清喉咽合剂中麦冬的薄层鉴别

康凯，鄢长余，于远洋，李娜

（1大连市药品检验所，辽宁 大连；2辽宁中医药大学，辽宁 大连）

0 引言

清喉咽合剂由玄参、连翘、黄芩、麦冬、地黄5味中药制成，具有养阴清肺、利咽解毒等功效，临床用于治疗急性扁桃体炎、咽峡炎[1]。其质量标准收载于《中国药典》2015年版一部[2]，但没有针对麦冬、地黄的检测项目，为全面有效控制药品质量，本文对清喉咽合剂中麦冬和地黄的薄层鉴别进行探索性研究。麦冬有养阴生津、润肺清心的功效，据文献报道，麦冬皂苷D是其重要的甾体皂苷类化合物，与麦冬的药理作用密切相关，是其重要的质量控制指标之一[3]。地黄具清热凉血、养阴、生津之功效[4]。梓醇是地黄中含量最高的环烯醚萜单糖苷，为地黄的主要活性成分[5]；毛蕊花糖苷具有很强的抗炎、抗氧化作用，与地黄生制品的“滋阴”作用相一致[6]。本文建立了以麦冬皂苷D、麦冬对照药材为对照的薄层鉴别方法鉴别处方中的麦冬。并对处方中的地黄进行了以梓醇、毛蕊花糖苷和地黄对照药材为对照的薄层色谱探索性研究。

1 材料

1.1 仪器

BS42000S型电子天平（Sartorius）；双槽薄层层析缸（20×10cm）；超声波清洗仪（仪器型号：KH-500SP，生产厂家：昆山禾创超声仪器有限公司）；薄层色谱数码成像系统（CAMAG VISUALISER）；半自动点样仪（CAMAG LINOMAT 5）；硅胶G预制板（青岛谱科分离材料有限公司，20×10cm）。

1.2 试剂试药

麦冬（批号：121013-201310）、地黄（批号：121180-200604）、梓 醇（批 号：110808-201210）、毛 蕊 花 糖 苷（批 号：110808-201210）均购自中国食品药品检定研究院，麦冬皂苷D（批号：PS1500）购自天津一方科技。其他所用试剂试药均为分析纯。实验用饮片均为厂家提供，经检验均符合《中国药典》2015年版一部各饮片项下有关规定。本实验共收集8个厂家61批样品，样品来源见表1。

表1 样品来源

2 方法与结果

2.1 麦冬的薄层鉴别

取本品10ml，加水饱和正丁醇10ml萃取，分取正丁醇层，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取麦冬对照药材1g，加57%乙醇25ml，超声30min，蒸干，残渣加水10ml溶解，加水饱和正丁醇10ml萃取，分取正丁醇层，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。再取麦冬皂苷D对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg 的溶液，作为对照品溶液。按处方中药味比例，配制不含麦冬的阴性溶液，取此溶液10ml，水浴蒸干，加甲醇1ml，即得。照薄层色谱法（中国药典2015年版四部通则0502）试验，吸取上述四种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-乙酸乙酯-水（4∶1∶5）上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，在日光下检视，供试品色谱中，在与麦冬对照药材和麦冬皂苷D对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

共完成8家企业61批次样品的麦冬薄层色谱鉴别，主斑点共计检出5个，麦冬皂苷D对照品均有检出，阴性溶液无干扰。详见图1-图5清喉咽合剂薄层色谱示例图。由图可知：

（1）1号及6号厂家各个批次之间浓度最均匀，其余厂家均有1至3批次浓度偏高；

（2）2号、5号及6号厂家在Rf值约为0.1处均检出明显斑点，而其余厂家对应位置处均没有斑点；

（3）4号厂家在紧挨麦冬皂苷D下，即Rf值在0.4至0.5之间检出一明显斑点，其余厂家此处无对应斑点。

图1 清喉咽合剂麦冬薄层鉴别

图2 清喉咽合剂麦冬薄层鉴别

1-6：供试品溶液（2号厂家）；7-13：供试品溶液（4号厂家）；s：阴性样品溶液；s1：麦冬对照药材溶液；s2：麦冬皂苷D对照品溶液

图3 清喉咽合剂麦冬薄层鉴别

图4 清喉咽合剂麦冬薄层鉴别

图5 清喉咽合剂麦冬薄层鉴别

2.2 地黄的薄层探索性研究

2.2.1 梓醇的薄层鉴别

取本品10ml，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取地黄对照药材1g，加57%乙醇25ml，超声30min，过滤，水浴蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为对照药材溶液。取梓醇对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg 的溶液，作为对照品溶液。取地黄阴性样品溶液2ml，水浴蒸干，加甲醇1ml，即得。

照薄层色谱法（中国药典2015年版四部通则0502）试验，吸取上述四种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水 （6:4:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，在日光下检视，供试品色谱中，在与地黄对照药材和梓醇对照品色谱相应位置上，显相同颜色斑点。

共完成1家企业13批次样品的地黄薄层色谱鉴别，主斑点共计检出4个，梓醇均有检出，但梓醇对应的点阴性有干扰，详见图6清喉咽合剂薄层色谱示例图。由图可知，对照药材在Rf0.2附近的斑点阴性无干扰，可通过薄层制备，运用液质和核磁定性此斑点，优化展开条件，作为清喉咽合剂中鉴别地黄的专属性对照品。

图6 清喉咽合剂地黄薄层鉴别

2.2.2 毛蕊花糖苷的薄层鉴别

取本品5ml，加80%甲醇25ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水5ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次10ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。取地黄对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。取毛蕊花糖苷对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg 的溶液，作为对照品溶液。取地黄阴性样品溶液2ml，水浴蒸干，加甲醇1ml，即得。照薄层色谱法（中国药典2015年版四部通则0502）试验，吸取上述四种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸（16:0.5:2）为展开剂，展开，取出，晾干，用0.1%的2,2-二苯基-1-苦肼基无水乙醇溶液浸板，晾干，在日光下检视，供试品色谱中，在与地黄对照药材和毛蕊花糖苷对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

共完成1家企业1批次样品（4号厂家）的地黄薄层色谱鉴别，主斑点共计检出3个，检出毛蕊花糖苷，但斑点比较模糊而且毛蕊花糖苷对应的点阴性有干扰，详见图7清喉咽合剂薄层色谱示例图。

3 讨论

麦冬薄层鉴别方法效果良好，展开剂避开了麦冬药材药典鉴别方法的有毒溶剂甲苯，通过对61批样品及阴性对照的检验，证实方法专属性较强、操作简单易行，易重现，可作为对原有的质量标准的补充完善。但由于处方中麦冬的含量最低，而且经过工艺提取，是否存在转化率降低造成薄层色谱检出斑点不够明显，是否考虑纳入标准值得进一步研究。

图7 清喉咽合剂地黄薄层鉴别

通过对8个厂家61批样品的麦冬薄层图可以看出，厂家之间主斑点基本一致，但在Rf0.1和Rf0.4-0.5处，某些厂家之间有差别，可能跟药材采收地及提取工艺不同有关，这两处的成分如为药效成分，此方法可以为药材采收和优化提取工艺提供参考。

地黄的鉴别在查阅大量文献，做了大量工作的基础上还是未能突破，虽然最后得出的薄层鉴别方法效果良好，提取方法简单易行，但遇到的主要问题就是阴性有干扰，按照药典地黄毛蕊花糖苷薄层方法也遇到同样的问题，见图7，原因为本品种玄参药材含有梓醇[7]和毛蕊花糖苷[8]，连翘也含有毛蕊花糖苷[9]，而梓醇[10]和毛蕊花糖苷[11]均为地黄的有效成分。此品种如想增加地黄薄层鉴别建议再寻找地黄其他的更加有特征更加专属的成分进行进一步研究，而这方面的文献研究比较少，还需要一定时间的积累。