老年社区获得性肺炎并脓毒症患者sCD14和CD14+/HLA-DR表达及意义

石玉英 段训新 黄龙

摘要：目的  探讨老年社区获得性肺炎（CAP）并脓毒症患者血清sCD14和外周血单核细胞CD14+/HLA-DR表达水平及临床意义。方法  选取2015年1月～2018年12月我院呼吸内科及ICU收治的老年CAP患者126例，根据是否并发脓毒症将老年CAP患者分为脓毒症组56例，非脓毒症组70例，另选择老年健康体检者45例为对照组，脓毒症组根据是否存活分为死亡组30例及存活组26例。采用ELISA法和流式细胞术检测并比较各组血清sCD14及外周血单核细胞CD14+/HLA-DR+表达水平，脓毒症组及非脓毒症组48 h CURB-65评分、28 d死亡率。结果  脓毒症组血清sCD14水平高于非脓毒症组和对照组，而CD14+/HLA-DR+表达水平则低于非脓毒症组和对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。死亡组血清sCD14水平高于存活组，CD14+/HLA-DR表达水平低于死亡组，差异有统计学意义（P<0.05）;相关分析显示，血清sCD14水平与CURB-65评分和28 d死亡率呈正相关（r=0.750、0.712，P<0.05），而与CD14+/HLA-DR呈负相关（r=-0.692，P<0.05），CD14+/HLA-DR与CURB-65评分和28 d死亡率呈负相关（r=-0.653、-0.721，P<0.05）。结论  老年社区获得性肺炎并脓毒症患者存在免疫失衡，血清sCD14和CD14+/HLA-DR表達水平与CURB-65评分和28 d死亡率密切相关，可作为早期预测感染性疾病病情严重程度和预后的免疫学指标。

关键词：社区获得性肺炎;脓毒症;sCD14;CD14+/HLA-DR

中图分类号：R631                                  文献标识码：A                                  DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.02.023

文章编号：1006-1959（2020）02-0086-03

Abstract：Objective  To investigate the expression levels and clinical significance of sCD14 and peripheral blood mononuclear cells CD14+/ HLA-DR in elderly patients with community acquired pneumonia （CAP） and sepsis.Methods  From January 2015 to December 2018， 126 elderly CAP patients admitted to our hospital's Department of Respiratory Medicine and ICU were selected. According to the presence or absence of sepsis， elderly CAP patients were divided into 56 cases of sepsis and 70 cases of non-septic In addition，45 elderly healthy people were selected as the control group. ELISA and flow cytometry were used to detect and compare the serum sCD14 and CD14+/ HLA-DR+ expression levels of serum sCD14 and peripheral blood mononuclear cells in each group， 48h CURB-65 score， and 28d mortality in sepsis and non-septic groups. Sepsis group was divided into 30 cases of death group and 26 cases of survival group according to survival.Results  The serum sCD14 level in the sepsis group was higher than that in the non-septic group and the control group， while the expression level of CD14+/HLA-DR+ was lower than that in the non-septic group and the control group，the differences were statistically significant（P<0.05）. The serum sCD14 level in the death group was higher than that in the survival group， and the expression level of CD14+/HLA-DR was lower than that in the death group，the difference was statistically significant（P<0.05）. Correlation  analysis showed that serum sCD14 level was positively correlated with CURB-65 score and mortality （r=0.750，0.712，P<0.05），but negatively correlated with CD14+/HLA-DR （r=-0.692，P<0.05），CD14+/HLA-DR was negatively correlated with CURB-65 score and mortality （r=-0.653，-0.721，P<0.05）.Conclusion  Immunological imbalance exists in elderly patients with communityacquired pneumonia and sepsis. Serum sCD14 and CD14+/HLA-DR expression levels are closely related to CURB-65 scores and mortality， which can be used as an early predictor of the severity and prognosis of infectious diseases index.

Key words：Communityacquired pneumonia;Sepsis;sCD14;CD14+/HLA-DR

社区获得性肺炎（CAP）是老年人呼吸系统常见病及多发病，是具有潜在生命危险的感染性疾病[1]。脓毒症（sepsis）是感染引起的一种全身炎症反应失控状态，病情的进一步发展可引起脓毒性休克和多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfunction syndrome，MODS），病情危重且死亡率高，是重症监护病房患者的重要死亡原因之一[2]，病死率达20%～70%[3，4]。白细胞分化抗原-14（cluster of dmerentiation 14，CD14）是一种存在于单核细胞/巨噬细胞中的糖蛋白，是脂多糖结合蛋白的受体，包括可溶性CD14（sCD14）和膜结合性CD14（mCD14），感染期间激活炎症的瀑布反应。在社区获得性肺炎患者中，低水平mCD14和高水平sCD14能够预测28 d死亡率[5]，在脓毒症的发病中发挥着重要作用。HLA基因系统是人类主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex，MHC），HLA-DR属于HLAⅡ类区，CD14+/HLA-DR表达水平是临床上急危重症患者监测的免疫学指标[6]。本研究通过对老年CAP并脓毒症患者血清sCD14和外周血单核细胞CD14+/HLA-DR表达水平的检测分析，旨在探讨其与CURB-65评分及28 d死亡率的相关性，以期为评估老年CAP患者病情的严重程度和预后及实施免疫干预治疗提供实验室依据。

1资料与方法

1.1一般资料  选择2015年1月～2018年12月九江学院附属医院收治的老年CAP患者126例为研究对象，根据是否并发脓毒症将老年CAP患者分为脓毒症组56例和非脓毒症组70例。脓毒症组男30例，女26例，年龄67～77岁，平均年龄（69.84±3.41）岁;其中死亡30例，存活26例，分别设为死亡组及存活组。非脓毒症组男38例，女32例，年龄66～76岁，平均年龄（70.83±3.61）岁。另选同期健康老年体检人员45例为对照组，男25例，女20例，年龄69～75岁，平均年龄（71.12±3.04）岁。纳入标准：符合中华医学会呼吸病学分会制定的社区获得性肺炎诊断及治疗指南定义标准[7]。脓毒症诊断按照世界危重症医学协会（Society of Critical Care Medicine）及欧洲重症医学协会（European Society of Intensive Care Medicine）提出的诊断标准[8]。排除标准：①入院2周前使用过抗生素;②使用糖皮质激素及免疫抑制剂治疗;③合并自身免疫性疾病、心脑血管病、肝肾疾病、血液系统疾病、恶性肿瘤等疾病。三組性别、年龄比较，差异无统计学意义（P>0.05）。本项研究已经九江学院附属医院伦理委员会批准，患者或家属知情同意并签署同意书。

1.2方法

1.2.1标本采集  于患者住院48 h早晨抽取空腹外周静脉血4 ml 置入促凝管中，静置15 min，3000 r/min离心5 min，分离上层血清置-70℃冷冻保存备用。另使用肝素抗凝的真空管采集静脉血2 ml，采集后立即送检，流式细胞术测定CD14+/HLA-DR表达率。

1.2.2 sCD14、CD14+/HLA-DR表达率测定  血清sCD14水平测定采用ELISA双抗体夹心法，ELISA试剂盒由美国R&D公司提供，以德国BioRob500酶标仪进行检测。单核细胞CD14+/HLA-DR表达率采用 CBAFlex Set试剂盒（美国BD PharMingen公司），严格按说明书操作，然后用SACS CalibuⅡ流式细胞仪和BD CBA软件获取数据并分析。

1.3评价指标及标准  比较各组血清sCD14及外周血单核细胞CD14+/HLA-DR+表达水平，脓毒症组及非脓毒症组48 h CURB-65评分、28 d死亡率。CURB-65评分标准：包括5项指标，每项指标计分值为1分，依次为意识障碍（confusion，C）、血尿素氮（urea，U）>7 mmol/L、呼吸频率（respiratory rate，R）>30次/min、收缩压<90 mmHg或舒张压<60 mmHg、年龄>65岁。

1.4统计学方法  采用 SPSS 18.0 统计软件处理数据，计量资料使用（x±s）表示，比较采用t检验，相关分析应用Pearson相关系数法，P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1各组sCD14、CD14+/HLA-DR、CURB-65评分及28 d死亡率比较  脓毒症组血清sCD14水平高于非脓毒症组和对照组，而CD14+/HLA-DR表达率低于非脓毒症组和对照组，脓毒症组CURB-65评分和28 d死亡率高于非脓毒症组，见表1。

2.2 死亡组与存活组sCD14、CD14+/HLA-DR及CURB-65评分的比较  死亡组血清sCD14水平和CURB-65评分高于存活组，CD14+/HLA-DR表达水平低于存活组（P<0.05），见表2。

2.3 sCD14表达水平与CD14+/HLA-DR、CURB-65评分及28 d死亡率相关性分析  血清sCD14水平与CURB-65评分和28 d死亡率呈正相关（r=0.750、0.712，P<0.05），而与CD14+/HLA-DR呈负相关（r=-0.692，P<0.05），CD14+/HLA-DR与CURB-65评分和28 d死亡率分别呈负相关（r=-0.653、-0.721，P<0.05）。

3讨论

各種感染导致脓毒症及其引起的MODS是危重症患者死亡的高危因素之一，临床上早诊断和早治疗，对改善患者预后具有重要意义，但依据血培养诊断脓毒症费时长，通常检测周期为48～72 h，并且阳性率低。有研究显示[9]，sCD14在脓毒症发生的6 h内即可上升，比常用的PCT和CRP等实验室指标更早，认为sCD14对预测脓毒症的预后有一定的临床价值。

sCD14是一种糖蛋白，分子量为48 KDa，主要存在于人和动物的血液与尿液中，约占机体全部CD14含量的99%，是脂多糖（LipopolySaccharide，LPS）的受体之一。研究显示[10，11]，LPS在sCD14的介导下诱导内皮细胞产生明显的激活反应，包括产生白介素-1以及白介素-6等炎性细胞因子以及趋化因子和生长因子，参与炎症反应而进一步导致组织器官损伤。本研究中脓毒症组血清sCD14水平高于非脓毒症组及对照组，差异有统计学意义（P<0.05），提示sCD14早期升高感染风险增加，sCD14可能参与了感染所导致老年社区获得性肺炎并脓毒症的发生与发展。Masson S等[12]的研究显示正常人血清sCD14水平明显低于脓毒症患者，且死亡者sCD14水平显著高于存活者，说明sCD14水平在预测28 d死亡率中具有一定的临床价值。本研究中脓毒症组28 d死亡率为51.23%，而非脓毒症组为13.91%，差异有统计学意义（P<0.05）。且死亡组sCD14水平高于存活组，相关分析表明血清sCD14水平与CURB-65评分和28 d死亡率均呈正相关，进一步证明sCD14水平升高可能是一项诊断脓毒症和预测死亡风险的生物学标记物。

CD14+/HLA-DR是HLAⅡ类区，单核细胞等抗原递呈细胞表达HLA-DR，从而引起CD14细胞活化，启动和增强免疫应答，其表达水平降低，将使正常免疫应答受到抑制，进而导致病情的发生和发展。脓毒症患者最重要的危险因素是免疫抑制，单核细胞HLA-DR表达下降被认为是脓毒症免疫抑制的重要标志。本研究中脓毒症组和非脓毒症组患者入院48 h外周血单核细胞CD14+/HLA-DR表达率均低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。Lekkou A等[13]以CD14+单核细胞HLA-DR表达率<40%的界值作为脓毒症的免疫状态及预后指标，若参考该指标，本研究脓毒症组绝大多数患者处于免疫抑制状态，其中50%的患者CD14+单核细胞HLA-DR表达率<30%。本研究以28 d生存视为存活期观察，发现脓毒症组患者28 d死亡率达51.23%，高于非脓毒症组的13.91%，差异有统计学意义（P<0.05），CD14+/HLA-DR与CURB-65评分和28 d死亡率分别呈负相关（r=-0.653、-0.721，P<0.05），提示CD14+单核细胞HLA-DR表达率越低，病死率越高。苏磊等[14]在ICU的早期脓毒症患者的研究中也发现，CD14+单核细胞HLA-DR<30%者全部死亡，<40%者病死率80%，本研究结果也支持这一结论。

综上所述，老年社区获得性肺炎并脓毒症患者存在免疫抑制，血清sCD14和CD14+/HLA-DR表达水平与CURB-65评分和28 d死亡率密切相关，可作为早期预测感染性疾病病情严重程度和预后的免疫学参考。

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收稿日期：2019-10-13;修回日期：2019-11-08

编辑/肖婷婷