2 种雷美替胺杂质的制备与结构确证

钟雅妮王征朱柏任熊渊

（珠海联邦制药股份有限公司，广东 中山528467）

雷美替胺（Ramelteon）化学名为N-〔2-［（8S）-1，6，7，8-四氢-2H-茚并［5，4-b］呋喃-8-基］乙基〕丙酰胺，是日本武田公司（TAKEDA）开发的用于治疗难以入睡失眠症和慢性失眠、短期失眠的药物，分别于2005 年和2008 年在美国和日本上市［1］。 该药品为褪黑素受体激动剂，能模拟由松果体分泌的褪黑素的生理作用，有助于调节睡眠周期，改善睡眠质量。 雷美替胺对褪黑素受体的亲和力较强，对氨基丁酸受体、阿片受体等无亲和力，因此不会产生药物依赖性；对慢性失眠症、慢性原发性失眠症的老年患者疗效确切，且无后遗效应，不良反应与安慰剂相似［2-3］。

随着人们对用药安全要求的不断提高，对药品质量的要求也在不断地提升，特别是针对药品原料中的杂质需要进一步地明确和控制，因此，对药品原料中杂质的研究成了当前研究的热点和重点。 据文献报道，（S）-N-［2-（6-氧代-1，6，7，8-四氢-2H-茚并［5，4-b］呋喃-8-基）-乙基］-丙酰胺（杂质Ⅰ，见图1）是雷美替胺在生物体内的代谢产物［4］，而在实际研究中发现该化合物也是一种降解产物，在雷美替胺产品的制备或储存中同样会产生。 武田公司一项专利报道了在雷美替胺的制备过程中会产生（S）-N-［2-（7，8-二氢-6H-茚并［5，4-b］呋喃-8-基）-乙基］-丙酰胺（杂质Ⅱ，见图1）［5］。 目前，尚未有杂质Ⅰ和杂质Ⅱ的制备分离方法的报道和对照物的销售，本文对杂质Ⅰ和杂质Ⅱ的制备分离方法进行了研究，并进行了结构确证。

图1 杂质Ⅰ和杂质Ⅱ的结构式Figure 1 Structure formula of impurityⅠand impurityⅡ

1 实验部分

1.1 试药与仪器

雷美替胺（珠海联邦制药股份有限公司，20 g）；乙腈（天津康科德科技有限公司，色谱级）；二氯甲烷（广东光华科技股份有限公司，分析级）。

NP2000 型制备色谱仪（汉邦科技）；6470 型质谱（ESI 源，美国Agilent 公司）；AV400 型核磁共振（CDCl3为溶剂，德国Bruker 公司）。

1.2 方法

将雷美替胺置160 ℃高温中破坏2 h，使用适量50%（体积分数，下同）乙腈水溶液对破坏后样品进行溶解，作为制备溶液。 分次注入制备色谱仪，进行第1 次制备［色谱条件：色谱柱为kromasil C18（10 μm，21.2 mm×250 mm），检测波长为225 nm，流速为30 mL／min，流动相为乙腈-水（体积比45 ∶55）］，分别收集相对保留时间为0.5 和1.5 处的峰相对应的洗脱液，所得2 组洗脱液分别置于50 ℃水浴中减压旋蒸将流动相中乙腈蒸出，所得水相分别用100 mL 二氯甲烷萃取2 次，再将二氯甲烷蒸干，得到油状物，然后进行第2 次制备。

1.2.1 （S）-N-［2-（6-氧代-1，6，7，8-四氢-2H-茚并［5，4-b］呋喃-8-基）-乙基］-丙酰胺（杂质Ⅰ）的制备

将第1 次制备所得油状物（相对保留时间为0.5对应的洗脱液）用50%乙腈水溶液溶解，注入制备色谱仪，进行第2 次制备［色谱条件：色谱柱为kromasil C18（10 μm，21.2 mm×250 mm），检测波长为225 nm，流速为30 mL／min，流动相为乙腈-水（体积比45 ∶55）］，收集主峰对应的洗脱液，置于50 ℃水浴中减压旋蒸，将乙腈蒸出，所得水相用二氯甲烷100 mL 萃取2 次，再将二氯甲烷蒸干，所得产物用体积分数90%乙腈水溶液溶解，置于室温下放置12 h重结晶，过滤后得到类白色固体。 经测定色谱纯度为98.2%（约250 mg）。

杂质Ⅰ采用LC-MS 和核磁共振波谱法（1HNMR、13C-NMR）进行结构确证。 MS（ESI）：274.2［M＋H］＋；1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：1.12 ～1.15（t，3H），1.63 ～1.73（m，1H），1.91（s，2H，H2O），2.15 ～2.24（q，2H；m，1H），2.39 ～2.44（q，1H），2.83 ～2.90（q，1H），3.17 ～3.24（m，1H），3.25 ～3.30（q，2H），3.32～3.42（m，2H），4.64 ～4.71（q，1H），4.72 ～4.79（q，1H），5.74（s，1H），6.80 ～6.82（d，1H），7.57 ～7.59（d，1H）；13C-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：9.78，27.43，29.63，33.43，35.23，37.72，42.80，72.50，110.11，123.17，125. 17，130. 37，154. 83，166. 49，174.01，203.64。 杂质Ⅰ的MS 图、1H-NMR 图、13CNMR 图见图2。

1.2.2 （S）-N-［2-（7，8-二氢-6H-茚并［5，4-b］呋喃-8-基）-乙基］-丙酰胺（杂质Ⅱ）的制备将第1 次制备所得油状物（相对保留时间为1.5 对应的洗脱液）用50%乙腈水溶液溶解，注入制备色谱仪，进行第2次制备［色谱条件：色谱柱为YMC C18ODS-AQ（10 μm，10 mm×250 mm），检测波长为225 nm，流速为10 mL／min，流动相为乙腈-水（体积比36 ∶64）］，注入色谱仪，收集主峰对应的洗脱液，置于50 ℃水浴中减压旋蒸，将乙腈蒸出，所得水相用二氯甲烷100 mL 萃取2 次，再将二氯甲烷蒸干，所得产物用体积分数90%乙腈水溶液溶解，置于室温下放置12 h 重结晶，过滤后得到白色晶体。 经测定色谱纯度为98.7%（约150 mg）。

杂质Ⅱ采用LC-MS 和核磁共振波谱法（1HNMR、13C-NMR）进行结构确证。 MS（ESI）：258.1［M＋H］＋；1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：1.08 ～1.12（t，3H），1.72～1.181（m，1H），1.88 ～1.95（m，1H），2.10～2.16（q，2H），2.17 ～2.20（m，1H），2.34 ～2.43（m，1H），2.88～2.95（m，1H），3.00～3.08（m，1H），3.36 ～3.40（q，2H），3.42 ～3.49（m，1H），5.48（s，1H），6.76（d，1H），7.11 ～7.14（d，1H），7.30 ～7.32（d，1H），7.60（d，1H）；13C-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：9.80，29.69，31.34，31.76，34.56，38.05，42.47，104.63，109.56，120. 42，123. 56，137. 60，138. 63，145.06，154.72，173. 67。 杂 质Ⅱ的MS 图、1H-NMR 图、13C-NMR 图见图3。

图2 杂质Ⅰ的MS、1H-NMR、13C-NMR 图Figure 2 MS、1H-NMR and 13C-NMR of impurityⅠ

图3 杂质Ⅱ的MS、1H-NMR、13C-NMR 图Figure 3 MS、1H-NMR and 13C-NMR of impurityⅡ

2 结果与讨论

从MS、1H-NMR 和13C-NMR 数据可见，分离纯化得到的2 种杂质与（S）-N-［2-（6-氧代-1，6，7，8-四氢-2H-茚并［5，4-b］呋喃-8-基）-乙基］-丙酰胺（杂质Ⅰ）、（S）-N-［2-（7，8-二氢-6H-茚并［5，4-b］呋喃-8-基）-乙基］-丙酰胺（杂质Ⅱ）的结构相符，并具有较高的纯度，可以作为雷美替胺质量研究的对照物。杂质Ⅰ为雷美替胺在生物体内的代谢产物和储存中的降解杂质，而杂质Ⅱ在雷美替胺合成过程和储存中均未检出，推测该杂质在一般条件下较难产生，只有在剧烈的高温（160 ℃）中产生，由于是高温破坏产生的杂质，可以归为一种降解杂质。

为了获得较高的杂质收率，第一步的高温破坏试验比较关键，过低的温度不易产生目标杂质，温度太高原料样品容易碳化，160 ℃破坏2 h 是笔者经过测试得到的较优条件，重现性较高。 最后一步重结晶使用体积分数90%乙腈水体系作为溶剂，可以获得较好的固体形态，曾尝试过甲醇-水、丙酮-水体系均不能获得固体形态，只能获得油状物。