粪便标本采取乳胶凝集检测技术对沙门菌筛查的意义研究

常 鑫

（沈阳市第一人民医院 检验科细菌室，辽宁 沈阳 110041）

沙门菌检验耗时比较长，一般需要5～7 d，由于其程序比较多，主要包括：前增菌、选择性增等。因此，如何提高沙门菌检测的速度，优化沙门菌检验流程，一直是检验工作的重点。检验人员表示，如果可以菌落范围缩小，其筛查率就会得到提高，工作量减轻。为了缩短治疗时间，提高检测的准确率，乳胶凝集技术研制出来。目前，乳胶凝集试验技术成熟，效果好，准确率非常高，国内外有许多报道。乳胶凝集法的特点为，使用人工大分子乳胶颗粒标，可以对样本进行准确的标记，检测人员肉眼可见抗原与试剂的凝集反应。严格按照说明说操作，需要2 min。操作简洁、不需要设备、可疑广泛使用。

1 资料与方法

1.1 标本：肛拭子从广州市天河区体检者中采集。

1.2 试剂：HKM沙门菌乳胶凝集试剂盒；SC增菌液；SS琼脂平板；三糖铁培养基；TSA平板；API 20E细菌鉴定条。

1.3 方法

1.3.1 可疑菌落分离：取体检者肛拭子放入5 mL SC 增菌液中，进行选择性增菌，取1标准环选择性增菌液划线于SS琼脂平板，（36±1）℃培养24 h。

1.3.2 可疑菌落验证：从平板中挑取可疑菌落接种于TSA平板中，进行分离纯化。然后挑取单菌落分别同时进行以下实验。

2 结果

本实验对104株可疑菌落进行试验，用API 20E最终确认阳性的有35株。乳胶凝集试验阳性的有36株，出现2例假阳性，乳胶凝集试验阴性的有68株，即出现1例假阴性，104 株可疑菌落接种于三糖铁斜面，试验阳性的有93株，出现58例假阳性。试验阴性的有11株，其中确证阴性的有11株，发现沙门菌乳胶凝集试剂盒阳性真确率高。见表1。

3 讨 论

研究显示，沙门菌乳胶凝集试验具有非常高的灵敏度及特异性，对于阴性菌落筛查率高，菌落识别的准确度也非常高，是目前为止安全有效的筛查方法[1]。而三糖铁试验假阳性率比较高，细菌培养时间比较长。沙门菌乳胶凝集试验耗时短，并且应用广泛。目前已经有报道沙门菌乳胶凝集试验应用于食品、饲料中，结果准确率非常高。沙门菌乳胶凝集试剂主要的作用原理为，带有活性的乳胶颗粒表面与沙门菌特异性抗原相结合，特异性的复合多价抗血清。沙门菌菌悬液混合后，乳胶颗粒迅速做出反应，发生凝集，对对沙门菌检测广泛，涵盖部分无动力的沙门菌，使用沙门菌乳胶凝集试剂盒检测99%以上的沙门菌，特定性高，避免漏检[2]。并且沙门菌乳胶凝集试剂检测可以长时间保存肠杆菌科的培养物，并且非特异性凝集性高，降低假阳性，有效的避免检测保存沙门菌培养物时间过长出现的假阴性。研究显示，虽然沙门菌乳胶凝集试剂盒的检出率高，但是也会出现检测不出结果的情况发生。会有1%左右的有动力的沙门菌及部分无动力沙门菌检测不出来，因此在操作过程中，如果有可疑菌落不凝集的情况，应该进行进一步检查，明确诊断。有文献记载乳胶凝集试剂可直接用于选择性增菌液筛选，但是，笔者在临床工作中发现，干扰较多，假阳性较高，因此不可应用于选择性曾菌液的筛选。可以使用平板分离可疑菌落，之后使用乳胶凝集试剂，准确性好，节约时间和成本[3]。罗玲等[4]采用乳胶凝集试验快速检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7的研究中发现，采取乳胶凝集试验可以快速的检测出血性大肠杆菌准确性高，假阴性低，并且操作过程中肉眼可见，敏感性，特异性均比较高。杨宁等[5]采用乳胶凝集检测技术用于沙门菌快速筛选的研究中发现，乳胶凝集检测技术特异性、敏感性均非常高，试验过程中只有1例假阳性出现，阳性检出率高，准确率高，值得在临床推广。以上研究与本研究结果相同。从本实验可以看出，本实验对104株可疑菌落进行试验，用API20E最终确认阳性的有35株。乳胶凝集试验阳性的有36株，出现2例假阳性，乳胶凝集试验阴性的有68株，即出现1例假阴性，104株可疑菌落接种于三糖铁斜面，试验阳性的有93株，出现58例假阳性。试验阴性的有11株，其中确证阴性的有11株，发现沙门菌乳胶凝集试剂盒阳性真确率高。

表1 乳胶试验筛选和三糖铁检测情况比较

综上所述，采取乳胶凝集试验，阳性准确率高，并且耗时时间短，比传统的三糖铁试验准确率高，值得在临床推广。