趋化因子受体CXCR3在乳腺癌分子亚型HER2过表达型中的表达及意义

安晓燕，田秀娟

（山西省大同市第五人民医院，山西 大同 037000）

乳腺癌是危害妇女生命的恶性肿瘤之一，近年来，随着社会环境的变化，乳腺癌发病率有不断增加和年轻化的趋势。影响乳腺癌患者生存期的重要因素，包括浸润和转移。为预测患者预后，促进临床治疗指导，研究乳腺癌浸润、转移相关指标具有重要的意义。趋化因子是一类可诱导的促炎细胞因子。在多种肿瘤的发生、生长和转移过程中，趋化因子发挥了重要的作用，主要因为趋化因子结合相应细胞表面的特异性受体。内皮细胞等的胞膜，以及免疫细胞上，通常有趋化因子受体表达，其属于G蛋白偶联受体（GPCR）。根据不同配体的结合方式，可以将趋化因子受体分为以下类型：CX3C类趋化因子受体（CX3CR）、CXC类趋化因子受体（CXCR）、C类趋化因子受体（CR），以及CC类趋化因子受体（CCR）[1]。CXCR3是CXC趋化因子亚家族的受体，CXCR3发挥作用，主要是结合CXCLl l、CXCLl0、CXCL9。研究显示，多种肿瘤的侵袭转移中，与CXCR3过度表达密切相关，比如肝癌、结肠癌、肺癌等。但有关于研究乳腺癌中的CXCR3比较少。随着分子生物学的发展，基于人表皮生长因子受体2（HER2）、雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）分子表达状况的分子分型，为靶向治疗、内分泌治疗乳腺癌提供借鉴。HER2过表达型乳腺癌，侵袭性高、容易复发和远处转移，预后差。我们通过检测CXCR3在乳腺癌分子亚型HER2过表达型中的表达，分析其与HER2及淋巴结转移的关系。

1 材料与方法

1.1 材料 60例乳腺癌标本取自大同市第五人民医院病理科外检档案2010-2015年手术患者。60例中女性58例，男性2例。年龄35-80岁，平均58岁。选取基于HER2、雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）分子表达状况的分子亚型病例，管腔A型11例，管腔B型15例，HER2过表达型34例。伴有同侧腋窝淋巴结转移者24例，不伴同侧腋窝淋巴结转移者36例。选取乳腺增生症组织30例。所选病例切片及分子分型均由两名资深病理医师复检，对于HER2 2+者，送有资质的相关实验室进一步经FISH检验证实后入组。

1.2 试剂和免疫组化染色 使用磷酸盐缓冲液PBS（福州迈新生物技术开发有限公司）。DAB显色试剂盒（DAB-0031）（福州迈新生物技术开发有限公司）。二步法Elivision TM plus（KIT-9903）免疫组化检测试剂盒（福州迈新生物技术开发有限公司）。鼠抗人CXCR3抗体（美国R&D公司）。工作浓度为 1:100。根据试剂盒的说明进行相应的操作。

对于蛋白表达的检测，采用免疫组化Elivion二步法的方式。标本切片厚4 μm。使用10%中性福尔马林，固定标本。使用石蜡包埋。抗原修复处理应用柠檬酸盐。DAB显色。一抗4oC过夜。以PBS替代一抗，作为阴性对照。已知CXCR3阳性的组织切片，作为阳性对照。主要在乳腺癌细胞胞质和胞膜，显示CXCR3的表达。呈现为棕褐色或者棕黄色的颗粒状。依据阳性细胞的百分率，胞膜、胞浆着色的强弱，显示为：阴性＜10%，10%-25%+，25%-50% ++，51%-75% +++，＞76% ++++。

1.3 统计方法 采用SPSS 20.0分析数据，计数和计量资料比较分别行χ2和t检验，P＜0.05为有统计学差异。

2 结果

2.1 CXCR3在乳腺癌分子亚型中表达 见表1。CXCR3阳性表达率，管腔A型36.4%（4/11）和HER2过表达94.1%（32/34）有显著性差异（P＜0.05），管腔B型81.3%（12/15）和管腔A型36.4%（4/11）有显著差异（P＜0.05），管腔A型和管腔B型间无明显差异，无统计学意义（P＞0.05）。

表1 CXCR3表达与分子亚型的关系

2.2 CXCR3表达与伴同侧腋窝淋巴结转移的关系 见表2。乳腺癌伴有同侧淋巴结转移者24例，CXCR3阳性表达者18例（75.0%）。不伴有同侧淋巴结转移者36例，CXCR3阳性表达者12例（33.3%），两组间差异有显著性（P＜0.01）。

表2 CXCR3表达与淋巴结转移的关系

2.3 30 例乳腺增生症组织切片CXCR3表达均为阴性。

3 讨论

研究发现表明，多种肿瘤的发生、生长和转移过程中，趋化因子挥重要作用。趋化因子促进肿瘤的发展和转移，主要通过蛋白水解酶分泌，诱导血管生成。也可以将免疫活性细胞激活，或者相关血管形成抑制发挥作用。作为细胞因子，CXC趋化因子亚家族与肿瘤转移有重要的联系。在器官特异性转移，以及肿瘤的发展中，CXCR3发挥相应的作用。研究发现，CXCR3 mRNA在肾细胞癌组织中的蛋白表达，比癌旁组织更高[2]。在肾细胞癌的发生、发展中，CXCR3发挥一定的作用。研究中，CXCR3蛋白在胃癌组织中，比癌旁组织高。研究中，CXCR3的表达在乳腺癌组织，比癌旁组织更高。包括蛋白水平、mRNA水平。有研究显示，结肠癌组织中，CXCR3呈阳性表达，并且正常结肠上皮组织、癌旁组织中，CXCR3不表达。我们的研究结果显示，CXCR3阳性表达率与乳腺癌分子亚型HER2过表达型呈正相关性，而已有的大量研究表明，HER2过表达型乳腺癌预后差，容易复发和远处转移。提示在乳腺癌的发生发展过程中，CXCR3及其配体具有重要作用。

有学者研究报道，肺癌的淋巴结转移、骨肉瘤的肺转移与CXCR3表达有关。CXCR3在恶性黑色素瘤中的表达，与远处转移、淋巴结浸润、肿瘤大小都有关联。高表达CXCR3，与肿瘤的转移、侵袭都有一定的相关性[3]。研究显示，CXCR3阳性的结肠癌患者预后很差。且其表达与淋巴结转移呈正相关。研究显示，乳腺癌淋巴结转移阴性组，CXCR3表达明显比阳性组更低。CXCR3在乳腺癌组织中表达的越高，淋巴结转移累及数目越多。本次研究显示，相比不伴淋巴结转移组，CXCR3阳性表达在伴有同侧淋巴结转移组更高。反映了CXCR3的表达可能与促进乳腺癌转移有关。

本研究结果提示，趋化因子受体CXCR3蛋白检测可以作为判断乳腺癌预后的因子，为患者的诊疗提供一定的指导。