三丫苦叶提取物对高尿酸血症模型大鼠尿酸合成相关酶调节作用研究

胡向阳，李 安，林春淑，杨 璇

（中山大学附属第五医院中医科，广东 珠海 519000）

高尿酸血症（Hyperuricemia，HUA）是由于长期体内嘌呤代谢障碍致尿酸（uric acid，UA）产生增多及UA排泄减少而引起的代谢性疾病，其中UA生成过多是HUA的重要生化基础［1］。别嘌呤醇是黄嘌呤氧化酶（XOR）抑制剂，自1963年上市以来，目前仍是临床常用抑制尿酸合成药物，但报道其有皮肤及其附件损害、胃肠道损害、骨髓毒性和变态反应等毒副作用［2］。中药如土茯苓、萆薢、金钱草等［3-4］单方或复方治疗HUA研究受到重视和关注，相关临床或实验研究发现中药治疗HUA有促尿酸排泄、肝肾毒性小、作用和缓等优势。三丫苦［Melicope ptelefolia（Champ ex Benth）Hartley］为芸香科（Rutaeeae）蜜茱萸属植物，又名三桠苦、三叉苦、三丫虎等。三丫苦性味苦、寒，有清热解毒、行气止痛、燥湿的功效，主治热病、咽喉肿痛、风湿骨痛等［5］。三丫苦化学成分为黄酮类、生物碱类、挥发油等化合物，有抑菌抗炎、镇痛、抗氧化等作用。我们前期研究发现三丫苦叶对胰岛素抵抗模型大鼠有干预作用［6-7］。本研究观察三丫苦叶提取物对HUA模型大鼠尿酸合成相关酶的调节作用，报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物

Wistar雄性大鼠48只，SPF级，体质量（140±10）g，由中山大学实验动物中心提供，合格证号：粤检证字2017D216。每笼4只分笼饲养，自由饮水，及时更换垫料，定期清洗鼠笼，适应性饲养1周后用于实验。

1.2 实验药物

别嘌醇片（上海信宜万象药业股份有限公司，批准文号H31020334，产品批号07130806，规格100mg/片），临用前以生理盐水溶解浓度为50mg/mL。三丫苦叶购于广东省中医院，以每克生药加水10mL，冷水浸泡60min后，武火煎煮，煮沸后用文火慢煎20min，过滤药液。采用FLT-U系列膜过滤系统（湖北菲尔特公司）过滤药液，115℃、30min湿热灭菌，60℃恒温下旋转蒸发，浓缩为含生药10g/mL的药液，置4℃冰箱保存备用。

1.3 试剂与仪器

氧嗪酸钾、羧甲基纤维素和钠酵母粉由广州天马精细化工厂生产，腺嘌呤由Amresco公司生产，XOR和PRPS检测试剂盒，均购自南京建成生物工程有限公司。LD4-2型低速离心机，北京医用离心机厂生产，Alpha-150p紫外可见分光光度计，上海谱元仪器有限公司生产。

1.4 动物分组、模型制备与给药方法

Wistar大鼠48只，采用数字随机分组法分为正常对照组、模型对照组、别嘌醇组、三丫苦叶提取物组。按参考文献［8］造模方法，除正常对照组外，其余各组均给予10%酵母饲料饲喂，给予腹部皮下注射配置的羧甲基纤维素钠粉和氧嗪酸钾配乳悬液100mg/kg。每天1次，连续15天，制备高HUA模型。正常对照组给予普通大鼠颗粒饲料和同体积的生理盐水，模型对照组给予等体积生理盐水灌胃，别嘌醇组灌胃给予别嘌醇片100mg/kg，三丫苦叶提取物组灌胃给予三丫苦叶提取物10g/kg。每天1次，连续30天。

1.5 指标检测

分别于造模前、造模后15天和给药后7天、15天、30天当晚大鼠禁食不禁水6h，腹腔注射10% 水合氯醛麻醉大鼠，眼眶后静脉采血，将采取的新鲜血加入含肝素抗凝的试管中，4℃，离心15min（3500转/min），分离收取血清。酶比色法检测血XOR和PRPS，操作按试剂盒说明书进行。

1.6 统计学处理

用SPSS20.0 for windows系统软件进行统计学处理。方差齐，均值间差异比较单因素方差分析；方差不齐，均值间差异比较采用校正t检验，组间两两比较采用q检验。计量资料以（±s）表示，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

各实验组大鼠血XOR比较见表1。与正常对照组比较，造模前各实验组大鼠XOR均显著升高（P＜0.01）；给药后第7、15、30天，模型对照组XOR均显著升高（P＜0.01）；给药后7天，别嘌醇组XOR升高（P＜0.05）；给药后7、15天，三丫苦叶提取物组XOR显著升高（P＜0.01）。与模型对照组比较，给药后7、15、30天，别嘌醇组XOR均显著降低（P＜0.01）；给药后15、30天，三丫苦叶提取物组XOR降低（P＜0.05）。与别嘌醇组比较，给药后7、15天，三丫苦叶提取物组XOR升高（P＜0.05）。

表1 各实验组大鼠血XOR比较 （mg/L，±s）

表1 各实验组大鼠血XOR比较 （mg/L，±s）

注：与正常对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型对照组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与别嘌醇组比较，#P＜0.05。

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各实验组大鼠血PRPS比较见表2。与正常对照组比较，造模前各实验组大鼠PRPS均显著升高（P＜0.01）；给药后第7天、15天、30天，模型对照组PRPS均显著升高（P＜0.01），别嘌醇组PRPS有不同程度升高（P＜0.05或P＜0.01）；给药后7天，三丫苦叶提取物组PRPS升高（P＜0.05）。与模型对照组比较，给药后7天、15天、30天，别嘌醇组PRPS均降低（P＜0.05）；三丫苦叶提取物组PRPS降低或显著降低（P＜0.05或P＜0.01）。与别嘌醇组比较，给药后15天、30天，三丫苦叶提取物组PRPS降低（P＜0.05）。

表2 各实验组大鼠血PRPS比较 （mg/L，±s）

表2 各实验组大鼠血PRPS比较 （mg/L，±s）

注：与正常对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型对照组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与别嘌醇组比较，#P＜0.05。

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3 讨 论

HUA发病率呈上升趋势，我国成人HUA患病率为8.4%～13.3%，成为次于糖尿病的第2大代谢性疾病［9］。XOR和PRPS在调节UA生成过程中发挥着重要酶促作用。XOR可催化次黄嘌呤及黄嘌呤生成UA，有效抑制XOR活性，对降低体内尿酸水平有重要意义［10］。PRPS是嘌呤生物合成的重要前体，催化5'-磷酸核糖和ATP 合成磷酸核糖焦磷酸（Phosphoribosyl pyrophosphate，PRPP），PRPP促进嘌呤核苷酸在体内的合成代谢，导致血UA增高［11］。传统服用方式和民间食用习俗是研究中药材疗效的立足点，同时，传统煎熬方式也可借助新技术改进。膜分离技术是以选择性透过膜为分离介质，对混合物中特定组分实现分离、提纯和浓缩的分离技术。膜分离技术超滤膜截留相对分子质量范围为5×103～5×105，中药有效成分相对分子质量大多不超过1000，无效成分如淀粉、树脂、果胶等则在5×104以上。膜分离方法实现中药有效成分与杂质的分离，去除淀粉、蛋白质、树脂等高分子，药液颜色透亮及口感较好，保质期长［12］。

实验发现，三丫苦叶膜分离提取物降低HUA模型大鼠XOR和PRPS水平。值得关注的是，与别嘌醇比较，三丫苦叶提取物组在第7天、15天，XOR升高；给药后第15天、30天，三丫苦叶提取物组血PRPS降低。实验结果提示三丫苦叶提取物可降低HUA模型大鼠XOR和PRPS水平，与别嘌醇片比较效应和缓持久。相比于西药，中药治疗代谢性疾病具有多作用靶点、整体调理等优势。

膜分离技术制备三丫苦叶提取物有一定降尿酸作用，但其效应成分、量效和毒理学研究等尚需进一步研究。