一例鸡葡萄球菌病的病原学鉴别诊断

谭召军，周艳萍，张友书，谢晓东，李乔斌，王柏林，程振涛，3∗，李凤龙

(1.贵州省紫云苗族布依族自治县畜牧服务中心，贵州 紫云 550800； 2.贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025；3.贵州省动物疫病研究室，贵州 贵阳 550025； 4.贵州省遵义市红花岗区海龙镇农业服务中心，贵州 遵义 563099)

鸡葡萄球菌病是由葡萄球菌感染引起的急性或慢性传染病，临床上以败血症、脐炎、关节炎等症状多见；各品种、年龄、季节均可发生，以40 ～60 日龄和潮湿环境、多雨季节最易发生，特别是林下养鸡、果园养鸡等平养鸡群中最为多见。 由于抗药性增强，该病常需要参考药敏试验结果选择敏感药物进行预防和治疗。 其在临床上所表现的呼吸道症状、行走异常等与禽流感、新城疫、鸡毒支原体或滑液囊支原体感染存在相似之处，需要通过实验室检测进行鉴别诊断。 2019 年8 月25 日，五峰街道某养殖户自繁自养土鸡2 400 只，部分出现发病和死亡。为确诊病因，特进行病原学检测诊断，为本地生态鸡养殖提供防疫技术支持。

1 材料与方法

1.1 病例来源送检病鸡4 只，均来自紫云县五峰街道发病鸡场。

1.2 主要试剂(1)禽流感、新城疫荧光定量RTPCR 检测试剂盒，购自北京世纪元亨生物科技有限公司；鸡毒支原体、滑液囊支原体PCR 检测试剂盒，购自深圳真瑞生物科技有限公司。 (2)药敏纸片由贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验室提供；其他试剂为国产分析纯。

1.3 临床检查对鸡场发病情况进行流行病学调查，并进行临床症状、病死鸡剖检观察。

1.4 病毒检测采集送检病鸡脾脏、肺脏、脑等组织样品，按试剂盒说明书提取RNA，分别应用禽流感病毒通用型荧光定量RT-PCR 检测试剂盒和新城疫病毒荧光定量RT-PCR 检测试剂盒对禽流感病毒、新城疫病毒的核酸进行检测。

1.5 支原体检测采集病鸡呼吸道、关节组织样品，按试剂盒说明书提取总DNA，分别应用鸡毒支原体和鸡滑液囊支原体PCR 检测试剂盒对2 种病原核酸进行检测。

1.6 细菌分离培养与药物敏感试验无菌操作采集病鸡肝脏、肾脏、心脏等器官组织，划线接种血琼脂培养基，37 ℃培养24 h，进行细菌分离培养与鉴定；纯化细菌进行纸片法药物敏感试验。

2 结果

2.1 临床检查情况发病鸡为38 日龄，总共发病197 只，已死亡 160 只(发病后 3 ～5 天内死亡)，发病率8.2%(197/2 400)，病死率81.2%(160/197)。临床主要表现为精神沉郁，不愿站立或走动，喜蹲伏，头低垂，羽毛蓬松粗乱、无光泽，翅膀下垂，食欲不振，跛行，拉灰白色稀粪。 剖检病变：嗉囊积气，胸部皮下、肌肉出血或有黑色胶冻状渗出物，关节肿大，关节积液增多，小肠黏膜点状充血、出血，腺胃有充血、出血现象。

2.2 病原核酸检测结果

2.2.1 新城疫病毒新城疫病毒荧光定量RT-PCR检测结果见图1：阳性对照CT 值为20，而检测样品无特定扩增曲线(无CT 值)，表明检测样品中无新城疫病毒。

2.2.2 禽流感病毒禽流感病毒通用型荧光定量RT-PCR 检测结果见图2：阳性对照CT 值为18，而检测样品CT 值＞35 或无CT 值，表明检测样品中无禽流感病毒。

2.2.3 滑液囊支原体鸡滑液囊支原体PCR 检测结果见图3：检测样品未扩增出特异性条带，表明检测样品中无鸡滑液囊支原体。

2.2.4 鸡毒支原体鸡毒支原体PCR 检测结果见图4：检测样品未扩增出特异性条带，表明检测样品中无鸡毒支原体。

2.3 细菌分离培养与药敏试验结果

2.3.1 细菌分离培养从肝脏等组织中分离培养的细菌菌落生长良好，为圆形、光滑、湿润、微隆起的中等大小菌落。 钓取菌落革兰氏染色镜检，可见呈葡萄串状的革兰氏阳性球菌(见图5)。 生化实验显示，兔血浆凝固酶、甘露醇、过氧化氢酶、三糖铁均呈阳性反应。 分离纯化细菌初步鉴定为葡萄球菌。

2.3.2 药物敏感试验从表1 可见：分离菌对磺胺间甲氧嘧啶、硫酸粘菌素、硫酸安普霉素、泰妙菌素、替米考星、多西环素较敏感，对大观霉素、氟苯尼考、阿莫西林、泰乐菌素耐药。

表1 分离菌药敏试验结果

3 结论

通过发病情况、临床症状、病理变化、实验室相关病原核酸检测及细菌分离培养表明，本病例存在葡萄球菌感染，不存在禽流感病毒、新城疫病毒、鸡毒支原体、鸡滑液囊支原体感染。

4 防治措施

葡萄球菌病是多动物的常见疫病，可感染鸡、鸭、猪、牛、羊等畜禽[1～3]；临床上也易与其他细菌等病原混合感染[4，5]。 葡萄球菌可通过饲料、饮水、蚊虫叮咬或伤口感染鸡群，出现下痢、关节炎、皮肤坏死等症状，也可造成食品安全问题[6]。 分析该养殖场饲养管理情况，可能在饲料、饮水和环境卫生方面存在问题。 建议养殖场将发病鸡与假定健康鸡隔离饲养，禁止闲杂人员进出。 病鸡使用磺胺间甲氧嘧啶、硫酸粘菌素、安普霉素等敏感药物进行治疗。 病重无治疗价值者淘汰，淘汰及病死鸡采取集中焚烧、深埋等无害化处理。 彻底清理鸡舍及场地粪便，更换鸡舍垫料和清洗场地，保证鸡群的环境卫生，使用10%二氯异氰脲酸钠对鸡舍和周边场地进行全面消毒，1 次/天，连续 7 天，以后每周 1 次。 同时保证饲料和饮水的卫生安全。 保持鸡舍通风、干燥，降低饲养密度，去除致鸡发生外伤的旧围栏、竹笼具等尖锐器物。