假蒟化学成分的研究

李 清，瞿发林*，谭兴起，周伟杰，楼欣誉

（1.中国人民解放军联勤保障部队第904 医院，江苏常州 213003； 2.南京中医药大学翰林学院，江苏泰州 225300； 3.常州卫生高等职业技术学校，江苏常州 213003）

假蒟Piper sarmentosumRoxb.为胡椒科胡椒属多年生草本植物，又名蛤蒟、假蒌、蛤蒌、荜拔子，广泛分布于我国广西、广东、云南、海南等省，资源非常丰富，全年可采收，其味辛，性温，归胃、大肠经，具有祛风散寒、行气止痛、活络、消肿等功效，常用于风寒咳嗽、脘腹胀满、泄泻痢疾、产后脚肿、跌打损伤等［1］，具有多种药理活性，如抗动脉粥样硬化［2］、抗骨质疏松［3］、抗氧化［4］、抗菌［5］、杀虫［6］等。课题组前期发现，假蒟提取物具有显著的抗抑郁作用，其乙酸乙酯萃取物是活性部位［7］，为进一步研究其物质基础，本实验从中分离得到8 个化合物，其中5 个为生物碱类，1 个为木脂素类，1 个为甾醇类，1 个为萘甲酸类，5、7～8 为首次从该植物中发现。

1 材料

1.1 药材 假蒟于2016 年4 月采自广西贵港，经第904 医院瞿发林主任药师鉴定为胡椒科假蒟Piper sarmentosumRoxb.的干燥茎、叶，凭证标本（标本号2016-PS-0403） 保存于第904 医院制剂中心。

1.2 仪器 XS105 电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；RE-52C 旋转蒸发仪、BSZ-100 电子钟控自动部分收集器 （上海青浦沪西仪器厂）；SHZ-D（Ⅲ） 循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司）；ZF-20D 暗箱式紫外分析仪（巩义市英峪予华仪器厂）；DHG-9240 型电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科技有限公司）；KH2200DB 超声波清洗器（昆山木创超声仪器有限公司）；电热恒温水浴锅（上海医疗器械五厂）；APEX7.0 Tesla 型超高分辨四极杆串联傅立叶变换质谱仪、DRX-600型核磁共振波谱仪（德国Bruker 公司）。

1.3 试剂 甲醇、石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮（分析纯或色谱纯，江苏彤晟化学试剂有限公司）；乙醇（山东利尔康医疗科技股份有限公司）；纯化水（实验室自制）。

2 提取与分离

取假蒟100 kg，干燥粉碎后过40 目筛。用12倍体积80%乙醇加热回流提取3 次，每次1 h，收集提取液于旋转蒸发仪中减压干燥，得浸膏15.6 kg，取部分用2 L 水配成混悬液，再用等体积石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，收集乙酸乙酯萃取液，浓缩干燥得相应部位（153 g）。

取上述部位100 g，用100～200 目硅胶拌样后进行硅胶柱层析，二氯甲烷-甲醇（50∶1～0∶1）梯度洗脱，TLC 检查后合并得12 个馏分（Fr.A～L）。Fr.A 通过硅胶柱层析，二氯甲烷-甲醇（80∶1～1∶1） 洗脱，得到Fr.A1和Fr.A2，Fr.A1通过厚制备硅胶板纯化，得到化合物1 （4.4 mg）。Fr.B 经硅胶柱，用二氯甲烷-甲醇（50∶1～1∶1）梯度洗脱，得Fr.B1、Fr.B2、Fr.B3，Fr.B2通过硅胶柱，用石油醚-乙酸乙酯（10∶1～1∶1） 洗脱，再经Sephadex LH-20 层析（二氯甲烷-甲醇＝1∶1），得到化合物2 （3.9 mg）。Fr.C 通过硅胶柱，用二氯甲烷-甲醇（60∶1～1∶1） 梯度洗脱，得Fr.C1、Fr.C2，Fr.C1经Sephadex LH-20 层析（二氯甲烷-甲醇＝1∶1），得到化合物3 （10.2 mg）。Fr.D 经硅胶柱层析，二氯甲烷-甲醇（80∶1～10∶1） 梯度洗脱，得Fr.D1、Fr.D2、Fr.D3，Fr.D2、Fr.D3再经Sephadex LH-20 层析（二氯甲烷-甲醇＝1∶1），得到化合物4 （7.4 mg）、5 （9.1 mg）。Fr.E 经硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯（10∶1～0∶1） 梯度洗脱，得到Fr.E1、Fr.E2，Fr.E2经硅胶柱层析，二氯甲烷-甲醇（20∶1～2∶1） 洗脱，再经Sephadex LH-20 层析（二氯甲烷-甲醇＝1∶1），最后通过厚制备硅胶板纯化，得到化合物6（39.4 mg）。Fr.F 经硅胶柱层析，通过二氯甲烷-甲醇（50∶ 1～1∶1） 梯度洗脱，得到Fr.F1、Fr.F2，Fr.F1经硅胶柱层析，二氯甲烷-甲醇（30∶1～1∶1） 洗脱，再经Sephadex LH-20 （二氯甲烷-甲醇＝1∶1） 纯化，得到化合物7 （6 mg）。Fr.G 经Sephadex LH-20 层析 （二氯甲烷-甲醇＝1∶1），得到Fr.G1、Fr.G2，Fr.G2再经厚制备硅胶板，得到化合物8 （6.6 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：无色针状晶体，HR-ESI-MSm／z：354 ［M］＋，分子式C20H18O6。1H-NMR （600 MHz，CDCl3）δ：6.86 （2H，d，J＝1.3 Hz，H-2′，2″），6.81 （2H，dd，J＝7.9，1.5 Hz，H-6′，6″），6.79 （2H，d，J＝ 7.9 Hz，H-5′，5″），5.96（4H，s，-OCH2O×2），4.72 （2H，d，J＝4.5 Hz，H-2β，6β），4.24 （2H，dd，J＝9.4，6.8 Hz，H-4α，8α），3.88 （2H，dd，J＝9.4，3.7 Hz，H-4β，8β），3.06 （2H，m，H-1α，5α）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：148.0 （C-3′，3″），147.1（C-4′，4″），135.0 （C-1′，1″），119.3 （C-6′，6″），108.2 （C-5′，5″），106.5 （C-2′，2″），101.1 （-OCH2O），85.8 （C-2，6），71.7 （C-4，8），54.3 （C-1，5）。以上数据与文献［8］基本一致，故鉴定为sesamin。

化合物2：无色针状晶体，HR-ESI-MSm／z：224 ［M ＋H］＋，分子式C14H25NO。1H-NMR （600 MHz，CDCl3）δ：7.10 （1H，dd，J＝15.1，10.8 Hz，H-2），6.19 （1H，dd，J＝15.3，10.8 Hz，H-5），6.08 （1H，dd，J＝14.7，7.0 Hz，H-5），5.94 （1H，d，J＝15.1 Hz，H-3），3.05 （2H，d，H-1′），2.17 （2H，dd，J＝7.3，7.9 Hz，H-6），1.79 （2H，dt，J＝13.5，6.7 Hz，H-7），1.43（1H，m，H-2′），1.31 （2H，m，H-8），1.31（2H，m，H-9），0.91 （6H，d，H-3′，4′），0.89（3H，s，H-10）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：169.2 （C-1），143.9 （C-4），142.1 （C-2），129.8 （C-5），123.1 （C-3），48.0 （C-1′），33.9（C-6），32.5 （C-8），29.7 （C-7），29.7 （C-2′），23.5 （C-9），20.5 （C-3′ and C-5′），14.3 （C-10）。以上数据与文献［9］基本一致，故鉴定为pellitorine。

化合物3：白色粉末，HR-ESI-MSm／z：225［M＋H］＋，分子式C10H12N2O4。1H-NMR （600 MHz，CDCl3）δ：10.32 （1H，s，H-CN），7.33 （1H，s，H-6），6.50 （1H，s，H-3），3.98 （3H，s，H-4-OCH3），3.93 （3H，s，H-2-OCH3），3.88（3H，s，H-5-OCH3）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：188.0 （-CHN-），158.6 （C-2），155.8 （C-4），143.6 （C-5），117.4 （C-1），109.1 （C-6），96.0（C-3），56.3 （4-OCH3），56.2 （2-OCH3），56.2（5-OCH3）。以上数据与文献［10］基本一致，故鉴定为1-nitrosoimino-2，4，5-trimethoxybenzene。

化合物4：淡黄色固体，HR-ESI-MSm／z：200［M＋H］＋，分子式C13H13NO。1H-NMR （600 MHz，CDCl3）δ：7.33 （2H，m，H-5，9），7.33 （3H，m，H-6，H-7，9），7.24 （2H，m，H-1′，4′），6.30 （2H，t，J＝2.6 Hz，H-2′，3′），3.16 （2H，t，H-2），3.12 （2H，t，H-3）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ：169.7 （C-1），140.2 （C-4），128.6 （C-5，9），128.4 （C-6，8），126.5 （C-7），118.9 （C-1′，4′），113.1 （C-2′，3′），36.4（C-3），30.4 （C-2）。以上数据与文献［11］基本一致，故鉴定为N-（3-phenylpropanoyl） pyrrole。

化合物5：黄色晶体，HR-ESI-MSm／z：230［M＋H］＋，分子式C14H15NO2。1H-NMR （600 MHz，CDCl3）δ：7.32 （2H，brs，H-1″，4″），7.18（2H，d，H-2′，6′），6.87 （2H，d，H-3′，5′），6.30 （2H，t，H-2″，3″），3.81 （3H，s，-OCH3）3.13 （2H，m，H-2），3.06 （2H，m，H-3）；13CNMR （150 MHz，CDCl3）δ：169.8 （C-1），158.2（C-4′），132.2（C-1′），129.4（C-2′，6′），118.9（C-1″，4″），114.1 （C-3′，5′），113.1 （C-2″，3″），55.3 （-OCH3），36.7 （C-2），29.5 （C-3）。以上数据与文献［12］基本一致，故鉴定为3-（4′-methoxyphenyl） propanoyl pyrrole。

化合物6：白色结晶状固体，HR-ESI-MSm／z：414 ［M］＋，分子式C29H50O。1H-NMR （600 MHz，CDCl3）δ：5.37 （1H，m，H-6），3.53 （1H，m，H-3），1.02 （3H，s，H-19），0.94 （3H，d，J＝6.4 Hz，H-21），0.84 （3H，d，J＝7.3 Hz，H-26），0.82 （3H，t，J＝6.8 Hz，H-29），0.80（3H，d，J＝6.8 Hz，H-27），0.68 （3H，s，H-18）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ：37.4 （C-1），31.8 （C-2），72.0 （C-3），42.4 （C-4），140.8 （C-5），121.9 （C-6），32.2 （C-7，8），50.3 （C-9），36.7 （C-10），21.1 （C-11），39.9（C-12），42.4 （C-13），56.9 （C-14），24.5 （C-15），28.4 （C-16），56.2 （C-17），12.0 （C-18），19.7 （C-19），36.3 （C-20），18.9 （C-21），34.1（C-22），26.2 （C-23），46.0 （C-24），29.2 （C-25），20.0 （C-26），19.2 （C-27），23.1 （C-28），12.0 （C-29）。以上数据与文献［13］基本一致，故鉴定为β-sitosterol。

化合物7：淡黄色粉末，HR-ESI-MSm／z：296［M＋H］＋，分子式C17H13NO4。1H-NMR （600 MHz，CDCl3）δ：10.90 （1H，s，H-N-OH ），9.25（1H，dd，J＝6.3 Hz，H-7），7.85 （1H，dd，J＝6.3 Hz，H-10），7.83 （1H，s，H-2），7.58（1H，m，H-8），7.58 （1H，m，H-9），7.09（1H，s，H-12），4.14 （3H，s，3-OCH3），4.09（3H，s，4-OCH3）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ：169.2 （C-15），154.5 （C-3），151.6 （C-4），134.7 （C-11），133.9 （C-13），129.0 （C-10），127.6 （C-9），127.6 （C-8），127.0 （C-6），126.0 （C-7），124.4 （C-14），121.1 （C-1），121.1 （C-5），109.6 （C-2），105.7 （C-12），60.4 （4-OCH3），56.9 （3-OCH3）。以上数据与文献［14］基本一致，故鉴定为piperumbellactam A。

化合物8：白色针状固体，HR-ESI-MSm／z：249［M＋H］＋，分子式C13H12O5。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：12.38 （1H，brs，-COOH ），9.78（1H，brs，-OH），7.36 （1H，dd，J＝8.5 Hz，H-2），7.35 （1H，s，H-6），7.12 （1H，s，H-9），6.75 （1H，dd，J＝8.5 Hz，H-3），3.72 （3H，s，C7-OCH3），3.72 （3H，s，C8-OCH3）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：167.6 （-COOH），151.5（C-4），147.8 （C-7），147.6 （C-8），140.6 （C-1），123.9 （C-2），122.0 （C-5），120.8 （C-10），115.4 （C-3），113.1 （C-9），107.3 （C-6），56.4（C7-OCH3），56.0 （C8-OCH3）。以上数据与文献［15］基本一致，故鉴定为6，7-dimethoxy-4-hydroxy-1-naphthoic acid。

4 讨论

胡椒属植物主要分布在热带地区，全世界范围内有2 000 余种，其中在我国有60 余种。近年来，有研究报道卡瓦胡椒［16］、大叶蒟［17］、光轴苎叶蒟［18］等该属植物，以及大叶蒟中大叶蒟素［19］、光轴苎叶蒟中N-（2′-羟基-乙基） -N-甲基-3，4-亚甲二氧基-苯基［20］等酰胺类生物碱成分具有抗抑郁作用。课题组前期证实，假蒟具有显著的抗抑郁作用，其活性部位是乙酸乙酯提取物［21］，在此基础上本实验从中分离得到8 个化合物，其中有4 个（2、4～5、7） 为酰胺类生物碱，该植物相关作用是否也与上述成分有关值得进一步研究。