邹华伟 王玉强
乳腺癌是发生于乳腺腺上皮组织的1种恶性肿瘤。随着我国的不断发展,其发病率也逐渐增加,严重影响到人民的生活质量与家庭经济[1-2]。IRS-1、IRS-2均属于胰岛素受体底物家族中的一员,是胰岛素信号转导系统中的关键中介分子,并参与多种激素、细胞因子的信号转导,能够维持细胞的基本功能,对于引起肿瘤的发生、发展有重要关系[3-4]。因此,本研究通过检测IRS-1、IRS-2蛋白在乳腺癌组织中的表达,分析其表达与乳腺癌患者临床病理特征的相关性。
选取本院2010年9月至2013年9月收治的70例乳腺癌患者作为研究对象,根据资料结果可分为观察组(70份癌组织标本)及对照组(70份癌旁组织标本,距肿瘤边缘4 cm处),所有研究对象均为女性,其中观察组年龄25~76岁,平均年龄(45.36±5.24)岁;对照组年龄28~79岁,平均年龄(46.28±6.31)岁。其临床TNM分期按照美国癌症联合委员会制定的乳腺癌分期标准[5]。纳入标准:①已确诊为浸润性乳腺癌;②获得患者及家属的知情同意,并签署知情同意书;③所有患者均均行根治性手术治疗。排除标准:①合并其他恶性肿瘤者;②严重肝肾功能不全者;③术后行放化疗者;④临床资料不完整。两组一般资料比较无明显差异(P>0.05),具有可比性。
1.2.1 试剂与仪器 免疫组化SP试剂盒、DAB显色试剂、EDTA抗原修复液、PBS粉剂均来自北京中杉金桥生物技术公司,浓缩兔抗人IRS-1单克隆抗体来自于武汉博士德公司,兔抗人IRS-2来自美国Abcam公司。
1.2.2 免疫组织的化学染色 采用SP法对石蜡片进行免疫组化检测,主要是将手术切片标本经过中性甲醛固定后,进行常规的石蜡包埋后切片,厚度为4 μm,再经二甲苯脱蜡及梯度酒精至水,使用EDTA缓冲液进行修复,在室温下加入3%过氧化氢孵育10 min,并使用10%的山羊血清封闭。分别加入相应的IRS-1抗体、IRS-2抗体。并以PBS代替一抗作为对照组,4 ℃过夜,经过复温后加入二抗,37 ℃温箱孵育20 min,再加入三抗,37 ℃温箱孵育20 min,最后进行DAB 显色试剂盒显色,苏木精复染,1%酒精盐酸分化,自来水返蓝,蒸馏水洗涤,脱水、透明封片,用 PBS 代替一抗作为阴性对照。
1.2.3 结果判定 IRS-1、IRS-2阳性表达呈棕黄色或棕褐色。根据标本染色的强度以及范围进行判定:①根据细胞染色范围:棕黄色染色范围0~25%为1分、26%~50%为2分、51%~75%为3分、>75%为4分。②根据染色强度:无着色为0分,即阴性;浅黄色为1分,即弱阳性;棕黄色为2分,即阳性;棕褐色为3分,即强阳性。显色强度×阳性细胞百分数为染色的综合计分,≤1分为阴性(低表达),阳性为>2分(高表达),其中5~8分为中度阳性,9~12分为强阳性。两组免疫结果由两位高年资的病理医师共同完成。
根据其资料及检测结果记录所有患者其性别、年龄及肿瘤分化程度等一般临床资料和肿瘤情况;IRS-1、IRS-2蛋白的表达水平及预后情况;不同临床特征患者IRS-1、IRS-2蛋白表达水平等相关资料差异性比较;分析IRS-1、IRS-2蛋白的表达水平与乳腺癌患者临床病理特征及预后的关系。
采用电话或者上门进行随访,随访截止时间为2018年9月30日,随访时间为1~60个月,并在随访期间,有15例出现死亡,22例出现复发转移。
应用SPSS 20.0软件进行数据统计学分析,计量资料以(±s)表示,采用t检验,计数资料以率(%)表示,采用χ2检验,采用Kaplan-Meier法估计不同临床特征乳腺癌患者的生存情况,通过非条件单因素和多因素Cox 比例风险回归模型分析影响乳腺癌患者预后的相关因素,以P<0.05为差异具有统计学意义。
乳腺癌组织中IRS-1、IRS-2蛋白的高表达率均明显高于对照组(P<0.05),见表1。
表1 两组组织标本中IRS-1、IRS-2蛋白表达水平比较(例,%)
IRS-1、IRS-2蛋白表达与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、组织学分级以及雌激素受体状况无明显相关性(P>0.05),但IRS-1、IRS-2蛋白表达与乳腺癌患者的TNM分期以及淋巴结转移有明显相关性(P<0.05),见表2。
表2 乳腺癌患者的IRS-1、IRS-2蛋白表达情况与临床病理特征的关系/例
本研究70例乳腺癌患者中,自出院后至随访结束存活1~60个月。乳腺癌患者中位无进展时间45.5个月,其中IRS-1高表达和低表达患者其中位无进展时间分别为32个月、50个月,而IRS-2蛋白高表达和低表达患者其中位无进展时间分别为28个月、52个月,中位无进展时间比较,P<0.05。
经单因素分析得出:TNMⅢ~Ⅳ期、有淋巴结转移以及IRS-1、IRS-2高表达患者生存时间均显著缩短(P<0.05),见表3。
经多因素Cox比例风险回归模型分析得出:淋巴结转移、IRS-1高表达、IRS-2高表达以及TNMⅢ~Ⅳ期均为影响乳腺癌患者预后的独立危险因素(P<0.05),见表4。
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一,其发病率可占其他恶性肿瘤的7%~10%,多发生在40~60岁之间的女性中[6],早期症状不明显,常出现乳房肿块、胸痛、水肿、乳头内陷以及腋窝淋巴结肿等症状,其癌细胞并容易随着血液以及淋巴液散播至全身,形成转移,严重的威胁到患者的心身健康,并已成为目前社会上的重大公共卫生问题[7-8]。因此,为了能够降低去发病率,提高治疗效果,有相关学者提出IRS-1、IRS-2蛋白与乳腺癌的临床症状以及预后状况有着重要的关系。IRS是指能够被激活的胰岛素受体络氨酸激酶作用的底物,具有较多的络氨酸残基,可被磷酸化,而磷酸化的IRS却能够结合并激活下游效应物,也是作为胰岛素信号因子转导中的关键调控[9-10],并有相关研究表明,胰岛素生长因子的信号系统失调在癌症中较为常见[11],因此,IRS在乳腺癌的发生发展中有起着着重要作用。
表3 影响乳腺患者预后的单因素分析
表4 影响乳腺癌患者预后多因素Cox分析
本次研究结果可知,乳腺癌组织中IRS-1、IRS-2蛋白的高表达率明显均高于对照组(65.71%vs32.86%,70.00%vs35.71%,P<0.05),表示IRS-1、IRS-2蛋白在乳腺癌患者中水平表达升高,能够反应乳腺癌的严重程度;IRS-1、IRS-2蛋白表达与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、组织学分级以及雌激素受体状况无明显差异(P>0.05),但IRS-1、IRS-2蛋白表达与乳腺癌患者的TNM分期以及淋巴转移比较有明显差异(P<0.05);并经过患者出院后的随访可知,TNMⅢ~Ⅳ期、有淋巴结转移以及IRS-1、IRS-2高表达患者生存时间均显著缩短;为进一步了解患者的预后状况,经多因素Cox比例风险回归模型分析得出:淋巴转移、IRS-1高表达、IRS-2高表达以及TNMⅢ~Ⅳ期均为影响乳腺癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。由此可知IRS-1、IRS-2蛋白的表达能够反应乳腺癌的严重程度,并对于该疾病的预后提供了重要线索。
信号通路指当细胞里发生反应时,信号从细胞外传到细胞内,而细胞并根据这种信息来做出反应的现象,并参与细胞的增殖、分化、凋亡以及免疫调节等作用,主要是由蛋白激酶与磷酸酶构成的,能够抑制或激活下游蛋白的活性,并当信号通道发生异常时可导致细胞发生癌变[12-14]。IRS是参与了细胞因子信号转导的磷酸化蛋白,能够控制下游信号的传导,当其异常时可导致肿瘤发生[15]。IRS-1与IRS-2是IRS家族中的一员,其中IRS-1是1种蛋白质,有多个可被受体激酶磷酸化的位点,当磷酸化后可同多种效应物结合。IRS-2的酪氨酸被磷酸化后能够同PI3K结合,将该酶激活,并影响磷脂的代谢,而IRS蛋白的几种亚型已证实在肿瘤中的表达有改变,因此,IRS-1与IRS-2对于乳腺癌发生发展有重要关系[16-17]。
综上所述,IRS-1、IRS-2在乳腺癌癌变组织中呈高表达,随着患者的淋巴结转移、TNMⅢ~Ⅳ期时以及IRS-1、IRS-2蛋白高表达率均上升。因此,乳腺癌组织中IRS-1、IRS-2蛋白的表达水平对判断乳腺癌的恶性程度及患者预后提供了一定的的参考价值。但本组研究选取样本量较少和研究时间过短,更多研究结果,需进一步深入研究。