藤黄中藤黄酸和新藤黄酸的提取分离及药理毒理研究

马 静，成志平，赵梦中，闫 婧

（包头市食品药品检验检测中心，内蒙古 包头 014060）

改进从中药藤黄中提取、分离新藤黄酸的工艺。将藤黄粉碎微波提取，浓缩的浸膏；加入石油醚淋洗，乙醇溶解过滤，经模拟移动床色谱分离；回收溶剂干燥得纯度95%以上的藤黄酸及纯度10%～20%的藤黄酸与纯度30%～50%的新藤黄酸混合物两种规格的产品。加入6倍的浓度为95%的乙醇，提取2次，每次1.5个小时，并将实验进行3批验证试验，加入验证结果一致，说明此工艺稳定可行。运用改进的工艺从藤黄中提取分离新藤黄酸是可行的,更利于工业化生产。

中药藤黄为藤黄科植物藤黄树干切伤后分泌的胶树脂。清凉，酸味，涩味，有毒。具有消肿毒、止血杀虫、除癣作用。化学成分研究表明，藤黄主要含有以藤黄酸为代表的黄酮类化合物。

1 仪 器

电子天平（AL204-IC）METTLER TOLEDO；数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司 KQ-500DE）；现场展示恒温水浴锅（金坛江南仪器厂HH）；有机试剂回收设备；高性能液相；没有活塞玻璃柱；循（SHZIIID）环水真空泵上海正式开始实验仪器科技有限公司有限公司。液相色谱-质谱联用仪TSQ Quantum Ultra EMR（ThermoFisher）。

2 一般资料

2.1 藤黄酸与新藤黄酸的提取

2.1.1 制备藤黄酸对照

精确称量藤黄酸6 mg标准品，将标准品置于量程为10 mL的容量瓶中，将分析纯甲醇溶液加入定容溶液中，超声溶解，制备含量为0.6 mg/mL的标准品。

2.1.2 样品溶液的制备

精确称量提取出的总藤黄酸酯提取物6 mg，置于容量瓶中，测量范围为10 mL，加入纯甲醇在恒体积和超声波下溶解分析，过滤膜为0.45微米，所得滤液作为样品溶液，备用。

2.1.3 因素水平的确立

取3个水平进行考察，研究乙醇浓度、乙醇量、提取时间以及提取次数4次，各因素对藤黄提取物收取率的影响。

2.1.4 提取与分离

（1）提取:按照实验得出的优化方法，准确称取10 g藤黄粉，放入500 mL的圆底烧瓶中，然后加入6倍量的浓度为95%的乙醇，并浸泡30分钟水浴回流提取1.5小时，重复一次，合并2次滤液，再在60℃减压回收乙醇，放入低温干燥的真空箱中得出干浸膏。

（2）分离：上提取得出的干燥提取物，用浓度为0.1%的Na2CO3将其溶解，加入预处理的AB-8型大孔树脂，树脂的质量与提取物的比例Wie18：1，然后浸泡过夜。然后用蒸馏水洗至洗脱液基本变无色，洗脱液用薄层色谱点板跟踪，直到黄斑点变得极淡时停止洗脱。最后用浓缩的洗脱液加稀释的浓盐酸沉淀，抽滤的出黄色的结晶，低温减压干燥即可。

3 讨 论

单因素和正交试验优化从藤黄中提取总藤黄酸的工艺条件，并确定最优提取工艺：乙酸乙酯回流提取用于橙黄色,液体材料的比例1:9，提取温度为75℃，提取时间为2.5 h。本文采用大孔树脂和硅胶柱层析法进一步分离纯化总藤黄酸，经H谱和C谱检测，确定这两种化合物分别为藤黄酸和新藤黄酸。

4 藤黄酸和新藤黄酸药理毒理分析

在中医学中藤黄的用药历史十分悠久，据中医学记载，藤黄具有祛除癣、破血散结、攻毒消蚀溃疡、驱虫、攻毒消肿、治疗跌打伤的作用。现代药理研究也表明，藤具有相同的抗肿瘤、抗炎和抗病毒活性。

根据相关文献了解藤黄酸及新藤黄酸的抗肿瘤作用，根据不同的细胞系，其功效会表现出不同的特点，因此甘草酸等化学成分存在一定的差异。以藤黄酸与新藤黄酸对结肠癌及胃癌为例选择不同浓度、不同时间对细胞株进行观察24小时，两者半抑制浓度（IC50）分别是5.55和10.34 μg/mL，0.19和2.16 μg/mL；藤黄酸与新藤黄酸对结肠癌和胃癌48小时的抑制浓度依次为5.38和3.40 μg/mL，0.95和0.81 μg/mL，由此可见藤黄酸与新藤黄酸既有良好的药理作用。

虽然藤黄的药理作用十分广泛，但其毒性较大，临床应用有限。藤黄具有一定的毒性，其化学成分和含量一直是医学研究的重要课题。根据以往大量的实验研究，藤黄酸和新藤黄酸的最大耐受量一般为400 mg/kg及600 mg/kg。由于藤黄酸和新藤黄酸溶解度的影响，对高浓度藤黄酸的研究受到限制。藤黄酸的毒性相对较快。

研究表明藤黄酸与新藤黄酸在抗癌方面具有比较突出优势，但是想要将藤黄酸全面的应用到临床治疗中仍然需要对于其新衍生物进行开发、药动学的研究还需要继续深入和开展。上述的研究成果表明藤黄酸在药学领域内的研究目前处在高速发展时期，而且具有极大的研究价值。目前，在药效学研究的基础上，开发出有效的剂型来解决藤黄酸水低溶性问题，使之产生理想的药效，同时减轻不良反应是当下藤黄酸进研究必须突破的关键问题。如何打破藤黄酸的毒性的限制，将其特有的抗癌作用充分发挥出来，是今后藤黄研究项目的重要工作。