鲜牛鞭质量标准起草说明

李坦城，李兰兰，孙丽艳，胡光华，张 竹

（长春市食品药品检验中心，吉林 长春 130012）

【药材名称】正名：鲜牛鞭，汉语拼音名：Xianniubian，拉丁名：PENIS BOVIS RECENS

【性味与归经】咸，温。归肾经。

【功能与主治】补肾暖胃，壮阳治疝。用于肾虚腰疼，寒性胃痛，性欲减退及疝气。

【用法与用量】60～120 g，煮烂后，切成小片，加食盐适量。

【贮藏】冷藏。备注：药材原标准为吉药监注[2002]500号，此次该药材质量标准的修订主要包括阴茎横切面、水分、灰分等检验项目，性味与归经、功能与主治、用法与用量、贮藏均参照原标准未做修订。

【概述】牛鞭，史载于《神农本草经》、《本草纲目》等古代医药经典著作，其中记载了本品的药用功效，我国现代医药著作《中华本草》、《中药大辞典》、《中国动物药资源》中均有记载该药材，详细描述了本品的来源、原动物形态、生境分布、化学成分、药理作用、性味、归经、功能主治及用法用量。表明本品在我国传统中医药领域应用历史悠久，具有开发利用价值。《中药大辞典》收载牛鞭为牛科野牛属动物黄牛或水牛属动物水牛.雄性的阴茎及睾丸；《中国动物药资源》收载牛鞭为牛科动物牛的阴茎及睾丸。经与全国3家生产企业沟通，现所用牛鞭药材，均取自黄牛和改良黄牛，由于现在纯种黄牛较少，养殖的大多为改良品种的黄牛，故将来源修订为黄牛和改良黄牛。现根据《中国动物药资源》、《中药大辞典》收载及药材实际使用情况调查，牛鞭药材基源确定为牛科动物雄性黄牛和改良黄牛的阴茎及睾丸。

【来源】本品为牛科动物雄性黄牛和改良黄牛的阴茎及睾丸。宰杀后，割取阴茎及睾丸，除去残肉及油脂。

【起草样品收集情况】2016年12月至2017年7月，项目组分别从长春地区、珲春地区、延边地区，收集了12批鲜牛鞭药材，经吉林农业大学刘忠军教授鉴定为牛科动物雄性黄牛或改良黄牛的阴茎及睾丸，12批药材均为正品，对12批不同产地的牛鞭药材样品进行实际观察，测量，描述了本品性状，基本与原标准一致。

1 化学鉴别

由于牛鞭中含有一定量的蛋白质，加水溶解后，蛋白质与茚三酮在加热条件下反应，显蓝紫色或紫红色。

牛阴茎：取本品0.5 g，研细，加水10 ml，置水浴中加热使分散溶解，再加0.2%茚三酮乙醇溶液数滴，加热5～10分钟，即显蓝紫色。

牛睾丸：取本品1.0 g，研细，加水10 ml，置水浴中加热使分散溶解，再加0.2%茚三酮乙醇溶液数滴，加热5～10分钟，即显蓝紫色。

实验结果：12批样品均呈正反应，显蓝紫色，阴性无干扰。由于该反应为氨基酸蛋白质类物质普遍具有的化学反应，专属性不强，故不列入标准正文。

2 聚合酶链式反应

模板DNA提取参照《中国药典》2015年版方法对牛鞭、牛蛋进行DNA提取本品0.5g，置乳钵中，充分研磨使成细粉，取0.1 g置1.5 ml离心管中，加入消化液275 μl[细胞核裂解液200 μl，0.5 mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液50 μl，蛋白酶K溶液（20 mg/ml）20 μl，RNA酶溶液5 μl]，在55℃水浴保温1小时，加入裂解缓冲液250 μl，混匀，加到DNA纯化柱中，离心（转速为每分钟10000转）3分钟；弃去过滤液，纯化柱中加人洗脱液700 μl[5 mol/L醋酸钾溶液26 μl，l mol/L Tris-盐酸溶液（pH值7.5）18ul，0.5 mol/L乙二胺四醋酸二钠溶液（pH值8.0）3 μl，无水乙醇480 μl，灭菌双蒸水273 μl]，离心（转速为每分钟10000转）1分钟；弃去过滤液，用上述洗脱液反复洗脱3次，每次离心（转速为每分钟10000转）1分钟；弃去过滤液，再离心2分钟，将DNA纯化柱转移入另一离心管中，加入无菌双蒸水100 μl，室温放置2分钟后，离心（转速为每分钟10000转）2分钟，离心液即为DNA溶液，作为供试品溶液，置零下20℃保存备用。另取牛鞭、牛蛋对照药材0.1 g，同法制成对照药材模板DNA溶液。

取本品0.5 g，剪碎，取50 mg置1.5 ml离心管中，加150 μl生理盐水，研磨，离心10000 r/min×1 min，去上清；加400 μl GA，混匀，振荡（彻底混匀）；加40 μl PK酶，56℃水浴1 h（封口膜封口）；加400 μl GB，充分颠倒混匀，70℃放置10 min，短离心；加400 μl无水乙醇，颠倒混匀，充分混匀15秒，短离心；将液体750 μl加入CB3中，放入收集管，12000 r/min×30 s倒废液，重复一次；加500 μl GD（已加过乙醇）12000 r/min×30 s倒废液；加600 μl PW（已加过乙醇）12000 r/min×30 s倒废液，重复一次；12000 r/min×2 min弃去收集管，打开CB3管，放在滤纸上，晾干；剪去CB3的盖，分别放置于一个新的EP管中，加100 μl TE（垂直滴加），12000 r/min 2 min收集DNA溶液，作为供试品溶液，置零下20℃保存备用。另取牛鞭、牛蛋对照药材0.1 g，同法制成对照药材模板DNA溶液。

结果表明：两种提取DNA方法无差异，但因为牛鞭、牛蛋为地道药材，应按药典方法合理，故本文采纳药典方法。

3 水 分

根据测定结果，考虑气候、温度、湿度以及药材包装、贮运的实际情况，确定限度为鲜牛鞭水分不得过72.0%。根据牛鞭化学成分研究报道，分别以水、乙醇、稀乙醇为溶剂，照《中国药典》2015年版四部通则2201浸出物测定法进行测定。根据测定结果，稀乙醇热浸法浸出物测定值较高，故选择稀乙醇热浸法进行实验，限度规定为浸出物不得少于15.0%（以干燥品计）。鲜牛鞭由于无法过筛，采用剪碎方法测定浸出物时同一批次测定数值不稳定，数值差距较大。

附：

研究起草人：李坦城1，樊红军1，杨树东1，于海瑶1，彭秀丽1，周丽丽1，李兰兰1，王 辉1，王 坤1，谷 杰1，张丽华2

起草单位：1.长春市食品药品检验中心；2.吉林市雷博科技有限公司

复核单位：松原市食品药品检验所