新生儿血液样本溶血对血清NSE检测结果的影响及其校正公式的建立

唐莉莉

（长兴县人民医院，浙江 湖州 313100）

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集长兴县人民医院在2015年期间出生时间小于24 h的新生儿并对其血清样本和资料进行统计，其中男新生儿共44名，女新生儿共28名，共计72名。对起其他不同时间出生的588位新生儿血清的胆红素进行综合性的回顾分析来对血清当中胆红素分布特征进行探索。

1.2 研究方法 使用文齐氏液、氰化高铁血红蛋白配置的标准液等材料进行血清分析，使用NSE检测试剂和配套的全自动化学分析系统对血清当中具体成分进行深入分析，随后根据吸光度的不同来建立起来Hb标准曲线。

1.2.1 标准曲线 利用TU-1901双光紫外线设备，其分光度计测量50、100、150、200 g/L Hb标准也在540纳米处吸光度（A）值，将A值作为纵坐标，Hb浓度则为横坐标，获得标准曲线。采取10分出生时间不超于24 h的新生儿全血样本混匀以后，从中吸取20 μL加入文齐氏5 mL液体中，摇晃均匀后在15 min测量540纳米处A值，利用标准曲线获得此混合全血的Hb浓度。利用90% Nacl稀释全血Hb浓度，分别为6、8、10 g/L。并吸取100 μL稀释液以后，将其加入到文齐氏2.5 mL液体中，摇晃均匀以后在15 min内测量540纳米的A值，将A值为纵坐标，Hb浓度为横坐标，获得标准曲线。

1.2.2 测定血清中NSE浓度 选择此次研究主体出生时间不超过24 h的新生儿血液样本，将2583×g离心5 min作为标准，血清分离，提取上层血清500 μL，将其放置于干净的试管之内，便于检测NES浓度；对下层红细胞进行吸取，并取200 μL将其冻存至管内，冻存温度控制在-80oC冰箱之内，反复3次。针对已经检测完毕的血清样本吸取出300 μL血清，将其放置另一只干净的试管内，加入经冻融处理后的红细胞10 μL，摇晃均匀后以2583×g离心5 min为标准，吸取上层血清放在干净的试管中，对添加冻融红细胞的进行血清NSR浓度检测。

2 结果

出生在25-120 h的新生儿血清TB浓度为（164.5±74.4）μmol/L，与出生不超过24 h的新生儿相比（45.7±13.1）μmol/L明显较高。在临床上医师出具NSE检测医嘱的新生儿已经达到91.70%，且出生时间＜24 h。出生时间不超过24 h新生儿血液样本有不同的溶血，其样本溶液程度）≥2 g/L Hb，已经达到61.79%。

3 讨论

NSE是一种细胞内的金属酶，由γ-dimerα-γheterodimer组成，血清NSE检测对HIE患儿脑损伤的严重程度及预后具有重要意义。经实验，显示血清NSE浓度的临界值设为40 mg/L，判断HIE及HIE是否严重，阈值为45.4 mg/L，用以判断预后。因此，NSE检测结果的可靠性对HIE的诊断尤为重要。然而，在红细胞中存在一定数量的NSE。血样溶血会导致NSE检测结果的错误增加，这可能会影响临床医生的判断，尤其是在血样不易采集和容易溶血的新生儿中。当新生儿发生生理溶血时，NSE和Hb在体内有自己的代谢模式和半衰期，使得很难评估血清NSE结果与Hb结果之间的关系。尤其是在Hb到胆红素的代谢过程中。本研究结果表明，新生儿血清结核浓度明显高于出生时≤24 h的新生儿。这说明新生儿生理溶血时间或Hb代谢成胆红素的时间可能主要在出生后24 h。

新生儿血清Hb浓度低，如果使用标准HiCN方法，溶血前后A值的差异很小，灵敏度低。因此，此次研究通过对测量方法的改进，有助于提升检测的灵敏反应，结合新生儿血清Hb浓度建立有关标准曲线。由于中枢神经系统病变，治疗窗口时间很短（平均约6 h），因此及时、正确的诊断和治疗HIE预后非常重要。因此，有必要建立新生儿溶血标本的NSE检测结果的校正公式。

总之，应该避免溶血，并且当检测到血清NSE时丢弃溶血样品。但是，新生儿标本采集容易发生溶血，反复采血难以避免，容易引起医患之间的矛盾。因此，对于新生儿溶血样品，在不能再次采集血液的情况下，可以选择校正公式来校正NSE检测结果，以帮助临床评估新生儿HIE的严重程度和预后。