不同来源生脉注射液对兔和猫降压作用的比较研究#

黎家敏 马佳丽 杨春 邓林 马文静 荣祖元

·基础论著·

不同来源生脉注射液对兔和猫降压作用的比较研究#

黎家敏*马佳丽 杨春 邓林 马文静 荣祖元Δ

（四川省食品药品检验检测院，四川 成都 611731）

比较不同来源生脉注射液对新西兰兔和猫的降压作用，探讨新西兰兔用于生脉注射液降压作用研究和产品质量评价的可行性。取健康新西兰兔16只和猫4只，均雌雄各半，分别经耳缘静脉缓慢注射50 mg•kg-1（新西兰兔）或腹腔注射45 mg•kg-1（猫）的戊巴比妥钠进行麻醉，按1.0 mL•kg-1的给药体积分别给予A、B和C三个厂家生脉注射液后，立即测定其动脉血压。统计分析比较新西兰兔和猫对不同来源生脉注射液的降压反应。新西兰兔对1.0 mL•kg-1的不同厂家生脉注射液均具有很好的降压反应，降压均值大于3 kPa，且不同来源产品对新西兰兔的降压作用存在一定的差异性，在16只兔体内试验结果均为一致；而猫对生脉注射液的降压反应具有敏感性较高但易耐受的特点。新西兰兔不仅可以用于生脉注射液降压作用的研究，还可用于产品间质量的评价。

生脉注射液；新西兰兔；猫；降压作用

生脉注射液处方源自中医古方“生脉散”，主要由红参、麦冬、五味子组成，具有加强心肌收缩力、增加冠状动脉流量、升高血压、提高心肌耐缺氧能力、扩张血管、抗休克、对化疗药物有增效及减毒等作用。临床上广泛应用于心血管、内分泌等系统疾病[1-2]。目前，常用的中药材受产地和环境影响，造成中药材的质量不够稳定[1]。

生脉注射液具有降低人和动物血压的作用，甚至引起低血压的不良反应[3-6]。虽然有报道生脉注射液对猫的降压物质检查出现不合格[7]。但当前国内没有猫的实验动物标准，实验用猫大多从商贩或收购型饲养场购买，其遗传背景、微生物和寄生虫等携带状况均不清楚，存在实验结果隐存着未知因素的影响和生物安全隐患[8-10]。

本文拟通过利用新西兰兔，研究不同来源生脉注射液的降压作用，并与猫的降压反应结果对较，为今后新西兰兔用于生脉注射液降压作用研究和产品质量评价提供实验基础和参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物

普通级新西兰兔16只，雌雄各半，由邳州市东方养殖有限公司提供。实验动物生产许可证号：SCXK（苏）2017-0002。实验用猫4只，雌雄各半，由成都达硕实验动物有限公司提供。饲养条件：18℃-22℃，相对湿度：40%-70%，自由饮食，光照周期为12/12 h。

1.1.2 仪器

RM6280C多道生理信号采集处理系统，成都仪器厂生产；CPA225D电子天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司生产；MW-6电子台秤，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司生产。

1.1.3 药物试剂

生脉注射液由三个厂家生产。A厂，批号：2001，规格：20 mL/支；B厂，批号：1203，规格：10 mL/支； C厂，批号：1221，规格：20 mL/支。磷酸组胺标准品，批号：150510-201313，规格：约20 mg，来源：中国食品药品检定研究院提供。戊巴比妥钠，批号：130315，规格：25 g/瓶，德国默克公司生产。肝素钠注射液，批号：151710086A，规格：2 mL: 12500单位，常州千红生化制药股份有限公司生产。0.9%氯化钠注射液，批号：G118021804，规格：100 mL: 0.9 g，四川科伦药业股份有限公司生产。

1.2 方法

1.2.1 不同生脉注射液对新西兰兔降压作用试验

取健康合格的新西兰兔16只，按50 mg•kg-1给药剂量，经耳缘静脉缓慢注射戊巴比妥钠溶液进行麻醉后，固定于恒温手术台上。手术分离一侧颈动脉插入连接生理信号采集处理系统的动脉插管，管内充满约750 单位·mL-1的肝素钠溶液作为抗凝剂，记录动物血压。经另一侧耳缘静脉依次注射不同来源生脉注射液，三次给药作为一组，通过调整不同给药顺序再注射另一组（如：A、B、C；B、C、A；C、A、B等），依次循环，给药体积均为1.0 mL•kg-1原液（人最大临床给药剂量）。各次注射速度应基本相同，每次注射后立即注人约3 mL的氯化钠注射液，每次注射应在前一次反应恢复稳定以后进行，且相邻两次注射的间隔时间（约2～3 min）应尽量保持一致。

1.2.2 不同来源生脉注射液对猫降压作用试验

健康的猫4只，按45 mg•kg-1给药剂量，经腹腔注射戊巴比妥钠溶液麻醉后，固定于恒温手术台上，分离一侧颈动脉插入连接生理信号采集处理系统的动脉插管，管内充满约750单位·mL-1肝素钠溶液作为抗凝剂，记录动物血压。经另一侧股静脉依次注射药液。参照《中国药典》2015年版（四部）通则1145降压物质检查法[11]，自静脉依次注入0.05 μg•kg-1、0.10 μg•kg-1和0.15 μg•kg-1组胺剂量，重复2-3次，若0.10 μg•kg-1剂量所致血压的下降值不小于2.67 kPa，同时相应各剂量所致反应的平均值有差别，可认为该动物的灵敏度符合要求，可用于后续降压作用比较试验。给药方式和要求同上述“1.2.1”中内容。

1.3 数据收集与统计分析

2 结果

2.1 不同来源生脉注射液对新西兰兔降压作用

2.1.1 不同性别新西兰兔基础血压的比较

不同性别新西兰兔的基础血压值存在差异，雄性动物的基础血压明显高于雌性动物的基础血压（P＜0.01），见表1。

表1 不同性别新西兰兔基础血压值的比较（±SD，n=8）

注：与雌性动物比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

2.1.2 不同生脉注射液对新西兰兔降压作用

雌性新西兰兔对三个厂家生脉注射液降压作用从强到弱依次是：生脉注射液（A）＞生脉注射液（B）＞生脉注射液（C）。经SPSS软件统计分析比较，生脉注射液（A）的降压作用显著大于生脉注射液（C）（P＜0.05），其余两两比较未见有统计学差异（P＞0.05）。雄性新西兰兔对三个厂家生脉注射液降压作用从强到弱依次是：生脉注射液（A）＞生脉注射液（B）＞生脉注射液（C）。经SPSS软件统计分析比较，生脉注射液（A）和生脉注射液（B）的降压作用均显著性大于生脉注射液（C）（P＜0.01），而生脉注射液（A）与生脉注射液（B）相比较未见统计学差异（P＞0.05），见表2。

表2 不同性别新西兰兔对不同厂家生脉注射液降压反应的比较（±SD，n=8）

注：与生脉注射液（C）比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

新西兰兔对三个厂家生脉注射液的降压作用均值从强到弱依次是：生脉注射液（A）＞生脉注射液（B）＞生脉注射液（C）。经SPSS软件统计分析比较，生脉注射液（A）和生脉注射液（B）的降压作用均显著性大于生脉注射液（C）（P＜0.01），而生脉注射液（A）与生脉注射液（B）相比较未见有统计学差异（P＞0.05），见表3。

新西兰兔对1.0 mL•kg-1的不同厂家生脉注射液均具有很好的降压反应，降压均值均大于3 kPa，且不同厂家生脉注射液对新西兰兔的降压作用存在一定的差异性，在16只动物体内试验结果均为一致.

表3 新西兰兔对不同厂家生脉注射液降压反应的比较（±SD，n=16）

注：与生脉注射液（C）比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

2.2 不同来源生脉注射液对猫的降压作用

2.2.1 猫对组胺的灵敏度试验

4只猫经0.10 μg•kg-1组胺处理后，降压均值均大于2.67 kPa，且各剂量组胺所致反应的平均值有差别，其灵敏度试验均符合要求。

2.2.2 不同来源生脉注射液对猫的降压作用

三个厂家生脉注射液对猫的降压作用依次为：生脉注射液（A）＞生脉注射液（B）＞生脉注射液（C）。

统计分析显示，不同厂家生脉注射液之间比较均未见统计学差异（P＞0.05），见表4。

表4 猫对不同厂家生脉注射液降压反应的比较（±SD，n=4）

注：与生脉注射液（C）比较，*P＜0.05，**P＜0.01。 2.2.3 生脉注射液不同给药顺序对猫降压反应的影响

2.2.3 生脉注射液给药顺序对猫降压反应的影响

猫对生脉注射液首次给药的降压反应非常明显，但随着给药次数的增加，其降压反应也在不断减弱，同时动物的整体血压下降，见图2。

猫对生脉注射液首次给药的降压反应非常明显，但随着给药次数的增加，其降压反应也在不断减弱，同时动物的整体血压也在下降，说明不同给药先后顺序对猫降压作用的影响很大，见图1。

图1 猫对生脉注射液不同给药顺序的降压反应趋势

注：A，B，C，D为4只猫对不同给药顺序的效果

3 讨论

新修订的《中华人民共和国药品管理法》以“四个最严”为立法宗旨，以最严谨的标准、最严格的监管、最严厉的处罚、最严肃的问责来保障公众用药安全。药品安全事关人民群众身体健康和生命安全，社会关注度高。作为使用广泛且用量较大的生脉注射液，随着临床应用的增多，其发生不良反应的报道也逐渐增多，日益引起人们的重视[12]，甚至会引起心血管系统低血压等严重不良反应[5,13]，却很少有人提及它对血压的影响[3]。中药注射剂由于成分复杂、原材料和生产工艺标准化控制困难以及物质基础研究薄弱等问题，其不良反应也呈复杂性和未知性。因此，开展中药注射剂药品的安全性评价和质量稳定性研究具有重要的意义。

现行生脉注射液质量标准——《国家食品药品监督管理局国家药品标准》（WS3－B- 2865-98-2011）尚未对降压物质进行控制和要求。张德波等曾报道利用猫对生脉注射液进行降压物质检查时发现有不合格现象[7]。

目前实验所用的猫，国内还没有统一的国家质量标准，没有实现实验动物标准化，存在来源不清、健康和质量难以保证以及巨大的生物安全隐患等问题。因此，通过探索利用新西兰兔为开展生脉注射液降压作用的研究和产品的质量评价提供新的途径。课题组前期研究发现，新西兰兔对组胺引起的降压反应很不敏感，但生脉注射液可会引起其产生明显的降压作用。故在本文的不同来源生脉注射液对新西兰兔降压作用试验研究中没必要开展新西兰兔的组胺灵敏度试验。

本研究通过比较三个厂家生产的生脉注射液对新西兰兔和猫的降压作用，发现不同来源和生产工艺的生脉注射液均能引起新西兰兔和猫产生明显的降压反应，降压作用依次为：生脉注射液（A）＞生脉注射液（B）＞生脉注射液（C），其差异性在16只新西兰兔具有很好的重现性。说明不来源和生产工艺的产品存在一定的质量差异性。但是不同性别新西兰兔对不同来源生脉注射液的降压反应存在一定的差异性。在雌性动物中只有生脉注射液（A）的降压作用显著性大于生脉注射液（C），而雄性动物中生脉注射液（A）和生脉注射液（B）的降压作用均显著性大于生脉注射液（C）。可能是由于雄性动物的基础血压较高，产生的降压作用更明显。

不同来源生脉注射液对猫降压作用没有统计学差异，结果与新西兰兔的不一致。原因可能是：①生脉注射液对猫的降压作用稍强于新西兰兔，造成降压作用放大，从而导致产品间的降压作用差异性被削弱；②猫对生脉注射液的耐受性很明显，随着给药次数的增加，其降压反应会急剧地减弱，也会造成降压反应的差异性进一步缩小。

我们还发现生脉注射液不同给药顺序对猫降压反应的影响很大，首次给药的降压作用非常明显，甚至会出现近似低血压休克的抽搐反应。但随着给药次数的增加，降压作用急剧降低，动物的整体血压也下降。提示在临床使用生脉注射液时，务必严格按照使用说明书的要求，不得超剂量、高浓度、过快滴注或长期连续用药。特别是首次给药时更应缓慢滴注和加强临床观察，以免引起急性的降血压作用而产生休克等不良反应。

总之，本研究结果表明，新西兰兔可用于生脉注射液降压作用的研究和产品的质量评价，尤其可作为的降压试验动物，进行产品的内部质量控制和产品差异性评价。

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7 张德波, 罗洁, 邓莎, 等. 几种中药注射剂降压作用考查[J]. 内蒙古中医药, 2013, (28): 55-57.

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Comparative study on depressor effects of different Shengmai injections on rabbits and cats#

Li Jia-min*, Ma Jia-li, Yang Chun, Deng Lin, Ma Wen-jing, Rong Zu-yuanΔ

(Sichuan Institute for Food and Drug Control, Chengdu 611731, Sichuan)

To compare the depressor effects of Shengmai injections produced by different manufacturers on New Zealand rabbits and cats, and explore the quality of Shengmai injections in New Zealand rabbits.Sixteen healthy New Zealand rabbits and 4 cats were anesthetized with pentobarbital sodium by injecting slowly into the ear vein of New Zealand rabbits at the dose of 50 mg•kg-1or intraperitoneally at the dose of 45 mg•kg-1for cats, respectively. Then, all of animals were injected intravenously with Shengmai injections from A, B, and C manufacturers respectively at dose of 1.0 mL•kg-1BW. Arterial blood pressure was immediately measured with an acquisition system for physiological signal measurements, and a statistical analysis was carried out to compare the depressor response of New Zealand rabbits and cats to Shengmai injections from different manufacturers.New Zealand rabbits had good depressor response to 1.0 mL•kg-1Shengmai injections, with more than 3 kPa decrease mean value of blood pressure. Besides, the depressor effects of different Shengmai injections on New Zealand rabbits were different, and the difference was consistent in sixteen testing rabbits. However, the depressor response of cats to Shengmai injections was highly sensitive but easily tolerated.New Zealand rabbit can be used to study the depressor effects of Shengmai injection, and evaluate the quality differences among products.

Shengmai injections; Laboratory rabbits; Cats; Depressor effect

（2019-12-30）

四川省食品药品检验检测院院立项目（编号：2018-KYYL-007）

黎家敏，男，助理研究员，主要从事药理毒理学研究，Email：ynchina99@163. com；

荣祖元，男，研究员，主要从事药理毒理学研究，Email：304240183@qq. com。