细胞百分比和单核细胞百分比显著下降（< 0.05）；与模型组相比，在治疗结束后，金匮肾气丸治疗组白细胞总数、淋巴细胞总数、淋巴细胞百分比、单核细胞总数显著下降（< 0.05），中性粒细胞百分比和单核细胞百分比显著升高（< 0.05），中性粒细胞总数无显著变化（> 0.05）。结果见图2。

(相同字母表示差异不显著，P > 0.05；不同字母表示差异显著，P < 0.05；下同）

2.3 金匮肾气丸对环磷酰胺造模小鼠红细胞的影响

结果显示，与空白组相比，模型组小鼠的红细胞压积、红细胞分布宽度变异系数显著升高（< 0.05），红细胞总数无显著变化(> 0.05)；与模型组相比，在治疗结束后，金匮肾气丸治疗组红细胞总数、红细胞压积、红细胞分布宽度变异系数无显著变化(> 0.05)。结果见图3。

图3 金匮肾气丸对环磷酰胺造模小鼠红细胞的影响

2.4 金匮肾气丸对环磷酰胺造模小鼠血小板的影响

结果显示，与空白组相比，模型组小鼠的血小板总数、血小板压积显著降低（< 0.05），平均血小板体积显著增高（< 0.05），血小板分布宽度无显著变化（> 0.05）；与模型组相比，在治疗结束后，金匮肾气丸治疗组血小板总数、血小板压积显著升高（< 0.05），平均血小板体积和血小板分布宽度无显著变化（> 0.05）。结果见图4。

图4 金匮肾气丸对环磷酰胺造模小鼠血小板的影响

2.5 金匮肾气丸对环磷酰胺造模小鼠血红蛋白的影响

结果显示，三组小鼠的血红蛋白含量、平均红细胞血红蛋白含量、平均红细胞血红蛋白浓度两两相比无显著变化（> 0.05）。结果见图5。

图5 金匮肾气丸对环磷酰胺造模小鼠血红蛋白的影响

3 讨论

环磷酰胺是临床中常用的烷化剂类抗肿瘤药，具有良好的抗肿瘤效果，能抑制小鼠的红细胞、白细胞、淋巴细胞、单核细胞等[1]。高敏等[6]研究发现，环磷酰胺能使小鼠的白细胞计数、淋巴细胞绝对值、嗜碱细胞绝对值、嗜碱细胞百分比、血小板压积等显著降低，单核细胞百分比、中性粒细胞百分比、平均血红蛋白浓度、大血小板比率显著升高，并与空白组相比差异显著。徐尚福等[1]研究发现，环磷酰胺能使小鼠的白细胞、单核细胞、红细胞及血小板的数量显著降低，并与空白组相比差异显著，表明环磷酰胺能显著降低小鼠白细胞、单核细胞、红细胞和血小板等的数量。本研究表明，环磷酰胺能显著降低小鼠的中性粒细胞总数、中性粒细胞百分比、单核细胞百分比、血小板总数和血小板压积。但是本研究与高敏等[6]和徐尚福等[1]短时间给予小鼠环磷酰胺的不同之处是，本研究发现长时间给予小鼠环磷酰胺能够导致小鼠白细胞总数、淋巴细胞总数、淋巴细胞百分比、单核细胞总数的增加，这可能与长时间的低剂量环磷酰胺刺激机体能够增强机体免疫功能有关[7]。此外，本研究还发现环磷酰胺可以使小鼠的红细胞压积、红细胞分布宽度变异系数和平均血小板体积显著增加。

研究还发现，环磷酰胺作用于动物机体可以导致动物肾阳虚型疾病[2]。而金匮肾气丸是《金医要略》记载治疗肾阳虚弱的代表方剂，可对症治疗环磷酰胺导致的肾阳虚型疾病。张培海等[8]发现金匮肾气丸可以有效地益补肾阳，改善环磷酰胺导致的生殖性疾病；冯璞等[5]发现金匮肾气丸能有效地改善环磷酰胺导致造血功能丧失。本研究发现，在金匮肾气丸治疗结束后，小鼠的体重、中性粒细胞百分比、单核细胞百分比、血小板总数、血小板压积显著升高，白细胞总数、淋巴细胞总数、淋巴细胞百分比、单核细胞总数显著降低，表明金匮肾气丸能有效地改善小鼠血细胞的异常，可能与金匮肾气丸能够阻止环磷酰胺改变血细胞机能尤其白细胞的机能有关。也有研究表明，这一机制可能与金匮肾气丸能阻止环磷酰胺所致小鼠骨髓和脾脏的免疫和造血机能发生改变有关[5]，但是具体以何种方式实现修复血细胞的异常，还需进一步深入研究。

综上所述，金匮肾气丸可以有效改善环磷酰胺导致血常规的异常，尤其在白细胞和血小板机能改善方面表现一定的优势，可为临床用药提供参考。

[1] 徐尚福,杨天华,吴芹,等. 黄芪多糖对环磷酰胺引起小鼠骨髓抑制后造血功能的修复作用[J]. 遵义医学院学报, 2011, 34(5): 473-476.

[2] 蔡涛,尤耀东,张磊,等. Cdyl、G9a、及HDAC1在肾阳虚大鼠睾丸组织中的表达[J]. 成都医学院学报,2017, 12(4): 449-453.

[3] 吴海涛,顾海,尹星,等. 金匮肾气丸对环磷酰胺所致骨髓抑制小鼠的影响[J]. 医药导报, 2008, 27(8): 923-924.

[4] 岳宗相. 金匮肾气丸对雄性环磷酰胺大鼠生殖功能的影响[D]. 成都:成都中医药大学, 2008.

[5] 冯璞,罗崇念,邓友平,等. 金匮肾气丸对免疫缺陷小鼠免疫造血功能的影响[J]. 中药药理与临床,1998(1): 9-11.

[6] 高敏,侯衍豹,杨勇,等. 不同条件环磷酰胺建立小鼠免疫力低下模型的比较及偏最小二乘法(PLS)数学建模分析[J]. 中国比较医学杂志, 2015, 25(9):62-69.

[7] 康慧琳,樊卫平,雷波,等. 不同剂量环磷酰胺对小鼠免疫功能的影响[J].免疫学杂志,2018, 34(4): 308-312.

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EFFECT OF JINKUI SHENQI PILLS ON BLOOD ROUTINE IN CYCLOPHOSPHAMIDE-INDUCED MICE

JIANG Ping1,2, ZHONG Zhi-mei1, ZHANG Liang1, LIU Ying-ying1,2, LU Dao-qiang1, WANG Lin1,*ZUO Rui-hua1,2

(1. College of Biological and Pharmaceutical Engineering, West Anhui University, Liu’an, Anhui 237012, China；2. Anhui Engineering Laboratory for Conservation and Sustainable Utilization of Traditional Chinese Medicine Resources, Liu’an, Anhui 237012, China)

: In order to investigate the effect of Jinkui Shenqi pills on blood routine in cyclophosphamide-induced mice.: 30 male mice were divided into three groups: blank group, model group and treatment group. Mice in the treatment group were given 1.2 g/kg b.w. Jinkui Shenqi pills, once a day; on the 7th day of treatment, the mice in the model group and the treatment group were given 50 mg/kg b.w. cyclophosphamide which was injected intraperitoneally once a week for 35 days. At the end of the experiment, all mice were weighed and blood samples were collected for blood cell analysis.:The body weight, total neutrophils, percentage of monocytes, total platelet count and thrombocytopeniat were significantly lower in the model group than those in the blank group (< 0.05), and Total white blood cells, percentage of lymphocytes, total monocytes, hematocrit, coefficient of variation in distribution width of red blood cells and mean platelet volume were significantly increased (< 0.05). Compared with the model group, the body weight, percentage of neutrophils, percentage of monocytes, total platelet count, hematocrit were significantly increased after treatment (< 0.05); Total white blood cells, percentage of lymphocytes, total monocytes were significantly decreased (< 0.05).: Jinkui Shenqi Pill can effectively improve the blood routine of mice induced by cyclophosphamide, and has reference significance for the prevention and treatment of side effects of cyclophosphamide by Jinkui Shenqi Pill in the course of treatment of tumor diseases.

Jinkui Shenqi Pill; cyclophosphamide; blood routine

1674-8085(2020)01-0097-05

R733.7

A

10.3969/j.issn.1674-8085.2020.01.018

2019-08-16；

2019-10-29

国家中药材产业技术体系项目(CARS-21)；安徽省高校自然科学项目（KJ2018A0413）；安徽省本科质量工程项目（2016sjjd079, 2018zygc075, 2018jyxm1153）；皖西学院教学研究项目（wxxy2018026, wxxy2017078）；皖西学院创新创业人才培养模式改革试验区项目(wxxy2017116)

蒋 平(1989-），男，安徽定远人，助教，从事中西药药理及中药应用研究(E-mail:837264050@qq.com);

钟枝梅(1999-），女，安徽天长人，皖西学院生物制药工程学院动物科学专业2017级本科生(E-mail:3067463235@qq.com);

张 亮(1999-），男，安徽无为人，皖西学院生物制药工程学院动物科学专业2017级本科生(E-mail:41155137@qq.com);

刘莹莹(1999-)，女，安徽泗县人，皖西学院生物制药工程学院动物科学专业2017级本科生(E-mail:1742235275@qq.com);

卢道强(1998-），男，安徽蒙城人，皖西学院生物与制药工程学院动物医学专业2017级本科生(E-mail:1405656942@qq.com);

汪 林(1998-)，女，安徽安庆人，皖西学院生物制药工程学院动物医学专业2017级本科生(E-mail:1946870243@qq.com);

*左瑞华(1965-），女，高级实验师，主要从事中西药药理及中药应用研究(E-mail:646923623@qq.com).