白花九里明提取液对肺损伤小鼠肺组织超氧化物歧化酶、丙二醛表达的影响▲

欧庾婷 王彩冰 韦显林 陈良广 屠兴荣

(右江民族医学院1 临床医学院，2 应用生理研究室，广西百色市 533000，电子邮箱：2530335018@qq.com)

白花九里明为菊科植物，是壮族民间常用于祛风除湿、活血调经、止血、利水的药物，广西大部分地区均有分布[1-2]。近年国内有文献报告，白花九里明有护肝、降压、止血、镇痛、消炎等作用[3-6]，但尚无有关白花九里明对肺组织影响的文献报道。本课题组建立小鼠肺损伤模型，观察白花九里明提取液灌胃治疗对小鼠肺悬液的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力、丙二醛含量的影响，并与临床用于治疗肺部疾病的药物氨溴索进行比较分析，探讨白花九里明对肺损伤的改善作用，为白花九里明的利用和开发提供实验资料。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康昆明小鼠60只，5周龄左右，雌雄各半，体质量25～35 g，由右江民族医学院动物实验中心提供(实验动物生产许可证：SCXK桂2017-0003；实验动物使用许可证：SCXK桂2017-0004)。实验前适应性喂养1周，分笼饲养，自由进食和进水，室温25℃左右、湿度50%～60%、日光照12 h。

1.2 药品、试剂及器械 白花九里明采于广西壮族自治区百色市郊，晒干备用。0.9% 氯化钠溶液(青州尧王制药有限公司，批号：2218112103)，盐酸氨溴索(石药集团欧意药业有限公司，批号：1539180673)，四氯化碳(成都市科龙化工试剂厂，批号：20160520)。SOD测试盒、丙二醛测试盒(南京建成生物工程研究所，批号：20190109、20190109)。多功能酶标仪(上壹桥国际贸易有限公司，型号：TriStar LB941)，离心机(上海安亭科学仪器厂，型号：安亭 TGL-16G)；手持台式两用均质器(美国PRO Scientific 公司，型号：PR0200)；三用恒温水箱(金坛市医疗仪器厂，型号：HH-W600)。

1.3 白花九里明提取液的制备过程 取500 g白花九里明干草，用4 000 mL 30℃蒸馏水浸泡1 h，文火煮沸2 h，过滤液文火隔水浓缩至500 mL(相当于生药1 g/mL)，冷却后放入4℃冰箱保存备用，用时以双蒸水配成低、中、高浓度(150 mg/mL、300 mg/mL、600 mg/mL)。

1.4 动物分组、给药及建模方法 将小鼠随机均分为正常对照组、模型对照组、氨溴索组以及白花九里明低、中、高浓度组，每组10只。正常对照组和模型对照组给予0.9%氯化钠注射液灌胃，氨溴索组给予4.3 mg/mL盐酸氨溴索溶液灌胃，白花九里明低、中、高浓度组分别给予150 mg/mL、300 mg/mL、600 mg/mL的白花九里明提取液灌胃。灌胃30 min后，正常对照组给予0.9%氯化钠注射液，其余组给予0.2%四氯化碳腹腔注射。灌胃每天1次，腹腔注射隔天1次，共30 d，灌胃和腹腔注射的用量均按小鼠体质量计算，10 mL/kg。根据民间治疗用量，将白花九里明按体表面积换算成小鼠用量[1-2]，根据临床用于治疗肺部疾病药物的用量，将氨溴索换算成小鼠用量进行灌胃[7]。

1.5 小鼠肺悬液的制备 末次灌胃前禁食12 h、禁水2 h，末次灌胃30 min开胸取肺加冰冻0.9%氯化钠注射液，用手持台式两用均质器搅拌制成10%肺匀浆，将装有肺匀浆的试管放入4℃低温离心机以3 000 r/min的速度离心10 min，分离上清液制备成肺悬液。

1.6 肺悬液SOD活性、丙二醛含量检测 按照SOD测试盒、丙二醛测试盒说明书，采用多功能酶标仪分别检测肺悬液SOD活性(羟胺法，波长550 nm)、丙二醛含量(硫代巴比妥酸法，波长532 nm)的吸光度值，再根据测试盒说明书提供的公式计算肺悬液的SOD活性和丙二醛含量。

1.7 统计学分析 采用SPSS 16.0软件进行统计分析，计量资料以(x±s)表示，多组间比较采用方差分析，两两比较采用SNK-q检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

模型对照组的SOD活性低于其他5组(均P<0.05)，但其他组间两两比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。模型对照组的丙二醛含量高于其他5组，白花九里明低浓度组、白花九里明中浓度组的丙二醛含量均高于正常对照组(均P<0.05)，而其他组间两两比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。见表1。

表1 6组小鼠肺悬液SOD活性和丙二醛含量比较(x±s)

注：与正常对照组比较，*P<0.05；与模型对照组比较，#P<0.05。

3 讨 论

丙二醛含量间接反映机体组织细胞受到自由基攻击而发生脂质过氧化的严重程度；SOD能清除机体自由基，其活力间接反映了机体清除氧自由基的能力[8-9]。本实验结果显示，模型对照组的肺悬液SOD活性低于正常对照组，丙二醛含量高于正常对照组(均P<0.05)，提示该组小鼠肺组织细胞发生脂质过氧化、SOD消耗增多，这是由肺组织受到自由基攻击造成肺组织细胞损伤所致，可见四氯化碳诱发肺损伤模型制备成功。

白花九里明有护肝、降压、止血、镇痛、消炎等作用[3-6]。本实验结果显示，白花九里明低浓度组和中浓度组的丙二醛含量高于正常对照组，且低于模型对照组(均P<0.05)，提示这两组小鼠的肺组织细胞出现脂质过氧化损伤，但损伤程度轻于模型对照组，说明低、中浓度白花九里明能在一定程度上减轻四氯化碳对肺组织细胞的损伤；白花九里明高浓度组、氨溴索组的丙二醛含量均低于模型对照组(均P<0.05)，且与正常对照组比较差异无统计学意义(均P>0.05)，提示这两组小鼠的肺组织细胞没有出现明显脂质过氧化损伤，说明高浓度白花九里明和氨溴索能抵抗四氯化碳对肺组织细胞的损伤。此外，白花九里明低、中、高浓度组和氨溴索组的SOD活性均高于模型对照组(均P<0.05)，而与正常对照组比较差异无统计学意义(均P>0.05)，提示白花九里明和氨溴索能增加肺组织细胞的SOD活性，增强肺组织清除氧自由基的能力。

盐酸氨溴索可促进肺泡表面活性物质生成、降低痰黏度和增强支气管黏膜纤毛运动，具有改善通气和保护肺功能的作用[7，10]。本实验中，白花九里明各浓度组的丙二醛含量和SOD活性与氨溴索组比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)，提示白花九里明和氨溴索的作用相似。

综上所述，白花九里明可提高肺组织细胞的SOD活性，抵抗自由基对肺组织的攻击，从而减轻四氯化碳对肺组织细胞的损害，与氨溴索的作用效果相似，有望成为新一代防治肺部炎症的药物。但白花九里明能否促进肺泡表面活性物质生成和支气管黏膜纤毛运动有待进一步研究。