浅析快速检测技术在微生物菌落检测中的应用与发展研究

莫冬松

（灵山县疾病预防控制中心，广西 钦州 535400）

1 微生物菌落快速检测的现状

在当前的食品种类和各种食品添加剂发展和应用中，可能会产生微生物菌落造成的致病问题，这种现象也日益増多，食品安全问题再次被摆放到了不可忽视的高度，也逐渐成为人们关注的焦点之一，不合格的微生物菌落随食品进入人体后，根据WHO统计，会给生命健康带来很严重的负担，全球每年有300万～1000万件类似的伤亡事件，微生物菌群主要引起机体的慢性损伤，食源性疾病死亡案例已经成为当代社会发展的心结，但是这种损伤往往是不可逆的，毁灭性的。发达国家每年出现食源性疾病的比例逐年攀升，甚至与正常的人口互相分割，人数占总人数的1/3，而在医疗卫生技术更差一些的国家和地区更为严重，大部分发展中国家都高达1/2。这突显出了微生物菌落检测技术研究的重要意义，进行食品微生物检测十分重要。

2 快速检测的重要性

随着食品行业的快速发展，在食品进入人体前进行标准化的检测是必须的，首先应立足于控制污染源，整顿食品企业的添加剂等应用，从而减少致病微生物分子的含量，切实执行有关食品安全保护法规，同时根据《食品安全法》的规定，防止微生物菌落造成的食品安全质量下降等情况的发生。对于食品中微生物菌落这方面的检测需要进一步加强，同时增强相关领域的监察与管控，扩大和加强对食品安全的监控，因而研究食品中微生物菌落快速检测的常用技术，有利于更好的保障食品安全质量，提高食品中微生物菌落检测技术水平，有利于从人的生命体之外进行健康防护，减少微生物菌落致病的可能。

3 常用的微生物菌落快速检测技术

3.1 滤膜法

滤膜法常用于进行快速检测，但主要的优点和缺点都比较明显，用于可过滤样品的微生物检测。这种方法有一个非常受欢迎的优势，就是灵敏度增大，可以呈现出较为清晰明了的检测结果，菌落无扩散情况，便于计数。虽然由于仪器体积小，价格低，而较受欢迎，但也存在缺点，就是在基本的检测设备之外，通常需要额外的支出购买真空泵，同时为了保证检测的顺利进行以及结果呈现，多联支架及一次性滤膜也要有充足的备用。在这方面的额外支出成本还算其次，如果抽滤过程空气洁净度不够，才是这个检测方法最大的问题，一旦失误就有可能造成二次污染，这其实对于很多食品的快速检测来说是不能接受的，尤其是对菌数要求特别严格的情况下，在实际生产生活中，确实有很多的产品不能使用这样的检测方式，常见的就有如啤酒、澄清果汁、桶装饮用水这类。称取10 g固体样品置于盛有90 mL无菌生理盐水的无菌锥形瓶中，在旋转式摇床上200 r/min充分振荡30 min，制成1:10的样品均液，即10-1稀释液。用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品均液1 mL（吸取前需要摇匀1:10稀释液），缓慢加入盛有9 mL无菌生理盐水的无菌试管中，用漩涡振荡器振荡，混合均匀，制成1:100的样品稀释均液。制备10倍系列样品稀释液，每递增稀释一次，换用一次1 mL无菌吸管或吸头。选择3～4个适宜稀释度的样品均液（比如10-6，10-7，10-8，10-9稀释液）。

3.2 皿膜法——以纸片法为代表

相对来说这是更加具备便捷性的方法，纸片法是目前被广泛接受的方法，原理要依靠具有特效显色反应的生物染色剂来实现，国标餐具大肠菌群采用的就是这种方法，整体上来说更能满足“快捷检测”的具体要求，纸片法通常通过浸渍附载到试纸上，同样也是观察化学反应产生的变化，优点是无需制备培养基，通过研究获得试纸与微生物之间的转换和较为明显的调整，携带非常方便，能够发现两者的最佳反应条件。经试验证明，这种方法在非漫延菌落计数时较为方便。可以较好的显示出该试纸对微生物具有的选择性，从而利用这一现象发现微生物菌落的存在。但是缺点是不能节省检测时间，只是对检测的简化，还有很多需要做的准备工作，检测成本相对应的问题，甚至于具体的前处理的方法未见报道，尤其金黄色葡萄球菌纸片存在明显的问题，最突出的表现就是相对来说，其取样量太低了。

3.3 电化学基因传感技术

微生物菌群分子与探针反应，易携带且不破坏样品，其原理是利用化学元素之间的关系，致病微生物特征基因与核算反应导致光、电信号的变化，从而明确具体食品中的某些特定靶生物分子，使用电化学核酸探针就能够简单、快捷、方便的实现结果观测，同时可以捕捉存在的特定基因进行检测。所以整个检测的过程和具体的操作都比较容易实现，检测方法长期使用技术成熟，在当前的多个国家和地区的食品中微生物菌群快速检测方面，一直被作为快速检测的首选方法。同样的这种检测也存在灵敏高、成本低、能耗少等非常实用的特点。

3.4 免疫荧光技术

通过该方法检测时，选择相应的抗体检测抗原或抗原后，通过荧光素对其标记，形成特定的荧光抗体，对该抗体进一步检测后，确定出微生物菌落情况。根据检测原理的不同，能够将其划分成两种类型，一种为直接法，即在样品内，直接添加适量的荧光抗体，之后，通过洗涤处理后，利用显微镜进行观察。另一种为间接法，样品适当处理后，添加相应的细菌特异性抗体，静止并洗涤后，放入荧光抗体，最后，利用显微镜进行观察，以确定微生物菌落情况。对于这种方法来说，操作非常简单，且能够直观显示出群落的位置，具有较高的检测效果。对于荧光素来说，主要有四种，每种荧光素具有不同的特点，具体如表1所示。

表1 主要荧光素及其特点

3.5 放射检测技术

细菌增殖时，会排放出一定的CO2，通过对CO2的检测，即可确定出微生物菌落情况。主要流程为：在碳水化合物内，注入适量的14C，以形成实验底物。之后，将底物添加到待测样品当中，通过对底物内14CO2含量的检测，即可推算出菌落情况。生长时，细菌会吸收底物中的14C，并排除14CO2，对于14CO2来说，具有一定的放射性，之后，将底物放入到专业仪器中，即可测出14CO2的浓度，进而得出最终的检测结果。这一方法具有很多的优势，如操作相对较为简单，能够快速得到结果；由于应用了先进的检测设备，因而能够得到较为精准的检测结果，且可以有设备自动完成，防止人员参与而对检测结果造成干扰等。

4 总 结

食品检测十分复杂且重要，尤其是在针对微生物菌落的相关检测中，食品检测工作包括很多方面，最主要的就是要以便捷、快速、低成本为标准，而快速检测技术是食品检测中常用的内容，因为基本可以满足食品微生物菌落的检测最重要部分的要求，其检测的质量和水平将直接影响这批样品的市场投放结果，以及对人民群众安全的保障，食品整体的质量必须严格把关，从某种意义上来说，微生物菌落的快速检测，密切关系看人们的生命安全。