亚甲基水杨酸杆菌肽预混剂对鸡的安全性研究

孙晨明，徐亚亚，高清清，袁华根

（1.江苏农牧科技职业学院，江苏 泰州 225300；2.扬州大学兽医学院，江苏 扬州 225009）

亚甲基水杨酸杆菌肽预混剂为多肽类抗生素中的一种，对革兰氏阳性菌如金黄色葡萄球菌、魏氏梭菌、链球菌、肠球菌有抑制作用，可以促进动物生长，提高饲料利用率，预防和控制由梭菌或其他敏感菌引起的或并发的坏死性肠炎，可与其他药物联合使用。美国FDA 批准的亚甲基水杨酸杆菌肽适应症包括提高增重率和饲料效率、提高蛋鸡产蛋量、防治鸡坏死性肠炎、治疗火鸡传染性肠炎、预防鹌鹑溃疡性肠炎和预防猪痢疾等[1]。药效学试验表明，国产亚甲基水杨酸杆菌肽预混剂按55 mg∕kg·d混饲给药，连用42 d，能有效治疗产气荚膜梭菌引起的鸡坏死性肠炎。本次试验旨在评价亚甲基水杨酸杆菌肽预混剂对靶动物鸡的安全性，以期为其在鸡的临床用药中提供依据。

1 材料

1.1 供试药品 亚甲基水杨酸杆菌肽预混剂（规格10%，以杆菌肽计），批号L091001，福建某生化有限公司提供。

1.2 仪器与试剂 主要仪器有血细胞计数板、生物显微镜、手揿式计数器、OLYMPUS Au2700 全自动生化分析仪、载玻片、离心管、一次性注射器、离心机等。主要试剂有磷酸盐缓冲液、冰醋酸、瑞士染液、结晶紫染液、蒸馏水、生理盐水、中性红染液，以及用于血液生化测试分析的相关试剂等。

1.3 试验动物 1 日龄杂交黄羽肉鸡100 只，由中国家禽研究所提供。育雏期及试验期间，采用油汀和白炽灯保温。

1.4 试验动物入选和剔除标准

1.4.1 入选标准 用于靶动物安全性试验的鸡在试验前一天须经兽医人员检查，并确认处于良好的健康状况。

1.4.2 剔除标准 有下列状况的鸡应从试验中剔除：适应期内濒死的鸡；适应期内生病或受伤的鸡。

1.5 试验设计 正式试验时从约100只8日龄雏鸡中选择80只健康雏鸡，然后按体重进行均衡随机分组，使每组鸡的体重尽可能一致。试验鸡共分为4组，每组20只。采用翅号和笼号进行标记识别。

根据生产厂家拟推荐的临床给药剂量，各试验组分别按最大推荐剂量的倍数——0（空白对照）、1、3、5倍给药（见表1）。

表1 试验鸡分组与给药

试验鸡由专人饲养，饲料使用的是中国农业科学院中国家禽研究所饲料厂特制的不含任何抗菌药物的全价日粮。试验前将药物按预先拟定的给药剂量，采用逐级稀释法将受试药物与饲料混匀饲喂。每天定时喂料，鸡只自由饮食，定期记录每组鸡的采食量。

2 试验方法

2.1 临床观察 试验鸡每天由饲养人员严密监控，观察和记录鸡对药物有毒剂量产生的反应情况。记录的项目如下：与药物有关的发病率和死亡率，其他可能出现的不良反应；分别于试验前、试验中期（0～21 d）和试验结束（21～42 d）各测定一次试验鸡的体重和各阶段的饲料消耗量，据此计算每组鸡在各阶段的平均增重和饲料利用率等。

2.2 眼观病理学检查 对试验中所有死亡鸡进行剖检。对于与药物毒性、疾病或其他原因有关的死亡，通过可接受的诊断技术加以确认，并记录死亡日期。对显示疑似与药物有关的眼观损伤进行组织学病理学检查。

2.3 临床病理学检查 在试验中期（第21 d）每组随机选择10只鸡分别采集血样，进行血常规和血液生化学检查。试验结束时（第42 d）对每组剩下的10 只鸡也分别采集血样进行血常规和血液生化学检查。血常规分析采用人工血细胞分类计数法，血液生化学检测采用全自动生化分析仪测定[2]。

2.4 组织病理学检查 试验中期（第21 d）从10只被采血样的鸡中随机抽出5 只，逐只剖检进行眼观病理学检查。试验结束时，扑杀每组存活下来的鸡进行组织学检查，收集下列组织并保存于10%福尔马林溶液中：心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、胸腺、肾上腺、法氏囊、胰腺、甲状腺、气管、睾丸、卵巢、食管、嗉囔、肌胃、肠（上段、中段和盲肠）。

对下列组织进行常规检查：肝脏、肾脏、法氏囊、脾脏、胸腺、卵巢和睾丸。根据出现的毒性情况决定是否对其他组织作进一步检查[3]。

所有剖检动物的脏器组织均被固定（如10%福尔马林溶液）和保存起来。根据临床观察、血液学和血液生化学检测的数据结果，结合该药的作用特点，仅对肉眼观察到受影响的器官和可疑靶器官进行组织病理学检查（包括制作组织病理切片和显微观察）。

如果与不给药的对照组相比，来自较高推荐剂量试验组的鸡组织未出现与药物相关的组织病理学变化，则较低浓度剂量组的鸡组织就不再进行组织学检查。

2.5 数据统计分析 用SPSS软件进行数据的显著性检验[4]。采用t检验比较试验组与对照组在平均增重、料肉比（饲料利用率）、血液学和血液生化学指标等方面的显著性差异。

3 结果与分析

3.1 一般临床观察 整个试验期间，对照组和各剂量组中所有试验鸡的健康状况良好，饮水和采食均正常，未观察到任何临床症状，各组鸡均未出现死亡。

3.2 增重与饲料利用率 各组鸡各阶段的平均增重及饲料利用率分别见表2～表5。统计学分析表明，试验组鸡连续给药至第21 d（0～21 d）时，各用药组与对照组的平均增重均无显著差异（P＞0.05）；但至试验结束时（21～42d），3 倍和5倍推荐剂量组的平均增重与对照组相比却有显著或极显著性差异，增重明显（P＜0.05或0.01）。

表2 试验中期各组鸡的平均增重（，n＝20） g

表2 试验中期各组鸡的平均增重（，n＝20） g

表3 试验中期各组鸡的料肉比（n＝20） g

表4 试验结束时各组鸡的平均增重（，n＝10） g

表4 试验结束时各组鸡的平均增重（，n＝10） g

注：肩标a 表示与对照组比较差异显著，肩标b 表示与对照组比较差异极显著；下同

表5 试验结束时各组鸡的料肉比（n＝10） g

与对照组相比，各用药组的料肉比均下降，饲料利用率增加，且随着剂量增加，料肉比呈明显下降的趋势。表明亚甲基水杨酸杆菌肽预混剂在一定剂量范围内，随着给药剂量的增加，其改善饲料利用率的效果越明显。

3.3 血液学参数 试验中期和试验结束时每组抽检的10 只鸡的血液学检测结果分别见表6 和表7。统计学分析表明，试验结束后各剂量组与对照组间均无显著性差异（P＞0.05）。

表6 试验中期各组鸡的血液学指标（，n＝10）

表6 试验中期各组鸡的血液学指标（，n＝10）

表7 试验结束时各组鸡的血液学指标（，n＝10）

表7 试验结束时各组鸡的血液学指标（，n＝10）

3.4 血液生化学参数 试验中期、试验结束时每组抽检的10 只鸡的血液生化学检测结果分别见表8和表9。

3.5 病理学检查 试验中期（给药后第21 d）随机选出5 只鸡，经剖检和眼观病理学检查，未发现有明显眼观病理学变化。试验结束后将5倍、3倍推荐剂量组和对照组的鸡全部扑杀剖检，眼观检查结果显示：5 倍剂量组中有2只鸡出现轻度脂肪肝，对照组中有1 只鸡出现轻度脂肪肝，而3 倍推荐剂量组的肝脏均正常；未发现其他明显的眼观病理学变化。组织病理学切片HE染色镜检结果亦显示：3倍和5倍推荐剂量组鸡的肝、脾、肾和肺均未发现明显的显微病变。

表8 试验中期各组鸡的血液生化指标（，n＝10）

表8 试验中期各组鸡的血液生化指标（，n＝10）

表9 试验结束时各组鸡的血液生化指标（，n＝10）

表9 试验结束时各组鸡的血液生化指标（，n＝10）

4 讨论与结论

FDA 资料显示，分别给小鸡和产蛋鸡饲喂1 100 mg∕kg亚甲基水杨酸杆菌肽8周和5个月，在鸡组织、蛋清和蛋黄中均未检出杆菌肽残留。加之杆菌肽口服不吸收，在鸡的可食性组织中也无残留，所以对于家禽养殖生产具有很好的安全性[5]。本试验所采集的数据包括体重、健康状况、食欲情况以及血液学、生化学等参数，与对照组相比，1倍、3倍和5倍推荐剂量组的试验鸡在健康状况、食欲情况以及血液学参数等方面无显著性差异。用亚甲基水杨酸杆菌肽预混剂连续饲喂42 d，虽然尿素氮指标略有上升，但与对照组相比差异并不显著。另外，1 倍和3 倍推荐剂量组中极个别血液生化参数（如白球比值、葡萄糖和氯的含量）与对照组相比差异显著，但无剂量相关性。各试验组之间血液学和血液生化参数无显著性差异；各用药组与对照组相比，增重得到了明显改善，饲料利用率增加。

综上所述，亚甲基水杨酸杆菌肽预混剂以推荐剂量给靶动物鸡连续给药42 d，具有较好的安全性。