SAT-TB联合FQ-PCR检测在痰涂片阴性肺结核诊断中的应用价值

王彦朝

(鹤壁市传染病医院 检验科，河南 鹤壁 458000)

肺结核属多发病，具有较高的传染性，早诊断、早隔离、早治疗是防控肺结核的关键措施。目前临床诊断肺结核主要采用痰涂片法、结核分歧杆菌培养法等常规检测方法，但其阳性检出率较低，耗时较长，无法实现快速准确筛查，严重影响后续治疗，易使接触者被感染，增加疾病传播风险[1]。因此，采取有效的检测方法实现痰涂片阴性肺结核准确快速诊断，加强疾病预防、控制与传播，是临床研究的重要课题。随着医学检验技术的不断发展，分子生物学检测技术已在多种传染性疾病诊断中推广应用，可为痰涂片阴性肺结核诊断提供思路[2]。本研究选取至少3份痰涂片镜检抗酸杆菌均显示阴性的2 067例疑似肺结核患者，旨在研究RNA恒温扩增实时荧光检测技术(simultaneous amplification and testing，SAT-TB)联合荧光定量PCR(fluorescent quantitative PCR，FQ-PCR)检测在痰涂片阴性肺结核诊断中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2018年4月至2019年4月鹤壁市传染病医院收治的至少3份痰涂片镜检抗酸杆菌均显示阴性的2 067例疑似肺结核患者，其中男1 408例，女659例；年龄20～67岁，平均(46.22±8.97)岁。本研究经医院医学伦理委员会审批通过。

1.2 纳入和排除标准纳入标准：(1)胸部X线平片显示异常阴影；(2)存在2周以上低热、胸痛、咳嗽、咳痰、咯血等临床症状；(3)可行支气管镜检查；(4)签署知情同意书。排除标准：(1)无法获取有效肺泡灌洗液标本；(2)精神类疾病；(3)妊娠期或哺乳期女性。

1.3 检测方法

1.3.1肺泡灌洗液收集 气管表面麻醉，置入纤维支气管镜(奥林巴斯，BF-P60)探测支气管肺段情况，采用15 mL质量浓度为9 g·L-1的NaCl注射液灌洗胸部X线平片显示病灶部分，利用负压吸引器回收灌洗液约10 mL于无菌瓶中，送至检验科。

1.3.2SAT-TB检测 加入质量浓度为40 g·L-1的NaCl注射液液化灌洗液，液化后取1 mL置于EP管中，离心5 min，弃上清液并进行2次离心，取部分下层沉渣，采用50 μL裂解液进行重悬，超声破碎15 min，取2 μL置于洁净微量反应板上制成涂片，采用恒温荧光检测仪检测，所用试剂及试剂盒均由上海仁度提供。

1.3.3FQ-PCR检测 将SAT-TB检测中经离心获取的另外一部分下层沉渣进行洗涤，提取DNA及RNA，采用平台PCR仪以荧光探针法检测，所用试剂及试剂盒由凯杰生物提供。上述检验操作均由同水平高资质专科检验人员严格按照仪器及试剂盒说明书执行。

1.4 观察指标以临床诊断为“金标准”，比较SAT-TB、FQ-PCR单独与联合诊断痰涂片阴性肺结核的准确率。

1.5 统计学处理采用SPSS 22.0统计软件处理数据，准确率以率(%)表示，行χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 诊断结果本研究2 067例疑似肺结核患者中，经临床诊断确诊为肺结核1 862例，非结核性分歧杆菌肺病51例，肺部感染64例，肺癌23例，胸腔积液15例，其他肺疾病52例；经SAT-TB检测诊断出肺结核1 393例；经FQ-PCR检测诊断出肺结核1 437例；SAT-TB、FQ-PCR联合检测诊断出肺结核1 765例。见表1。

表1 SAT-TB、FQ-PCR单独检测和联合检测的诊断结果

2.2 准确率SAT-TB、FQ-PCR联合诊断痰涂阴性肺结核的准确率为94.34%(1 950/2 067)，均高于SAT-TB和FQ-PCR单独诊断的准确率[77.07%(1 593/2 067)、78.62%(1 625/2 067)](χ2=251.622、218.499，P<0.05)。

3 讨论

FQ-PCR检测是指在常规PCR扩增的基础上，采用荧光标记探针法定量检测结核分歧杆菌插入序列片段的检测方式，可将核酸扩增、光谱、杂交技术相结合，利于准确进行定量分析[3]。FQ-PCR检测的靶标为DNA，无法区分病菌活性与感染进程，易产生交叉污染，影响检测结果。SAT-TB检测属核酸检测技术，检测靶标为结核分歧杆菌特异的16s rRNA，通过扩增靶标片段，可快速判断样本中是否存在结核分歧杆菌[4]。SAT-TB技术通过对RNA进行检测，可准确区分病菌活性，且具有易降解、不易污染等特点，但RNA检测可造成假阴性结果，影响阳性检出率。

SAT-TB、FQ-PCR两种检测方法联合应用可相互弥补，可一定程度提高病菌活性、分歧杆菌种类鉴别力，利于临床快速对疑似肺结核患者进行准确诊断，缩短确诊时间，使患者及时得到治疗，为疾病诊断与筛选提供有效指标[5]。SAT-TB、FQ-PCR均从痰标本进行检测，通过收集肺泡灌洗液有利于对无痰患者实施早期快速诊断，使检测技术具有时效性、简便性、准确性等优点，可直观反映出标本中是否存在活菌。SAT-TB、FQ-PCR检测操作时间均较短，与临床常用涂片荧光染色相比，可将检测时间从1 d以上缩短至约1.5 h，利于实现痰涂片阴性肺结核快速有效诊断。本研究结果显示，SAT-TB、FQ-PCR联合诊断痰涂阴性肺结核的准确率为94.34%，均高于SAT-TB、FQ-PCR单独检测(P<0.05)。这说明联合检测可提高痰涂阴性肺结核准确率，具有较高的临床应用价值。SAT-TB检测中有5例假阳性结果，分析其原因可能为收集肺泡灌洗液时支气管镜消毒不严或标本运输时受到污染等原因导致，应加强关注，采取有效应对措施，避免临床应用时对诊断结果造成不良影响。

综上，SAT-TB联合FQ-PCR检测诊断痰涂片阴性肺结核的准确率较高，可实现疾病早期快速诊断，使患者及时得到治疗，有助于控制肺结核的传播。