2 208例疑似新生儿溶血病血清学检测结果分析

何柏霖

(重庆医科大学附属儿童医院输血科，重庆 400010)

新生儿溶血病(HDN)一般特指母婴血型不合引起的胎儿或新生儿免疫性溶血性疾病。当胎儿从父方继承来的红细胞抗原，恰为母亲所缺乏时，就是母子间血型不合。这种胎儿的红细胞对母亲来说是一种异抗原，当它通过胎盘进入母体后，抗原刺激母体产生相应的免疫抗体。这些抗体又可以通过胎盘进入胎儿体内，与胎儿红细胞起反应，从而使胎儿红细胞遭到破坏。在已知的可以发生HDN的20多个血型系统200余个血型抗原中，以ABO系统最为常见，其次为Rh系统，其他如Kell、Duffy、Kidd等系统也有报道，但极少见[1]。HDN临床症状与溶血程度基本一致，多数ABO溶血病患儿主要表现为黄疸、贫血，Rh溶血病症状较重，多数有不同程度的肝脾增大，严重者甚至死胎[2]。本研究回顾性分析本院2 208例疑似HDN患者的血清学检测结果，现报道如下。

1 材料与方法

1.1标本来源 收集2018年1-12月本院疑似HDN新生儿血清标本共2 208例。其中患儿男1 217例，女991例。分别用乙二胺四乙酸二钾抗凝试管和惰性分离胶、促凝剂促凝试管采取患儿静脉血各2～3 mL。

1.2仪器与试剂 全自动配血及血型分析仪、孵育器、离心机、ABO-Rh血型检测卡和抗人球蛋白检测卡均由Diagnostic Grifols，S.A.配套提供，水浴恒温振荡器由上海博迅实业有限公司提供，不规则抗体筛查细胞由Sanquin Reagents B.V.和上海血液生物医药公司提供。

1.3方法 HDN血清学检测均按照《全国临床检验操作规程》[3]和试剂说明书进行。

1.4判断标准 通过直抗试验、游离试验、释放试验3项结果进行分析诊断。直抗试验以出现凝集为阳性，游离试验和释放试验以可检出与患儿同血型的标准红细胞反应的抗体为阳性。ABO-HDN 3项试验中，有3项试验或2项试验或单独释放试验为阳性即可判定为ABO-HDN阳性，其他试验组合均不足以判定为阳性[4]。对于非ABO-HDN且直抗试验为阳性者，则做不规则抗体筛查，判定是否为其他血型系统溶血。

1.5统计学处理 试验结果采用SPSS21.0进行处理，计数资料以率表示，组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1血型及溶血类型分布 总共2 208例标本中，阴性1 165例，HDN阳性例数1 043例，其中ABO-HDN 1 021例，占HDN总数的97.89%，其他非ABO-HDN共22例，占总数的2.11%。在ABO-HDN中，母亲血型B型，患儿血型A、AB型各1例；母亲血型A型，患儿血型AB型1例。见表1。

表1 2 208例标本血型及溶血类型分布(n)

2.2患儿性别与HDN阳性率之间的关系 在确诊的HDN患儿中，男、女患儿阳性率比较,差异有统计学意义(χ2=15.461，P=0.000)。见表2。

表2 性别与HDN阳性率之间的关系

2.3患儿血型与HDN阳性率之间的关系 患儿血型为A、B阳性率比较,差异有统计学意义(χ2=25.714，P=0.000)。见表3。

表3 血型与HDN阳性率之间的关系

2.4日龄与HDN阳性率之间的关系 日龄与HDN阳性率之间的关系见表4。

表4 日龄与HDN阳性率之间的关系

2.5不同ABO-HDN结果组合的构成比 在1 021例确诊ABO-HDN中，不同组合的构成比结果见表5。

表5 不同ABO-HDN结果组合的构成比

2.6确诊ABO-HDN 3项试验比较 确诊ABO-HDN 3项试验比较结果见表6。

表6 确诊ABO-HDN 3项试验比较(%)

2.7非ABO-HDN溶血统计结果 22例非ABO-HDN溶血统计结果见表7。

表7 非ABO-HDN溶血统计结果(n)

3 讨 论

本研究共收集了2 208例标本做HDN检查，临床上怀疑为HDN而血清学结果不支持诊断共1 165例，因为在实际中并非所有新生儿都检测HDN,只有符合诊断为病理性黄疸标准且母婴血型不合才检测HDN[2],或者在交叉合血过程中发现与患儿不相容的抗体时通知医生检测HDN，故HDN阳性率较高，为47.24%，与部分文献的报道相似[5-6]。证实为血型免疫抗体引起的HDN共1 043例，ABO-HDN有1 021例，占97.89%，与詹洁瑜等[7]的研究结果(96.26%)非常相近,其中ABO-HDN阳性率为47.24%，男529例，阳性率为43.47%，女514例，阳性率为51.87%，女性患儿的阳性率高于男性患儿，差异有统计学意义(χ2=15.461，P=0.000)，这与文献报道一致[8]。2 208例中，ABO血型构成比A(40.22%)>B(29.80%)>O(26.81%)>AB(3.17%)，与同时期全院ABO血型表型分布构成比O(34.62%)>A(32.40%)>B(24.30%)>AB(8.69%)差别较大，原因为前文所说并非所有患儿均做了HDN检查。对于O型患儿，只可能发生非ABO-HDN，而ABO-HDN阳性率高于非ABO-HDN；又因为红细胞上的A抗原位点的数目为10.5×105[9]，高于B型抗原位点数目7.5×105[10]，本研究中患儿血型为A型阳性例数为637例，阳性率为71.73%，患儿血型为B型阳性例数为391，阳性率为59.42%，A型患儿阳性率高于B型患儿，差异有统计学意义(χ2=25.714，P=0.000)，与国内的报道相似[11]，故构成比顺序发生了较大变化。值得注意的是，本研究发现母亲血型为B型患儿血型分别为A型和AB型的ABO-HDN各1例，母亲血型是A型患儿血型为AB型的ABO-HDN 1例，故在临床工作中，遇到母亲血型非O型的可疑HDN标本，也可能发生ABO-HDN，应引起重视。

HDN除引起黄疸外，还能造成重度贫血、低蛋白血证、心力衰竭，可致全身水肿，肝脾肿大，对神经系统造成严重伤害，甚至死亡。治疗的关键在于尽早诊断，所以要尽早对高危HDN患者进行血清学诊断。本研究显示，日龄为2 d的新生儿HDN检出率最高，为62.25%，随着日龄增大，检出率也随之降低，超过7 d时检出率只有27.79%。这是由于随着发病时间的延长，致敏的红细胞在肝脏和脾脏中逐渐被破坏，游离的IgG抗体逐渐消失，其他IgG抗体则以抗原抗体复合物存在，失去了反应原性而出现阴性结果[12]。所以为提高检测的阳性率和准确性，对可疑的患儿应尽早检测，及时给予光照疗法、药物治疗、换血疗法和其他对症治疗，促进患儿康复。

在最终确诊为ABO-HDN的1 023例患儿中，以游离试验、释放试验阳性组合占比最高(77.22%)，直抗试验、游离试验、释放试验均为阳性占比次之(19.55%)，单独释放试验阳性占比为3.03%。提示发生ABO-HDN时，一般都是释放试验阳性伴随着游离和(或)直抗试验阳性，而很少甚至不会出现游离和(或)直抗试验阳性而释放阴性的情况。就3项试验灵敏度和准确度来说，直抗试验的灵敏度为19.58%，显著低于游离试验(96.96%)和释放试验(100.00%)；直抗试验准确度为44.71%，也低于游离试验(97.84%)和释放试验(100.00%)，直抗试验和释放试验都是检测红细胞上致敏的血型抗体，游离试验则是检测血浆中的血型抗体。通常来讲直抗试验阳性越强，意味着病情越重，释放试验中使用的红细胞浓度是直抗试验的数百倍，故灵敏度很高，游离试验阳性说明病情持续，在新生儿溶血病诊断上有辅助诊断价值[13]。所以在ABO-HDN 3项试验中，释放试验灵敏度和准确度都是100.00%，只要是阳性，即可诊断为ABO-HDN。

Rh血型系统各抗原的抗原性强弱顺序为D>E>C>c>e。本研究中，Rh血型不合引起的HDN共20例，占总HDN的1.9%，结果分别为抗D 10例(50%)，抗E4例(20%)，抗C 3例，抗c 3例，抗e 0例，与刘曦等[14]的研究抗D(52.3%)、抗E(22.5%)的结果大概一致,说明HDN发生率也和Rh抗原强弱基本相符。

MNS血型系统是第2个被发现的血型系统，其复杂性仅次于Rh血型系统。抗M最常见的是IgM型抗体，78%的抗M中含有部分IgG型抗体；大多数抗N是IgM型，通过多次反复输血或妊娠可以产生IgG型抗N并表现出明显的剂量效应。大多数抗M和抗N在37 ℃无反应性，但也有部分抗M和抗N在37 ℃有反应性。抗S通常是IgG型抗体，抗s可以是IgM型也可以是IgG型抗体，但以IgG为主，MNS血型系统引起的HDN较罕见，但可导致严重的致死性HDN，故应重视MNS血型系统HDN的实验室检测[15]。本研究发现了1例IgG型抗-M引起的HDN。

Duffy血型系统共有6个抗原，该系统抗体主要是通过输血或妊娠免疫产生，多数为抗-Fya，少数为抗-Fyb，是IgG类抗体，多数抗Fya引起的HDN临床症状较轻。本研究发现了1例母亲(G3P3)血型B型，患儿血型O型的抗-Fya引起的HDN。

不同性别和血型的HDN检出率有差异，对于可疑的HDN患者，应尽早进行检测，可以提高检出率。释放试验是诊断ABO-HDN的金指标，一旦阳性即可确诊。因本实验室只对非ABO-HDN合并直抗阳性者才做不规则抗体筛查检测，故在实际中如存在不规则抗体而直抗未呈阳性者，可能对其他血型系统引起的HDN漏检。在条件允许的情况下，实验室应配备多种谱细胞或用更灵敏的方法来检测抗体，在检测血型时就进行不规则抗体筛查，这样可以避免抗体漏检造成HDN类型诊断错误，便于早期治疗，促进新生儿康复。

4 结 论

应尽早对可疑HDN患者进行检测，不断规范实验室操作和提高专业技术能力，给医生提供快速准确的临床决策，更好地服务于医院和社会。