小儿重症肌无力血清乙酰胆碱受体抗体的测定及其临床意义

王丽敏，谭 慧

（贵阳市妇幼保健院，贵州 贵阳 550002）

重症肌无力（MG）是一种由乙酰胆碱受体抗体介导、细胞免疫依赖、补体参与，累及神经肌肉接头突触后膜，引起神经肌肉传递障碍，出现骨骼肌收缩无力的获得性自身免疫性疾病，其主要发生机制是与乙酰胆碱的抗体含量有关，在相关文献中对患儿的血清AcbR-Ab诊断MG具有一定的特异性诊断价值[1]。而在上世纪有关学者对MG患者的胸腺异常进行了研究，发现血清中的一些成分会对神经肌肉组织造成影响，致使血清中补体的水平降低，可以说明MG是一种免疫性疾病，但其发病机制仍是未知，但相关推断说明此病可能是由多基因调控与多种机制参与调节的复杂型疾病[2]。本次调查针对ELISA检测法对44例患儿的血清中AchR-Ab进行检测，对其临床意义展开探讨，现主要内容如下：

1 资料与方法

1.1 临床资料

遴选2015年5月—2020年4月44例我院神经科病房收入的MG患儿（≤18周岁），根据症状、体征及实验室检查结果，以新斯的明试验和乙酰胆碱受体抗体为主。被确诊为MG，其中男性患儿20例，女性患儿24例，年龄平均数为（4.2±1.11）岁（1岁2月～13岁）。已经确诊的患者经肾上腺皮质激素与溴化吡啶斯的明治疗后，2个月后对治疗患者或者家属进行电话随访，确认临床症状消失后，无异常表现，患者康复；对照组为健康体检者21例与非MG患者16例，年龄平均数为（9.12±0.97）岁（3～6岁）。根据患者Osseman进行分级判定：其中Ⅱa型43例、Ⅱb型1例，根据病程对其进行调查。

1.2 血清中AchR-Ab的检测

利用ELISA检测法、AchR-Ab试剂（此种试剂主要涵盖标准阳性试剂与标准阴性），主要内容为：①包被糖原，利用纯化糖原0.1 ml/孔，表面包被聚苯乙烯微量反应扳凹孔后，于4℃条件下保存一夜，以PH7.4，0.01 mol/L的PBST溶液进行反复洗涤，共洗涤3次，每次持续3分钟以上。②封板，以5%的小牛血清以及PH值为7.4的PBSTQ ml/孔，在37℃下予以温浴保存。③将待测血清稀释为Q1m1/孔，所有血清样本可设置复孔，而每块板均可以阳性或者阴性进行对照，37℃下予以温育反应1.5 h，而PBSTQ的洗涤环节如上。④加酶标抗体，可用稀释后的HRP-鼠抗体IgGMcAbQ1m1/孔，于37℃下对其进行温育反应15分钟，以PBSTQ的洗涤环节，如上。⑤每孔位滴入5mol/LH2SO4予以滴止反应。⑥使用酶联仪器在吸光度为490 nm处进行吸光度检验。

1.3 诊断标准

①将酶标仪器与打印机打开，在恒温下将样本预热5 min。②将酶标仪的波长调试为492 nm，将其与单孔空白A1进行对照，反应板置于酶标仪后，待空白孔完成参数调零经后，将各部位的OD值进行测量。③当阳性表现的血清中的OD值高于阴性质控血清值2.5后，此时可以说明试剂盒的反应成功且实验操作为正确，反之应当反复进行实验论证结果的可行性。④当MG患者血清中的OD值与阴性质控血清中的OD值作比后，说明P/N的比值大于2.5表现为阳性，而P/N的比值小于等于2.5这说明为阴性表现[3]。

2 结 果

将ELISA检测法对44例MG患者经治疗前后的血清比较，其中AchR-Ab的确切阳性率表现为50.00%（22/44），1例可疑阳性2.27%（1/44），未见结果为18.18%（8/44）。

按年龄对MG患者予以分组，其中年龄在3岁以上的患者22例，阳性率为68.18%（15/22）；3岁以下的患者22例，阳性率表现为36.36%（8/22）。经卡方检验后，2组数据比较具有明显差异（P＜0.05），见表1。对比MG组与对照组中血清AchR-Ab的变化状况，其中健康组成员阳性率为0%，非MG患者组阳性率为0%，MG组为63.88%，其中组间比较差异较为明显，可比较，P＜0.01。见表2。在MG患者组、非MG患者组、对照组中健康组成员P/N评分低于非MG患者同时低于MG组（P＜0.01），比较差异明显可比较，而阳性率的比较中健康组等于非MG组，但低于MG组。

表1 MC患者的血清中AchR-Ab在年龄因素影响下的变化

表2 3组患者血清中AchR-Ab对比

3 讨 论

重症肌无力（MG）在临床上可侵犯到神经-肌肉接头处乙酰胆碱受体（AchR-Ab），属于一种自身免疫性缺陷疾病。AchR-Ab是重症肌无力的重要致病因素[4]。该抗体可通过补体对细胞进行破坏，而加快AchR-Ab的降解，而对AchR-Ab产生损害作用，对乙酰胆碱的传递造成阻碍，诱发小儿出现重症肌无力。近些年来临床实验室通过对MG患儿与健康患儿的乙酰胆碱受体的分布状况进行对比，在大量研究工作的落实下，结果说明MG患者的血清AchR-Ab的滴度表现在逐年递增，在本次调查中的44例小儿患者中，乙酰胆碱受体抗体的阳性率表现为50%，与相关调查相符[5]。健康献血人员与非MG患者的血清学检测中并未出现一例阳性征表现。而MG组与对照组的比较中，差异较大，此项结果说明了乙酰胆碱对于MG疾病的抗体成分具有较高的敏感性，而乙酰胆碱受体抗体是MG疾病诊断中较为重要的特异性指标。本文作者认为血清中乙酰胆碱的测定对于临床中疑似MG的病理表现具有较好的鉴别意义。

现阶段对于ELISA鉴别MG患者中血清AchR-Ab诊断具有较高的灵敏度与特异性，具有操作简便、经济实惠以及无创等优势，在临床检测中具备较高的价值，是目前在免疫学检测中较为常用的技术。ELISA检测主要通过抗原、抗体的特异性结合将其与待检物形成复合结构的混合物，根据底物中的显色变化，即OD值对结果进行判断。抗原在免疫学中定义为可与抗体进行结合的免疫球蛋白具有较强的特异性。而免疫测定有关的免疫担保主要包含IgG、IgM与IgA。机体出现微生物感染迹象后，进行免疫反应时首先产生IgM抗体，然后产生IgG抗体。在一段时间后，IgM抗体逐渐减少并消失，但IgG抗体可长期保存，并在疾病痊愈后仍可持续存在数年。抗原抗体结合的原理是通过抗原中的抗原决定簇和抗体的结合受体在化学结构与构型特点上进行互补，而抗原抗体具有较高的特异性表现。抗原抗体反应可将此类免疫测定通过特异的血清学检测方法进行分离，用于观察与鉴别。

综上所述，MG患儿经治疗后体内血清乙酰胆碱的变化水平较高，结果说明了治疗后的患儿血清抗体水平得到了降低，这表明激素与溴化吡啶斯的明对于MG患者的发病具有较好的治疗作用，而相关检测患儿的血清中乙酰胆碱的血清分布水平对于MG疗效同样具有一定客观参考意义。