外周血白介素-9与T细胞亚群在帕金森病患者中表达的临床价值

史慧静

(濮阳市油田总医院，河南 濮阳 457001)

帕金森病(PD)是较为常见的一种神经系统退行性病变，发病原因可能为遗传、炎症、氧化应激、环境、环境毒物等造成的代谢障碍，主要病理变化为黑质纹状体的多巴胺能神经元变性，确切发病机制尚不明确[1-3]。有研究表明[4-5]，机体自身免疫与PD存在一定联系，Th9可参与炎性反应的发生，还可介导一系列自身免疫性疾病，是一种新型的辅助性T细胞亚群。白细胞介素-9(IL-9)为细胞因子，也呈现过高的表达水平，其作用可能与促进神经损伤引起炎性反应等相关，但临床有关IL-9在PD表达作用的相关研究甚少[6-7]。本研究探讨了IL-9与T细胞亚群Th9在PD患者中表达的临床价值，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2017年3月—2018年3月收治的PD患者73 例作为观察组，其中男38 例，女35 例，年龄(63.23±5.52) 岁；选择本院同期体检中心健康志愿者70 例作为对照组，其中男39 例，女31 例，年龄(62.32±5.10) 岁。两组性别、年龄等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。本研究经医院伦理委员会同意，研究对象均同意并签署知情同意书。

纳入标准：患者自愿入组，配合治疗；经外周血生化检验，炎症指标未见异常患者；均符合中国帕金森病诊断标准(2016版)。

排除标准：孕妇及哺乳期妇女；小脑病变者；脑外伤、脑卒中、脑膜炎病史患者；无法配合治疗的患者；神经系统疾病史患者；患有行为、语言和记忆力障碍伴严重痴呆者[8]。

1.2 方法

1.2.1 采集标本

研究对象禁食12 h，次日清晨采空腹静脉血，并置于肝素抗凝管内，将采集的全血分为2 份，一份离心后进行血清分离，对其进行酶联免疫吸附测定法(ELISA)实验，另一份血样采取密度提取离心法进行分离外周血单个核细胞(PBMC)。

1.2.2 Th9细胞流式检测

24孔板内各孔加入离子霉素1 μL(1 μg/μL)，佛波醇酯类多克隆刺激剂5 μL(10 ng/μL)，莫能霉素4 μL(0.5 μg/μL)，各孔内约加入PBMC 2×106个，均由美国Enzo公司提供。加入1 mL的RPMI 1640培养基后对其进行5 h刺激。将细胞收集于离心管内进行离心，采用PBS进行洗涤，共洗涤2 次，然后将上清液去掉，加入破膜液500 μL，避光，时间为30 min，离心、去掉上清液、洗涤2 次，将藻红蛋白-抗人IL-9抗体加入，避光30 min，洗涤2 次，250 μL PBS重悬，然后进行检测，并对所有标本进行同型对照(由美国eBio-Science公司提供同型对照抗体)。结果以CD4+，IL-9+T细胞在CD4+T细胞中比例统计。

1.2.3 血清IL-9的检测

血清IL-9的表达采用ELISA法进行检测，操作严格依据试剂盒进行(购自上海博耀生物科技有限公司)。

1.3 观察指标

对PD患者外周血中IL-9的表达水平、Th9细胞的比例、H-Y分期与PD患者外周血中IL-9表达的关系、H-Y分期与PD患者外周血Th9比例的关系进行分析。

1.4 统计学方法

2 结 果

2.1 两组外周血中IL-9表达水平比较

观察组患者外周血IL-9表达水平为(15.98±3.01) pg/mL，对照组为(7.61±0.81) pg/mL，两组比较，差异具有统计学意义(t=11.23，P<0.05)。

2.2 两组外周血中Th9细胞比例的比较

观察组外周血中Th9细胞的比例为(1.31±0.31)%，对照组为(0.62±0.10)%，两组比较，差异具有统计学意义(t=8.692，P<0.05)。

2.3 H-Y分期与PD患者外周血中IL-9表达的关系

依据H-Y分期法将观察组患者分为5期，1期22 例，2期20 例，3期17 例，4期10 例，5期4 例。对照组外周血IL-9表达水平为(7.61±0.81) pg/mL，观察组中1期为(12.34±1.54) pg/mL，2期为(15.73±0.82) pg/mL，3期为(17.48±1.14) pg/mL，4期为(19.57±0.92) pg/mL，5期为(21.42±1.05) pg/mL。观察组各期与对照组比较，差异均有统计学意义(t分别为12.31，29.23，30.26，40.24，31.45，P<0.05)，观察组各亚组间比较，差异具有统计学意义(F=79.24，P<0.05)。

2.4 H-Y分期与PD患者外周血Th9的比例关系

对照组外周血Th9比例为(0.62±0.13)%，观察组1，2，3，4，5期患者外周血Th9比例分别为(0.79±0.19)%，(1.19±0.07)%，(1.51±0.11)%，(1.69±0.09)%，(1.83±0.12)%。对照组与观察组各期比较，差异均有统计学意义(t分别为5.998，17.244，26.357，27.478，18.369，P<0.05)；观察组各亚组间比较，差异均有统计学意义(F=169.356，P<0.05)。

3 讨 论

PD是一种老年人常见的中枢神经系统病变，主要特征为黑质-基底神经节病变，患者多发生不同程度的认知障碍和运动神经功能障碍，近年来发病率呈逐渐上升趋势[9-10]。病理状态下的炎性反应和氧化应激反应会导致神经元代谢紊乱，是PD的发病原因，此外，由α-突触核蛋白的聚集导致的免疫反应也是重要的发病原因[11-12]。有研究表明，PD患者T细胞免疫存在异常，患者CD4+T/CD8+T比值较之前降低。

CD4+T存在不同的亚群，Th9亚群是新的一种亚群。辅助性CD4+T细胞可以分为不同的亚群，Th9亚群是分泌专一的以细胞因子IL-9为主的一种新亚群。有研究表明，Th9和IL-9参与众多的炎性反应和免疫性疾病[13]。有学者指出，结肠炎的发生、进展均有Th9的参与。也有研究表明，Th9在结肠炎患者肠组织的显著增高，表明Th9比例的增高在炎性反应中对其自身的免疫反应具有抑制作用[14]。综上所述，Th9在外周和中枢的免疫性疾病及炎性疾病中具有重要作用，IL-9对Th9具有调节作用。本文结果表明，观察组患者外周血中IL-9的表达水平和外周血中Th9的比例较对照组均明显增高，且随着病情的进展，Th9和IL-9在PD发生、发展过程中发挥了重要作用。