构树组培快繁技术研究

刘艳涛，尹振君，张玉珍

（沧州职业技术学院，河北沧州 061001）

构树（Broussonetia papyrifera（L.）Vent.）为桑科的多年生落叶乔木，古名楮，又名谷浆树等。构树适应性广、生长速度快，耐瘠薄、抗盐碱、养护成本低；观赏性高，可以孤植、列植（行道树）或群植，是优良的造林绿化树种[1]。构树还是难得的经济树种，构树的花、果实、叶片、茎干在蔬菜、饲料、织布造纸、药用等方面有广泛的应用[2-6]。另外，构树具有极强的吸附二氧化硫和滞留烟尘的作用，并且对被重金属污染的土壤具有一定的生态修复能力[7-11]。

目前构树还未被人们充分地开发利用，一般处于野生状态，缺乏人工造林。构树一般通过播种、扦插、根蘖等方法进行繁殖，但存在田间种子发芽率低、扦插插穗来源有限且扦插成活率低的问题；根蘖虽然繁殖能力强，但育苗速度较慢且费时费力，均难以满足当前大面积栽培和推广优良品种对苗木的大量需要[12-14]。

利用现代生物技术手段，开展构树组培快繁研究，对构树的茎段进行离体培养和繁殖，筛选出构树茎段不定芽诱导、不定芽增殖及壮苗生根的最佳培养基，为实现其快速无性繁殖、扩大种源生产、保存优良品种提供一种行之有效的方法[15-16]。

1 材料和方法

1.1 试验材料

在优良母树上选择饱满健壮的枝条为试验材料。

1.2 试验方法

1.2.1 外植体消毒。把采集的枝条用细毛刷蘸取洗衣粉刷洗干净，用自来水冲洗30min 以上；在超净工作台内用75%的酒精浸泡消毒15～30s，无菌水冲洗1 次，再用0.15%的升汞溶液消毒6～8min，无菌水冲洗3～4次；滤纸吸干后,切取1～1.5cm 的带芽茎段，接种于芽诱导培养基上。

1.2.2 芽诱导培养。以MS 为基本培养基，附加不同浓度的6-BA（0.1、0.5、1.0、2.0mg/L）、NAA（0.1、0.2、0.5、1.0mg/L），采用正交实验设计共16个处理，每处理3次重复，每重复9 株。30d 后调查芽的分化率（分化出不定芽的外植体数/外植体总数），分化系数（外植体分化不定芽的总数/外植体总数）以及不定芽生长状态。

1.2.3 芽增殖培养。以MS 为基本培养基，附加不同浓度 的 6-BA（0.1、0.5、1.0、2.0mg/L）、NAA（0.1、0.2、0.5mg/L），采用正交实验设计共12个处理，每处理3次重复，每重复9 株。30d 后调查芽的增殖倍数以及不定芽生长状态。

1.2.4 壮苗生根培养。以1/2MS 为基本培养基，附加不同浓度的NAA（0.1、0.2、0.5、1.0mg/L），共计4个处理，每处理3 次重复，每重复9 株。40d 后观察生根率（生根苗数/该生根处理苗总数）、平均生根数（总生根数/生根苗数）、根的状态以及不定芽生长状态。

1.2.5 培养条件。MS 培养基中添加2%的蔗糖和0.6%的琼脂，pH 值均为5.8～6.0，培养温度25±2℃，光照强度2000～3000lux，光照时间12h/d。

2 结果与分析

2.1 芽诱导培养

茎段接种2 周后在茎段底部形成愈伤组织，3 周后观察有不定芽形成。MS+6-BA 1mg/L+NAA 0.1mg/L时不定芽的诱导率高，芽长势较好，切口处愈伤组织适当。而附加其他激素的诱导率较低或诱导率较高，但是不定芽长势较弱。综合考虑认为MS+6-BA 1mg/L+NAA 0.1mg/L 为不定芽诱导的最佳培养基。

2.2 芽增殖培养

芽诱导培养后形成的生长健壮的含有多个芽的芽丛切割成单芽，并将芽丛中2cm 以上的单芽切割成含有一个腋芽的茎段接种在芽增殖培养基上，不定芽接种后2 周左右可观察芽的增殖情况。6-BA 浓度越高，芽的增殖倍数越大，但新芽生长细弱叶色淡绿，综合考虑认为MS+6-BA 0.5 mg/L +NAA0.1 mg/L 为不定芽增殖的最佳培养基。

2.3 壮苗生根培养

当不定芽长到2～3cm 高时转移到壮苗生根培养基上。2 周后有不定根产生，40 天时观察认为4 种不同浓度的生根培养基对诱导均有明显的效果，其中1/2MS+NAA 0.1mg/L 培养基生根率较高，不定芽生长较好。

图1 不定芽诱导

图2 不定芽增殖

图3 不定芽壮苗生根

2.4 组培苗移栽

当瓶苗长到4～6 片叶、株高3～5cm 时可炼苗移栽。将瓶苗取出，用清水洗净根部培养基后，栽植于珍珠岩、蛭石和草炭土混合的1∶1∶1 的基质中，并覆盖塑料薄膜增加空气湿度提高成活率，幼苗成活后每隔2 周用稀释的培养基母液进行叶面施肥，使苗生长健壮。

图4 不定芽炼苗移栽

3 展望

以构树的带芽茎段为外植体进行不定芽的诱导培养，通过调节培养基中激素配比，使不定芽的分化速度大大加快，繁殖系数达5～10 倍，在短期内能够提供大量的优质种苗，改变构树通过播种、根蘖、扦插等方法进行常规繁殖速度慢的现状，不仅可以解决构树种苗大量需求问题，为造纸、饲料等相关产业提供充足苗木来源，还为优良品种的保存、遗传转化和转基因品种培育与筛选打下了坚实的理论基础。