大小鼠脾虚及湿盛模型的研究*

★ 张雅莉 吉燕华 姜璎娜 聂鹏 曾治君*（江西中医药大学/江西省中医病因生物学重点实验室 南昌 330004）

由于环境气候的变化和肥甘厚腻食物的过度摄取，导致了脾虚湿盛证患者越来越多。该证出现的腹泻腹胀、食少纳呆、面色萎黄等症状也极大的影响了人们的正常生活。所以对于研究出治疗脾虚湿盛证的药物具有很大的临床意义。而模型的构建则是药物研制的至关重要的一步。比如为寻找相关中草药以解决表现为平素面垢油光、易生痤疮粉刺、身重困倦的湿热证。如，董银卯等［1］在《祛湿清热方对湿热模型的作用》中采取多因素致湿热模型，对中医验方—祛湿清热方进行了药理作用评价，取得了不错效果。

在相关文献中，我们发现了大量脾虚模型，或湿盛模型的单独构建，而现实中脾虚多由湿盛造成，湿也易致脾虚，所以脾虚和湿盛往往同时存在。所以本文旨在同时研究脾虚和湿盛，及如何构建脾虚湿盛大小鼠模型。

从20世纪70年代，由北京师范大学首次报道了大黄脾虚动物模型开始［2］，到1982年前中国中医研究院基础理论研究所应用大黄致泻来造脾虚大鼠模型［3］，前后经历了十多年，可见构建一个符合临床特点的动物模型的难度非同一般。然而，近年来，饥饱失常、苦寒泻下、劳倦伤脾、甘肥过度等各类脾气虚证模型相继问世。由于大小鼠和人的种属差异，且动物急性实验不符合虚证临床，也不能排除药物的中毒反应和峻泻导致生化乏源，致使难以说明是脾气本身的“虚”。所以脾虚湿盛证大小鼠模型的构建以解决以上问题为前提，来构建更符合临床的脾虚动物模型和以药物的研制提供基础为目标。

1 大小鼠脾虚模型的构建

脾虚［4］包括脾气虚和脾阳虚，脾气虚多由于饮食不节、劳累或久病所致。而脾阳虚多由于脾气虚加重，出现明显的寒证所致，或是过用寒凉药物及攻下太过而引起的以泄泻、腹痛为主要症状的病证。临床上脾虚患者可因久服耗气破气的中药导致，或过食肥甘厚味、寒凉之品，或肿瘤患者的放疗化疗等造成。

1.1 耗气破气法陈小野等［5］用厚朴、枳实、大黄按3∶3∶2比例常规制成100%煎剂隔日灌喂中药4mL/只（雄鼠）或3mL/只（雌鼠），隔日喂食。造模26周以期达到造成慢性脾虚大鼠模型。与对照组相比，实验结果为脾虚证组大鼠的病理改变以慢性炎症及各器官的退行性病变为主。

1.2 过劳加饮食失节法模拟人类由于过劳耗气或饮食失节导致脾虚。谢仰洲等［6］选用Wistar雄性大鼠60只，体重在120～150g，分为实验组（40只）、对照组（20只）。隔天在跑步机上连续跑步30min，猪油与白菜隔日交叉喂养，自由进水。造模后模型大鼠出现体重下降、体温低、毛疏松色无光泽等症状，待个别大鼠死亡，判定为造模成功。

1.3 秋水仙碱法秋水仙碱为治疗肿瘤的化疗药物，临床多见药后出现吸收不良综合征，与中医的脾气虚证类似。所以刘士敬等［7］用秋水仙碱水溶液喂饲大鼠来构建脾气虚模型。结果发现模型组大鼠出现食量减少、体重减轻、大便溏泄等症状。且模型组血清胃泌素、D-木糖浓度低于对照组大鼠，而血清肌红蛋白、肌酸磷酸激酶高于对照组，模型大鼠血小板与纤维蛋白原含量也均有不同程度的下降。

1.4 X射线照射法用X线照射大鼠腹部导致脾虚，模拟肿瘤病人放疗化疗后的脾虚。刘士敬等［8］选用日产HG7001型X线远距离照射机，在密闭盒中对每只大鼠进行腹外照射，确定以大鼠的食欲不振、消瘦、大便溏泄等脾虚症状为主要诊断指标。以公认的代表脾气虚的病理指标为辅助，如血清胃泌素、D-木糖浓度；胃、小肠粘膜的组织形态观察；血清碱性磷酸激酶及同工酶、肌红蛋白、血小板指数、血清纤维蛋白原等。

1.5 利血平法利血平通过耗竭儿茶酚胺，使动物出现脾虚患者常见的交感神经功能低下、副交感神经功能亢进等症状，且通过利血平能使动物长时间脾虚，有利于健脾中药缓慢发挥作用［9-10］。周英［11］用12只80日龄，体重220～250g的SD大鼠作为脾虚组。给大鼠肌注利血平0.2mg/（kg·d），连续14天，发现脾虚组大鼠造模第6天出现饮食减少、大便溏、蜷缩或肛门污秽等脾虚证候，且造模结束时并见形体消瘦、身软乏力等表现。

1.6 苦寒泻下加劳倦法曲长江等［12］选用SPF级雄性KM小鼠110只。将其随机编号并且称重，然后将其分为6组，A组：大黄泻下造模组；B组：番泻叶泻下造模组；C组：劳倦过度造模组；AC组：大黄泻下加劳倦过度造模组；BC组：番泻叶泻下加劳倦过度造模组；O组：空白对照组。且选择谷雨时节造模，持续时间为8天。A组在上午用大黄灌胃；B组在上午灌胃番泻叶水浸液；C组在下午强迫大鼠游泳至耐力极限；AC组上午灌胃大黄，下午游泳；BC组上午灌胃番泻叶水浸液，下午游泳；O组不施加任何的处理因素。旨在探讨单因素和复合因素对于造模的影响。结果都出现了肛温降低和体重下降的结果。

2 湿盛大小鼠模型的建立

湿［13］可分为外湿和内湿。外湿可由起居环境潮湿，或冒雨涉水感受湿邪等导致。内湿则由于过食肥甘，恣食生冷所致，因为脾为太阴湿土，喜燥恶湿，所以过食肥甘厚味易伤脾胃，致使脾失健运不能为胃行其津液，或者素体肥胖，喜静少动，致使气机不利，津液输布障碍，聚结所致。

2.1 肥甘厚腻饮食法吴赛等［14］用饮食诱导痰湿壅盛证高血压大鼠模型。用高脂饲料喂养后选出体重、血压均超过对照组25%的大鼠归为模型组大鼠。模型大鼠呈现体重增加、毛色黯淡、嗜睡等典型的湿盛证候，且用瘦素作为客观指标来评价痰湿壅盛证大鼠模型。

2.2 “饮食+环境+生物致病因子”法汤朝晖等［15］采用“饮食+环境+生物致病因子”复合因素造湿盛小鼠模型，也就是肥甘厚腻的食物、潮湿的环境和病毒细菌致病因子联合造模。实验分为3组，正常组：正常饲料、自由饮水及自然环境饲养15天。病毒组：小鼠先在肥甘厚腻饮食、自由饮水和自然环境中饲养，至第10天上午予以腹腔注射MHV-A59 0.5mL，然后分别在病毒感染后第1天、第3天、第5天上午（9时～12时）放入气候模拟舱［温度（32±0.5）℃，湿度（60±5）%］；其余时间在自然环境、肥甘饲料及自由饮水中饲养。肠菌组：小鼠先给予肥甘饮食、自由饮水和在自然环境饲养，然后至第10天上午8时予以大肠杆菌灌胃1次，第12天上午8时重复感染一次。入舱暴露及平时喂养同病毒组。所得结论是“内湿”的形成可能主要与肥甘饮食、湿热外环境相关，而MHV-A59作为生物致病因子所致的湿热证模型炎症反应更加剧烈。

3 脾虚湿盛证大小鼠模型的建立

《素问·至真要大论》载：“诸湿肿满，皆属于脾。”说明脾的运化失职是湿浊内生的关键。而湿为阴邪，易损伤阳气，且脾喜燥恶湿，湿邪易困脾阳，阻滞气机，导致脾的运化功能失职。所以脾虚易致湿浊内生，而湿邪反过来又易引起脾虚［4，13］。

因为湿盛与脾虚的相互作用，所以脾虚湿盛大小鼠模型的建立，容易于脾虚模型、湿盛模型的单个建立。脾虚大小鼠模型的构建可以用耗气破气加饮食失节法、过劳加饮食失节法、苦寒泻下法等方法。湿盛模型的构建可以用肥甘厚腻饮食法和“饮食+环境+生物致病因子”法。而脾虚湿盛模型可以先通过给予肥甘厚腻饲料、或潮湿环境导致湿盛实证，然后在大小鼠存在内湿的情况下，再通过上述的导致脾虚的方法，以期造成脾虚湿盛模型。也可以通过上述导致脾虚的方法致虚，再给予一个不节饮食或潮湿环境，来造脾虚湿盛模型。

4 讨论

陈小野等用苦寒泻下药来导致大鼠脾虚，有可能为泻下太过，导致食物来不及吸收，生化乏源而出现脾虚类似症状，而不是脾本身的虚，以至于不能运化水谷精微。

谢仰洲等则通过强制大鼠跑步，使其劳倦，劳则气耗，形体劳倦则气伤，就如张景岳所云：“脾胃之伤于外者，唯劳倦最能伤脾。”且用白菜与猪油交替喂饲，饮食失调容易导致脾虚。但是现今人类的劳倦多由脑力劳动，熬夜、睡眠不足所导致［16］，而不是体力活动所导致的“劳”。且饮食失调也多为过食冰冷寒凉食物，张景岳又云：“脾胃属土，惟火能生，故其本性则常恶寒喜暖，使非真有邪火，则寒凉之物最宜慎用”。所以为了更加符合临床，可以通过干扰睡眠和灌胃冰水来达到过劳加饮食失节而造脾虚大小鼠模型。

秋水仙碱法、X射线照射法、利血平法等造模方法也都可以使大小鼠出现脾虚症状。而肥甘厚味饮食加潮湿环境能够导致大小鼠湿盛，但是脾虚和湿盛往往同时存在，脾能燥湿，且脾属中焦，为水液运行的通道，所以脾虚能使水无去处而停聚于内。

5 结论

泻下药加劳倦法制脾虚大小鼠模型具有用药剂量小，造模时间长和造模因素更接近于临床脾气虚证的病因和久病致虚的特点，且易于复制，得到了广泛应用。但是，峻泻易导致生化乏源，难以说明是脾气本身的虚，还是元气的虚。

湿盛模型以“饮食+环境+生物致病因子”法来造湿盛大小鼠模型，无论从实验指标、造模动物的发热、还是神倦等观察症状体征，最为接近中医湿热证型。

所以脾虚湿盛大小鼠模型的构建应该合理安排致虚或致湿饲料的喂养，及有关药物的注射，防止模型过多的意外死亡。临床上脾虚湿盛证一般是慢性病，所以制作模型的过程应该要更贴近实际情况。