干扰素诱导蛋白10对早期HCV感染病情进展预测价值的研究

徐 杰，赵亚楠，乔桂芳，刘桂海，孙焕芹，孙坚萍，代艳超，张永宏

(首都医科大学附属北京佑安医院 生物医学信息中心,北京100069)

在世界范围内，约有7100万人感染丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)，而慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C,CHC)也是引起肝硬化和肝癌的主要原因之一，每年约有399000人死于丙肝相关肝脏疾病，在HCV感染急性阶段约有15%-45%感染者病毒自发清除，55%-85%感染者进展为CHC，而慢性HCV感染者15%-30%在20年内进展为肝硬化[1]。多数研究发现HCV抗体(抗HCV)、HCV核糖核酸(HCV RNA)、丙氨酸氨基转移酶(AlanineAminoacidtransfer,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate Transaminase，AST)在判断体内HCV复制、肝脏炎症活动以及CHC预后方面具有重要的预测价值[2,3]。虽然抗HCV和HCV RNA 是确定现症感染的重要指标[4]，但是单纯依照上述指标并不能准确判断感染HCV的患者是否会发生自发性病毒清除或进入慢性感染阶段。尽管目前抗HCV治疗有效率可达95%，但对于HCV感染的早期临床转归预测方面仍有不足之处。HCV感染阶段宿主有效的免疫应答对病毒的清除以及肝脏炎症反应的程度具有重要的影响，且研究发现干扰素诱导蛋白10(interferon-γ-inducible peotein-10,IP-10)在慢性HCV感染过程中与肝脏的炎症程度明显相关[5,6]，但其表达水平对CHC早期疾病转归的影响尚不清楚，本研究通过对IP-10等HCV感染相关指标进行检测，探讨IP-10与HCV自发清除及疾病慢性进展的相关性，观察其对HCV疾病转归的早期预测价值。

1 资料与方法

1.1 纳入和排除标准对2016年1月至2018年3月在北京佑安医院样本库中储存的HCV感染患者血标本按以下标准进行回顾性筛选：(1)具有完整临床资料的患者；(2)根据2016年丙型肝炎防治指南(2016更新版)[7]可明确诊断为HCV感染的患者；(3)临床资料以及诊断指标提示发生HCV自发性清除(HCVr)和HCV慢性感染(HCVc)的患者。排除标准：(1)经抗HCV治疗的患者；(2)合并甲型肝炎、乙型肝炎以及戊型肝炎等其他类型病毒性肝炎的患者。共筛选符合入组标准的患者66例，其中HCVc组49例，HCVr组17例。

1.2 检测方法外周血HCV抗体检测采用罗氏Cobas e601全自动电化学发光免疫分析仪。HCV病毒载量检测采用丙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒(罗氏Cobas)，严格参照试剂操作规程进行。血生化检测采用富士700全自动干生化分析仪，操作按说明书进行。采用Luminex 技术检测外周血中趋化因子IP-10含量，检测仪器为Luminex200液相悬浮芯片系统，细胞因子试剂盒Bio-Plex Human Cytokine 27-plex Panel购自Bio-Rad公司(美国)，按照操作说明书进行检测。

2 结果

2.1 HCVc组与HCVr组患者一般资料比较

共入组HCV感染者66例(表1)，其中HCVc组49例，男性24例，女性25例，平均年龄56.22±5.878岁，HCVr组17例，男性6例，女性11例，平均年龄57.47±6.829岁，两组差异均无统计学意义(P<0.05)。基因型检测提示，在HCVc组患者HCV基因亚型以1b和2a为主，比率分别为67.35%(33/49)、24.49%(12/49)。ALT和AST表达水平比较发现，HCVc组明显高于HCVr组(61.127±50.520 vs 24.987±14.207,57.056±42.796 vs 25.487±9.419)，且差异均有统计学意义(P<0.001)。

表1 两组患者一般资料比较

注：HCVc：慢性丙型肝炎；HCVr：HCV清除；a表示两组间差异有统计学意义

2.2 HCVc组与HCVr组患者外周血IP-10表达水平比较

对两组患者外周血IP-10表达水平比较分析后发现(图1)，HCVc组外周血IP-10表达水平明显高于HCVr组(717.03±351.74 pg/ml vs 502.10±254.19 pg/ml)，且两者差异具有统计学意义(P=0.024)。

图1 外周血IP-10表达水平比较

2.3 IP-10表达水平与HCV感染后疾病进展的相关性分析

由以上分析结果可知，IP-10的表达水平在HCVc组中明显增高，为进一步明确其可能的相关因素，故对HVCc组患者的HCV病毒载量、ALT和AST相关指标进一步行相关性分析。分析结果提示(图2)，在HCVc组患者外周血IP-10表达水平与HCVRNA呈明显负相关关系(r=-0.394，P=0.006)，而与ALT、AST分别存在明显正相关性(r=0.454，P=0.001；r=0.571，P<0.001)。

图2 IP-10表达水平与HCV疾病进展的相关性分析

3 讨论

IP-10属趋化因子CXC亚家族，由单核细胞、内皮细胞等在γ干扰素和肿瘤坏死因子诱导下表达，与细胞表面趋化因子受体CXCR3结合,介导Th1型免疫反应[8]，募集活化的T细胞、自然杀伤细胞和单核细胞至炎症部位，增加T细胞对内皮细胞的黏附，在HCV慢性感染状态下可反映肝脏炎症程度，且与疾病预后相关[9,10]。但对干扰素治疗后IP-10表达水平和HCV病毒清除之间的关系仍有争论，既往研究发现IP-10的低表达与干扰素治疗后有效的病毒清除相关[11]，但也有研究发现IP-10的增加与HCV RNA的降低具有一定的相关性[12]，我们利用HCVc和HCVr两组患者治疗前IP-10的表达水平进行比较分析发现，HCVc组患者外周血IP-10的表达水平明显高于HCVr组(717.03±351.74 pg/ml vs 502.10±254.19 pg/ml)，且差异有统计学意义(P=0.024)，由此表明，高水平的IP-10与CHC患者疾病进展相关，低水平的IP-10水平与患者自发病毒清除相关。

另外，多数研究发现外周血中IP-10的表达水平可用于评估抗病毒药物的选择[13]，抗病毒药物的治疗效果以及抗病毒治疗后的应答反应，最近研究发现高水平的IP-10表达水平与直接抗病毒药物的持续病毒学应答呈正相关[14]，且在慢性乙型肝炎病毒感染的研究中也发现高水平的IP-10与患者的良好预后相关[15]。本研究中我们对CHC患者治疗前外周血IP-10的表达水平和HCV RNA表达水平相比较发现，IP-10的表达水平与HCVRNA呈负相关关系，与既往抗病毒治疗后两者相关性分析结果一致，由此表明治疗前即可通过IP-10表达水平的检测来评估CHC患者抗病毒治疗的效果。综合以上分析可知，在早期HCV感染后，IP-10高表达与疾病慢性进展相关，而在慢性感染的患者中，高水平的IP-10与病毒载量降低相关。

ALT和AST 作为判断炎症状态下肝脏功能的重要指标，其与抗HCV和HCVRNA联合检测在判断CHC疾病进展和预后方面具有重要的预测价值[2,3]，且肝细胞也可在干扰素诱导下表达IP-10，诱导T细胞在肝脏内的募集，进而杀伤HCV感染的肝细胞，促进肝内炎症反应。本研究结果发现，在HCVc组IP-10水平明显高于HCVr组患者，且与ALT和AST的表达水平呈正相关，从而表明HCVr组患者可诱导体内特异性T细胞免疫应答反应，进而有效的清除HCV，但CHC患者最初诱导特异性T细胞的能力相对较弱，无法快速有效的清除病毒并导致肝脏内持续的炎症状态。

总之，我们的研究结果表明，IP-10作为炎性细胞因子在HCV感染早期高表达与疾病的慢性进展相关。对于CHC患者，外周血IP-10，ALT和AST表达水平升高可能与患者特异性T细胞免疫功能较弱并诱导肝脏内持续炎症反应有关。