中蔬四号番茄无菌系的初步建立

王爱玲 王璐 张鹏飞 田时敏 段国琪 梁哲军

摘    要： 以中蔬四号番茄种子为试材，研究不同种子浸泡时间、NaClO浓度、培养基和光照时间对其无菌苗生长的影响。结果表明：浸泡16 h有利于中蔬四号番茄种子萌发和成苗;10%和15%的NaClO处理的中蔬四号番茄种子萌发率和成苗率均高;接种至1/2MS和1/2MS+0.3 mg·L-1IBA的培养基上的番茄种子萌发率和成苗率，均为100%;暗培养3 d和不暗培养的番茄种子萌发率和成苗率相同。结合经济效益，综合认为浸泡16 h的种子，用10%的NaClO处理中蔬四号番茄种子，接种至1/2MS培养基上，暗培养3 d，有利于中蔬四号番茄种子的萌发和成苗。

关键词：番茄;NaClO;无菌系;建立;暗培养

中图分类号：S641.2          文献标识码：A           DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2020.12.002

Preliminary Establishment of Sterile System of Chinese Vegetable Tomato NO.4

WANG Ailing， WANG Lu， ZHANG Pengfei， TIAN Shimin， DUAN Guoqi， LIANG Zhejun

（Cotton research institute， Shanxi Agricultural University， Yuncheng， Shanxi 044000，China）

Abstract：Using the seed of Chinese vegetable tomato NO.4 as test material， the effects of different soaking time，NaClO concentration， medium and light time on the  growth of non-bacterial tomato seeds were studied. The results showed that soaking for 16 h was beneficial to seed germination and seedling formation of tomato NO.4. The germination rate and seedling rate of tomato NO.4 treated with 10% and 15%NaClO were both high. The germination rate and seedling rate of tomato seeds inoculated to 1/2MS and1/2MS+0.3 mg·L-1IBA were 100%.The germination rate and seedling rate of tomato in 3 d dark culture and no dark culture were the same. Combined with economic benefits it was concluded that soaking the seeds for 16 h and treating them with 10% NaClO and inoculation to 1/2MS medium for dark culture of 3 d were conducive to the germination and seedling formation of tomato seeds for medium vegetable NO.4.

Key words： tomato; NaClO; sterile system; set up; darkness

番茄又稱西红柿，茄科番茄属，是一年生或多年生的草本植物[1]。由于其用途广、适应性强、营养丰富和产量高等特点[2-4]，尤其因番茄中含有丰富的番茄红素和胡萝卜素具有氧化功能和预防衰老和癌症等功能[5-7]，深受消费者的青睐。同时，番茄转基因技术的研究，也是其育种研究者的研究方向之一。建立一套完整高效的再生体系成为其转基因研究的前提，而建立再生体系，首先要建立高效的无菌系。目前，建立番茄无菌系的报道很多，但说法不一。同时，设施农业的迅速发展，提高了农民的经济效益。番茄种植目前以实生苗为主，容易受到干旱等危害，致使良种的抗性降低而影响其产量和品质。中蔬四号番茄，无限生长型，中熟，果实成熟前呈白绿色，成熟果粉红色，不裂果，单果重150～200 g，果面光滑，果肉厚，风味佳，商品性好，耐贮运。本研究旨以中蔬四号番茄种子为材料，建立番茄无菌系，为其再生体系的建立提供大量的材料，以及为工厂化番茄无菌苗育苗的研究作出可靠的参考依据。

1 材料和方法

1.1 材 料

中蔬四号番茄种子由河北省青县兴运蔬菜良种繁育中心提供。

1.2 方 法

1.2.1 不同种子浸泡时间 将中蔬四号番茄种子用无菌水清洗后，用无菌水分别浸泡0 h、16 h和24 h，然后在超净工作台内消毒。先用75%的酒精消毒1 min，然后10%的NaClO，20 min消毒，最后用无菌水冲洗3次，均接种至1/2MS（Murashige and Skoog medium）培养基。各处理每瓶4粒，重复5次。

1.2.2 不同NaClO浓度 番茄种子用无菌水清洗并用其浸泡16 h后，在超净工作台内进行种子消毒，75%酒精消毒1 min，分别用浓度为2.5%，5%，10%和15%的NaClO，消毒20 min，最后用无菌水冲洗3次，均接种至1/2MS培养基。各处理每瓶4粒，重复5次。

1.2.3 不同培养基 将番茄种子用无菌水清洗后，用无菌水分别浸泡16 h，然后在超净工作台内消毒。先用75%的酒精消毒1 min，然后10%的NaClO，20 min消毒，最后用无菌水冲洗3次，分别接种至1/2MS、1/2MS+0.3 mg·L-1IBA（Indo Van le-3-butyric acid）、MS和MS+0.3 mg·L-1IBA培养基。各处理每瓶4粒，重复5次。

1.2.4 不同光照时间 将番茄种子用无菌水清洗后，用无菌水分别浸泡16 h，然后在超净工作台内消毒。先用75%的酒精消毒1 min，然后10%的NaClO，20 min消毒，最后用无菌水冲洗3次，接种至1/2MS培养基。一个处理暗培养3 d，然后正常光照;另一個处理正常光照。各处理每瓶4粒，重复5次。正常光照为每天光照16 h。

1.3 统计分析

用EXCEL进行数据统计，计算萌发率和成苗率。

萌发率（%）=×100

成苗率（%）=×100

2 结果与分析

2.1 不同种子浸泡时间对无菌苗生长的影响

由表1可知，番茄种子接种7 d后的调查结果显示，浸泡16 h的番茄种子萌发率和成苗数，分别为100%和90%，均高于未浸泡的种子和浸泡24 h的种子。未浸泡的种子没有萌发和成苗，且浸泡24 h的种子萌发率和成苗率，分别为85%和80%，均低于浸泡16 h的种子。可见，浸泡16 h的番茄种子有利于提高其萌发率和成苗率。

2.2 不同NaClO浓度对无菌苗生长的影响

由表2可知，4种NaClO浓度处理的番茄种子接种至1/2MS培养基上，均未出现污染情况。10%和15%的NaClO处理的种子萌发率和成苗率均相同，分别为100%和90%。2.5%和5%的NaClO处理的种子萌发率和成苗率也均相同，分别为95%和85%，且均低于10%和15%的NaClO处理的种子萌发率和成苗率。可见，10%和15%的NaClO处理种子有利于其萌发和成苗。

2.3 不同培养基对无菌苗生长的影响

由表3可知，接种至1/2MS和1/2MS+0.3 mg·L-1

IBA的培养基上的番茄种子萌发率和成苗率高于接种至MS和MS+0.3 mg·L-1IBA的培养基上的番茄种子。接种至1/2MS和1/2MS+0.3 mg·L-1IBA的培养基上的番茄种子萌发率和成苗率，均为100%。接种至MS和MS+0.3 mg·L-1IBA的培养基上的番茄种子萌发率和成苗率，均为90%。

2.4 不同光照时间对无菌苗生长的影响

表4可以看出，暗培养3 d和不暗培养的番茄种子萌发率和成苗率相同，均为90%，无差异。

3 结论与讨论

番茄育苗，种子都需要浸泡，促使其露白，提高其成苗率。浸泡的种子不仅成苗率高，而且出苗整齐。赖呈纯等[8]认为‘农科180番茄种子浸泡10～15 h后，可以获得整齐的无菌苗，未浸泡的番茄种子，出苗的整齐度差。本试验结果表明，浸泡16 h的番茄种子有利于提高其萌发率和成苗率。

适宜的NaClO浓度可以彻底对番茄种子进行消毒。NaClO浓度过低，不能有效的种子消毒，污染率高，NaClO浓度过高，虽然可以有效的做到种子消毒，但是有可能伤害种子，获得畸形苗，影响其萌发和成苗，不能大量获得正常的番茄无菌苗。赖呈纯等[8]认为10%的NaClO，消毒20 min，可以获得整齐的无菌苗。同时，番茄研究者[9-13]也认为NaClO和HgCl2相互配合对其进行消毒效果最佳。本试验结果表明，10%和15%的NaClO处理种子有利于其萌发和成苗。工厂规模化育苗，考虑成本问题，认为10%的NaClO处理种子有利于其萌发和成苗。

不同培养基对番茄种子萌发和成苗也有一定影响。种子中有激素，适宜的浓度激素有利于幼苗生长。本试验结果表明，1/2MS和1/2MS+0.3 mg·L-1IBA的培养基上的番茄种子萌发率和成苗率均为100%，可见番茄无菌苗的生长，不添加激素也可以。因此认为1/2MS培养基最适宜番茄种子萌发和成苗。

消毒后并接至培养基的种子，未萌发之前，光照不是必要条件。本试验结果表明，暗培养3 d和不暗培养的番茄种子，萌发率和成苗率都相同。考虑成本问题，暗培养3 d适宜番茄种子的萌发和成苗。

一套经济且实用的番茄无菌系，可以为其转基因研究和工厂规模化种苗生产提供大量整齐的番茄苗材料。综合经济效益方面考虑，本试验认为，浸泡16 h的种子，用10%的NaClO处理中蔬四号番茄种子，接种至1/2MS培养基上，暗培养3 d，有利于中蔬四号番茄种子的萌发和成苗。

参考文献：

[1]胡小荣， 陶梅， 周红立.番茄种质资源遗传多样性研究进展[J]. 现代农业科技， 2008， （5）： 6-8.

[2]唐柳， 陈秀为.番茄制品及番茄汁发酵技术的研究进展[J].保鲜与加工， 2003，4（1）： 15-16.

[3]杜志坚，于新.番茄籽营养成分的实验分析[J].广州大学学报： 自然科学版， 2005，4（1）： 46-48.

[4]蔡健， 王薇， 宋华.番茄的营养保健作用及保藏技术[J].食品研究与开发， 2005， 26（3）： 137-138.

[5]AGARWAL S，RAO A V.Tomato lycopene and its role in human health and chronic diseases[J].Canadian Medical Association Journal， 2000， 163（6）： 739-744.

[6]杨曙辉，宋天庆，欧阳作富，等.关于我国设施农业可持续发展问题的战略研究[J].农业科技管理， 2011， 30（5）： 1-5.

[7]张慧英，马琴，黄格， 等.基于番茄‘208的离体培养技术研究[J]. 北方园艺， 2010， （6）： 168-169.

[8]赖呈纯，黄贤贵，范丽华，等.‘农科180番茄种苗组织培养规模化繁育技术研究[J].福建农业学报， 2015， 30（2）： 157-162.

[9]赖呈纯，潘红，范丽华，等.‘夏日番茄侧芽离体培养快繁技术[J]. 中国农学通报， 2016， 32（34）： 49-54.

[10]吴志刚，宋明，王志敏，等. 番茄组织培养中无菌苗培养条件的优化[J]. 中国农学通报，2006， 22（4）： 335-337.

[11]曲雪艳，周庆红.樱桃番茄的组织培养与离体快繁技术研究[J].江西农业大学学报， 2006， 28（6）： 962-964.

[12]徐宏英.三种消毒剂对番茄种子萌发及幼苗生长的影响[J]. 河南科学， 1999， 17： 113-115.

[13]赖呈纯，潘红，孙小彦，等.樱桃番茄‘秋香组织培养快繁技术研究[J]. 福建农业学报， 2016， 31（1）： 22-26.