牛结核病的诊断方法

和灿兴

（云南省丽江市玉龙县畜牧兽医局 674100）

结核分枝杆菌共有三个型， 分别为牛型结核分枝杆菌、人型结核分枝杆菌以及禽型结核分枝杆菌， 其中牛型结核分枝杆菌对牛的感染力最强， 牛患结核病时多数是由此种病原导致的[1]。 患病牛只临床表现为低烧、咳嗽，伴有生产繁殖性能降低，如救治不及时则会导致牛只死亡。 人如果饮用了患有结核病牛的牛乳或肉质，则会感染该病。 牛结核病不仅对牛产业发展产生了巨大的影响，也严重危害人类的身体健康。 所以，找到快速、准确的检测方法是控制牛结核病发生、发展的重要手段之一。

1 病原学方法

患病牛的病变器官、痰液、尿液、粪便、乳汁以及多数分泌物中均有结核分枝杆菌的存在， 可以通过无菌方法获得以上病料，做涂片镜检或细菌培养，必要时也可以进行动物接种。 涂片镜检法在这三种方法中是较为便捷且迅速的诊断方法， 但是该方法检出阳性率较低，涂片后，在显微镜下观察很难分辨出细菌是活跃状态还是已经死亡[2]， 所以该方法仅作为诊断的辅助依据。 结核分枝杆菌的细菌培养对外在条件的要求较高，且在体外环境下该细菌生长较为缓慢， 需要半个月到一个月的时间菌落才能被看见，这种方法耗时较长，一般不作为诊断方法。

2 免疫学方法

2.1 结核菌素皮内变态反应

这种方法是世界卫生组织推荐的用来检测牛结核病的诊断方法，结核菌素皮内变态反应是用牛结核菌素进行皮内接种，利用迟发性变态反应的原理，72～96h 后根据牛接种皮服的肿胀程度，来确定牛是否已经被结核分枝杆菌感染。 这种方法较病原学方法有很大的优势，不仅检出率高，而且耗时较短，但是这种诊断方法也有一定的缺点， 就是接种后如果牛的接种部位受到物理性或化学性的刺激时也会表现为肿胀， 这种肿胀很难与接种引发的肿胀相鉴别，所以容易产生一定的误差。 此外，这种方法还不能鉴别是由于牛只接种结核疫苗后产生的变态反应还是天然感染后产生的反应， 所以在应用结核菌素皮内变态反应之前应当先对牛的接种史进行了解[3]。

2.2 Elisa 法

Elisa 法也称酶联免疫吸附实验，是通过酶结合特定的抗原或抗体后发生显色反应而判断牛只体内是否含有某种病原的方式，这种方法操作较为简单，特异性很高，在检测牛结核病方面较为实用，但在实际的生产中这种方法并没有被推广，这是因为结核分枝杆菌的抗原性不强， 属间和种间存在的共同抗原决定簇是如何发挥作用的还未可知， 结合分支杆菌激发的机体体液免疫是如何发挥作用的也尚需要更深层次的研究， 所以目前来说，用Elisa 法来检测牛结核病仍处于试验阶段。

2.3 胶体金法

胶体金法是许多疾病诊断中常用的免疫学诊断方法之一，这种方法特异性和敏感性都很高， 而且不需要酶标仪等其他的仪器，肉眼就可以判读结果，在目前我国兽医临床中应用交广。作为胶体金标记抗原的常用抗原蛋白为MPB70 和MPB83，这两种抗原蛋白作为标记抗原时，结核病的检出率大大提升，这种方法配合结核菌素皮内变态反应联合使用， 能够较为准确地诊断出牛是否患有结核病。

2.4 γ-干扰素诊断法

这种方法在1990 年就已经被建立起来了，其原理是体外培养的致敏淋巴细胞接收到特异性抗原的刺激后会被活化， 从而分泌出γ-干扰素，再用Elisa 法对γ-干扰素的含量进行测定，就可以判断出牛只是否患有结核病。 这个方法在澳大利亚、 阿根廷、美国等国家已经进行了生产试验，其检出率在77%～93%，比结核菌素皮内变态反应的检出率高10%左右。

2.5 免疫过氧化物酶法

这种方法是通过单克隆抗体来检测结核分枝杆菌的表面抗原MPB70，这种方法与其他方法相比检测速度更快，成本较低，对操作人员的要求较低， 特别是在分枝杆菌混合感染的过程中更能显现出优势。

3 分子生物学法

3.1 PCR 法

PCR 法早在1989 年就在结核病的诊断方面发挥作用了，30年来，学者们不断完善这一方法，现在这一方法已经足够灵敏且特异性很高，但是由于PCR 操作对环境有一定的要求，要避免操作过程中污染造成的假阴性或假阳性， 所以使用PCR 法进行牛结核病的诊断时，要严格按照操作规程进行实验，才能保证结果的可靠。

3.2 DNA 核酸探针技术

分枝杆菌属有共同的抗原基因为6ku， 所以想要利用DNA核酸探针技术来检测牛只体内是否存在结核分枝杆菌则需要合成特异性的探针才能获得准确的结果。

牛结核病的诊断技术大体可以分为三类， 分别是病原学检测、血清学检测和分子生物学检测，不论哪种方法都有其优点和缺点， 各个养殖户应当选择适合自己实际情况的方法对牛场内的牛只进行结核病的普查，也可以多种方法配合使用，以达到更好的效果。