色谱数据处理对药品检测结果的影响探讨

章满君 吕少风 蒋小英

（1.浙江医药股份有限公司新昌制药厂，浙江 新昌

312500；2.浙江昌海制药有限公司，浙江 绍兴312366；3.浙江医药股份有限公司昌海生物分公司，浙

江 绍兴 312300）

近年来，色谱法在药品研发、质量控制以及复杂成分的分离分析等领域得到较为广泛的应用[1～2]，已成为各国药典[3]中应用范围最广泛的检测技术之一。色谱分析法虽然在检测灵敏度、分离度、数据采集效率、数据自动化处理等各个方面都有发展，但是在色谱数据的处理方面始终未能有统一的技术规范，因此各企业在应用实践中也各有不同，数据处理规范管理程度良莠不齐。美国食品药品监督管理局(FDA)和美国药典(USP)均强调了色谱技术的重要性，并大大提高了其在验证方面的运用比重。

1 色谱数据处理不规范的原因分析

综合分析目前关于色谱数据处理方面的缺陷情况，主要的问题是：没有建立科学有效的规程、没有固定的积分参数或手动积分方式、选择性报告数据、操纵数据、没有审计追踪、数据未经授权的访问、修改或删除，即数据处理不规范。原因可从客观因素和主观因素两个方面来说。

1.1 客观因素

在法规方面，各国GMP 都有关于数据可靠性、准确性、追溯性等原则性要求，但是关于色谱数据处理方式或积分参数设置并没有相关的行业指南或者具体的指导原则，只能根据操作经验或者查阅相关文献作为参考。

在药政部门的监管方面，早年对色谱数据处理方面的关注程度相对较低，在实际的GMP检查中很少涉及，因此企业在内部管理上也大多不严格。近年来由于美国FDA在GMP检查中将数据可靠性方面的检查作为重点，因此许多企业在色谱数据处理和管理方面暴露出缺陷。

仪器硬件及软件方面，不同的色谱仪器厂家，不同的仪器型号，在数据采集和数据处理上也各不相同。在建立产品质量标准和方法时，不能统一色谱数据处理方法。

1.2 主观因素

企业重视程度不够。一些企业对数据规范处理的重视程度不够，或者有意利用其中的漏洞为企业创造利益。

迫于时间和经济压力。由于没有相应的法规和指导原则，所以大部分积分参数需要进行大量重复的实验进行摸索，而这不可避免地提高了企业的检测成本，降低了效益。因此一些企业迫于时间和经济压力，为降低检测成本而简化了摸索合适参数的过程。

缺乏监管。由于检测工作的专业性强，企业往往对实验室的日常工作缺乏监管，没有建立起很好的监督检查机制，检测结果的检查大多由分析人员执行，因此在监督有效性上就存在风险。

技术能力欠缺/培训不充分。有些企业对GMP/GLP的培训意识不强，不能从根本上理解GMP/GLP。对于员工培训不到位，敷衍了事。

个人职业素质欠缺。质量意识是一个企业对质量工作的认识和了解，包括企业的管理层到每一个员工。这对质量行为起着极其重要的影响和制约作用，也是企业生存和发展的思想基础。

2 色谱数据处理不规范的影响因素考察

2.1 积分参数对计算结果的影响

色谱工作站的积分过程主要由积分事件表中的斜率灵敏度、峰宽灵敏度、最小峰面积及最小峰高等参数来控制，其中斜率灵敏度和峰宽灵敏度影响色谱峰起止点的识别，最小峰面积及最小峰高影响色谱峰是否被分析。文章讨论不同积分参数对拖尾因子、分离度、信噪比及峰面积的影响。

斜率灵敏度应能确保灵敏度测试溶液最小峰能够成功积出，常设置为工作站中的初始默认值，即1.0；峰宽通常设置为不大于最窄色谱峰的半峰宽（溶剂峰除外），常用初始默认值0.04；有关物质、残留溶剂项下舍弃面积一般根据报告限最小峰面积的0.5 倍设置，含量项下舍弃面积一般根据对照溶液最小理论峰面积的0.5 倍设置；舍弃峰高一般设置为最小舍弃峰面积的0.5倍以下，或设为0。

2.1.1 不同积分参数对拖尾因子的影响

拖尾因子是用于评价峰形对称性的一个参数。实验结果表明，斜率灵敏度、峰宽灵敏度及舍弃峰面积在常用参数设置原则上下波动不大时，对拖尾因子不会有影响。但当斜率灵敏度过小或者过大时，均会使拖尾因子稍减小；而峰宽灵敏度的过大时会使拖尾因子稍偏大，舍弃峰面积则对拖尾因子无影响。

2.1.2 不同积分参数对分离度的影响

分离度又称分辨率，判断分离物质在色谱柱中的分离情况，通常用R=1.5 作为相邻两组分已完全分离的标志。实验结果表明，斜率灵敏度、峰宽灵敏度及舍弃峰面积的设置对分离度均无影响。

2.1.3 不同积分参数对信噪比的影响

信噪比，评价色谱系统检测微量物质的能力。配制低浓度的样品溶液，改变噪声选取范围、位置及积分参数。实验结果表明，斜率灵敏度、峰宽灵敏度及舍弃峰面积的设置对信噪比的大小均无影响。而噪声的选取范围及选取位置却对目标峰的信噪比有很大影响，当所选取的时间段里基线波动较大时，噪声变大，信噪比变小，人为主观因素影响较大。

2.1.4 不同积分参数对峰面积的影响

选择不同的积分参数对峰面积有较大影响。实验结果表明，当斜率灵敏度选取较大值时，会导致一些小峰不被积出，使得样品杂质峰减少；而当斜率灵敏度选取较小值时，基线上的一些小波动容易被积出，导致样品杂质峰增加，并且使得一些峰型较差的色谱峰峰面积变大。当峰宽灵敏度选取较大值时，会使杂质峰减少，个别色谱峰的峰面积也会有较大变化。舍弃峰面积的改动对色谱峰面积不会有影响，只是当舍弃峰面积较小时，一些小峰会被积出。

2.2 不同校正参数对定量计算结果的影响

化学工作站中主要有六种定量方法，分别为百分比法、归一化法、外标法、内标法、外标百分比法、内标百分比法。

外标法的计算需要通过建立校正表，设置校正参数，用校准曲线计算未知样品中的化合物含量，但是校正参数的设置又包括两种情况：强制过原点与不过原点，不同校正参数的设置对样品组分含量或有影响。通常情况下，多浓度建立校正表或高低浓度建立校正表，应当选择不过原点校正；在单一浓度建校正表时应当选择过原点校正。同时，校正方法的确定，还需结合考虑方法验证，及其该产品检测时方法中是否有其他特殊规定。

2.3 手动积分对定量计算结果的影响

理想条件下，在通过系统适用性试验后，对照品、供试品的色谱应一直以相同的方法进行积分。但是实际情况并非如此，尤其是接近定量限、检测限，有些峰自动积不上，需要手动积分。手动积分虽然会受主观因素的影响，在科学分析色谱结果时也是需要的。如当出现异常峰，分离度不好的峰时，手动强制分割；当进行手动积分时，特别是手动划定基线进行积分时，积分结果容易受到分析员主观因素的影响。企业应规定在何种情况下如何进行手动积分。

3 结语

鉴于色谱数据处理对药品检验结果的重要影响，笔者建议企业采取以下措施来提高数据的准确性和有效性，进而有效的规避数据完整性问题的发生。

建立规范的操作规程。良好的文件是质量保证系统的基本要素，结合岗位制定相应操作规范，使检测工作有据可依、有典可查，提高工作效率和准确度。

规范方法开发及验证，通过验证获得准确的色谱数据处理方法，规范积分参数设置，控制随意手动积分，定期对方法进行评估与确认，以保证分析方法的针对性和准确性，从源头上解决数据的不规范处理。

标准化工作流程及定期内部审核机制能够有效的规范工作人员的工作程序，减少出错几率。

加强人员培训、提高技术能力。掌握色谱工作站的原理，理解不同色谱数据处理手段（参数设置等）对结果的影响。将产品的质量评价风险降到最低。

建立良好的企业文化。在企业经营管理中，良好的企业文化发挥的作用不容小觑，它不仅可以在“新产品研发、产品的升级与维护、新制度的执行与考评”等方面发挥不可估量的推进作用，更能有力的提高企业人员的执行力与责任心，并进一步建立良好的质量文化，为药企创造一笔不可估量的宝贵财富。