人乳头瘤病毒感染与阴道微生态、炎症反应的关系分析

王 希

人乳头瘤病毒(HPV)是功能基因E1-E7及结构基因L1、L2共同组成的嗜上皮性双链脱氧核糖核酸(dsDNA)，多为一过性感染现象，但仍有10%女性可持续感染，且HPV持续感染不仅是宫颈病变的重要危险因素，也是导致宫颈癌的主要病因之一[1-2]。阴道微生态系统则在生殖道感染、尿道感染的预防中扮演重要角色，其具有动态变化特征，并受年龄、经期时长、性交频率等多因素影响。阴道微生物不仅可执行生理功能，亦可抵御明显病原菌或抑制潜在病原菌上，一旦菌群结构失衡，则可增加生物个体感染各种疾病的风险[3-4]。同时，有研究[5-6]报道，当局部微环境中炎症因子发生异常改变，Th1/Th2平衡被打破，并向Th2漂移，则可引起机体免疫应答紊乱，增加患病风险。当前研究HPV感染、阴道微生态、炎症反应的临床报道虽并不少见，但多基于宫颈病变基础，且诊断方式、所选取指标内容繁杂不一、研究对象各异，仍有待持续补充及完善。鉴于此，本研究采集病例，并着重分析HPV感染与阴道微生态、炎症反应的关系，旨在进一步补充及完善其与阴道微生态、炎症反应的关系，为HPV的临床防治提供参考意见，现作报道。

1 资料与方法

1.1 纳入与排除标准 纳入标准：(1)性生活规律；(2)月经规律，经期持续时间为5～7 d；(3)入组前1周内无抗生素使用史；(4)样本采集前3 d内无性生活史；(5)无阴道灌洗史；(6)无阴道用药史；(7)入院后均行HPV、宫颈液基细胞学及阴道微生态检测；(8)知晓研究内容并自愿签署研究知情同意书。排除标准：(1)合并糖尿病或高血压疾病；(2)系统性红斑狼疮病人；(3)风湿性免疫疾病病人；(4)正在行宫颈病变治疗病人；(5)全子宫切除病人；(6)妊娠期、哺乳期女性；(7)合并宫颈癌前病变或宫颈癌病人。

1.2 一般资料 按上述纳入与排除标准将2014年1月至2018年2月于我院确诊为HPV感染且宫颈液基细胞学阴性病人182例设为HPV感染组，年龄20～48岁，首次性生活年龄18～25岁；另将同期于我院行健康体检或孕前检查，HPV及宫颈液基细胞学阴性的160名女性设为对照组，年龄19～49岁，首次性生活年龄18～24岁；2组年龄、首次性生活年龄具有可比性。

1.3 检测方法 (1)HPV检验：应用样本刷在子宫颈、外口顺时针旋转5圈收集子宫颈脱落细胞，并置入保存液，13 000 r/min离心10 min后弃上清液，再加入50 μL裂解液后100 ℃下加热15 min，13 000 r/min离心10 min后留取上清液；依次PCR扩增、杂交、洗膜、显色，依据对照膜条在PC位置上的显色判定结果，蓝色提示杂交显色正常，斑点显现位置即为HPV亚型。(2)阴道微生态检测：应用无菌棉拭子留取阴道侧壁上1/3分泌物，第一根棉拭子用pH精密试纸检测(奥克，pH>4.5即诊断为pH值升高)，0.9%氯化钠溶液分泌物置于玻片上，400倍镜下观察阴道假丝酵母菌病(VVC)、需氧菌性阴道炎(AV；参照Donders诊断表，评分≥3分即诊断为AV阳性)、白细胞(WBC；>10个/HPF即可诊断为阴道炎症)及乳杆菌(Ⅱb、Ⅲ即定义为乳杆菌减少)；第二根棉拭子涂片，1 000倍镜下观察VVC(结合10%KOH湿片，发生芽生孢子或假菌丝即诊断为VVC阳性)、细菌性阴道病(BV；Nugent≥7分为BV阳性)。(3)炎症反应：暴露宫颈口后应用5 mL灭菌0.9%氯化钠溶液冲洗宫颈口及宫颈表面，后穹隆吸出4 mL灌洗液，混匀后装入1.5 mL无菌EP管，3 000 r/min 4 ℃条件下离心5 min；取上清液分装后-80 ℃保存，ELISA双抗体夹心法检测上清液中细胞因子白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、IL-10水平，并计算IFN-γ/IL-4、IL-2/IL-4比值；其中ELISA试剂盒购自欣博盛(深圳)，酶标检测仪检测各孔相对应OD450值；将每个标准品及标本的OD值-空白孔OD值，按不同浓度标准品所对应的OD450为纵坐标，标准品浓度为横坐标，绘制标准曲线并求出相应位置样本中细胞因子含量。

1.4 统计学方法 采用t(或t′)检验、χ2检验和logistic回归分析。

2 结果

2.1 2组阴道微生态异常情况比较 2组WBC>10个/HPF比例差异无统计学意义(P>0.05)；但HPV感染组中BV、VVC及AV阳性、pH>4.5、乳杆菌减少率均高于对照组(P<0.05～P<0.01)(见表1)。

表1 阴道微生态异常情况在2组中比较(n)

2.2 2组炎症反应指标比较 2组TNF-α、IL-6、IL-10比较差异无统计学意义(P>0.05)；但HPV感染组IL-2、IFN-γ、IFN-γ/IL-4、IL-2/IL-4均低于对照组，IL-4高于对照组(P<0.01)(见表2)。

2.3 HPV感染与阴道微生态、炎症反应的相关性分析 将HPV感染、阴道微生态及炎症反应指标分别赋值，HPV感染为因变量(阳性=0、阴性=1)，BV(阳性=0、阴性=1)、VVC(阳性=0、阴性=1)、AV(阳性=0、阴性=1)、pH值(>4.5=0、≤4.5=1)、乳杆菌(减少=0、正常=1)、IL-2(与对照组均值95%CI范围内特定值为参考，低于参考值=0，高于参考值=1)、IL-4(低于参考值=0，高于参考值=1)、IFN-γ(低于参考值=0，高于参考值=1)、IFN-γ/IL-4(低于参考值=0，高于参考值=1)、IL-2/IL-4(低于参考值=0，高于参考值=1)，经logistic回归分析，BV、VVC、AV、pH值、乳杆菌、IL-2、IFN-γ、IFN-γ/IL-4、IL-2/IL-4均与HPV感染密切相关(P<0.05～P<0.01)(见表3)。

表2 2组炎症反应指标比较

*p示t′值

表3 HPV感染与阴道微生态、炎症反应的logistic回归分析

3 讨论

本研究显示，2组阴道微生态指标中WBC>10个/HPF比例差异无统计学意义；但HPV组中BV、VVC及AV阳性、pH值>4.5、乳杆菌减少比例均显著低于对照组；且进一步logistic回归分析，BV、VVC、AV、pH值、乳杆菌均是HPV感染的独立影响因素。其中BV、VVC与HPV感染的临床报道较多，如孟龄婷等[7-8]报道，BV、VVC与HPV感染密切相关，本研究结论均与之一致；分析或与BV、VVC病人乳杆菌下降，普雷沃菌、人形支原体等增加后导致HPV感染风险更高有关。也有部分研究结论认为，VVC系过敏反应的一种，其虽可引起局部血管扩张，增加血管通透性并引发炎症反应，但对阴道菌群无明显破坏作用，因此，VVC与HPV感染的关系仍有待持续补充及完善[9-10]。

同时，夏玉洁等[11]报道HPV组中AV阳性比例高达75.0%，提示AV亦是HPV感染的重要影响因素，本研究结论与之相一致，分析或因AV感染引起中重度炎症反应后，受慢性炎症刺激影响，机体自然免疫反应机制被抑制，故具更高的感染风险；潘颖等[12]则报道，HPV病人阴道菌群中乳杆菌明显减少，亦与本研究结论相一致；究其原因，正常情况下，阴道微生物中，乳杆菌占优势地位，其系维持阴道生态平衡、抑制病原微生物生长、增强阴道局部抗感染能力及抗肿瘤能力的重要菌落，一旦乳杆菌减少，其便难以发挥对应生理功能。而pH作为评价阴道微生态的综合评价指标，一般正常女性阴道pH值维持在3.8～4.5之间，一旦宿主机体状态发生变化，阴道内乳杆菌减少便可直接影响乳酸分泌，导致pH值异常上升，而pH值上升又进一步加重阴道微生态紊乱，并增加HPV感染风险，这与韩一栩等[13]的报道结论相一致，均提示阴道pH值与HPV感染密切相关；温先勇等[14]采集617例HPV感染者进行研究后亦指出，阴道酸碱度是影响HPV感染率的重要因素。

本研究还显示，2组TNF-α、IL-6、IL-10比较差异无统计学意义；但HPV感染组IL-2、IFN-γ、IFN-γ/IL-4、IL-2/IL-4显著低于对照组，IL-4高于对照组，进一步logistic回归分析显示，HPV感染与IL-2、IFN-γ、IL-4、IFN-γ/IL-4、IL-2/IL-4密切相关。其中IL-2作为免疫应答及免疫调节的核心因子，直接影响免疫细胞功能及宫颈局部免疫状态，并可增强巨噬细胞杀伤肿瘤的活性；IFN-γ则由活化的TH、NK细胞产生，主要发挥免疫调节作用，是促进Th1细胞发育、抑制Th2细胞活性及增殖的重要细胞因子；IL-4则主要由激活的Th2细胞分泌，可促进Th细胞向Th2细胞分化，并抑制其向Th1细胞分化；正常情况下，Th1、Th2细胞相互拮抗维持平衡，一旦其向Th2偏移，即可引起机体免疫应答紊乱，增加HPV感染风险[15-16]。

综上所述，HPV感染与阴道微环境、炎症反应具一定关联性，积极纠正阴道微环境紊乱，改善局部炎症反应，或可降低HPV感染风险。