五味子提取物治疗对卵巢骨质疏松大鼠骨代谢和骨强度的影响

郭军鹏 张兆鹏 于兰英 刘芳 刘宏岩

(长春中医药大学，吉林 长春 130117)

随着人口老龄化，骨质疏松症已成为常见病、多发病，世界卫生组织(WHO)已将其列入三大老年病之一。传统中医学理论认为肾虚是骨质疏松发生的根本病因病机，因此治疗以补肾健骨为基本原则〔1，2〕。五味子为收涩类中药的典型代表，列于《神农本草经》上品中药，具有滋补强壮之功效。传统应用五味子的主要方法是水煎，其成分以多糖类居多；而五味子醇部位提取物很少得到应用〔3～5〕。本文应用去卵巢方法复制绝经期后骨质疏松病理模型，分别应用五味子水提物和醇提物予以治疗，以血清骨形态发生蛋白(BMP)-7、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)和骨强度为指标，探讨五味子不同提取物防治绝经后骨质疏松的疗效。

1 材料与方法

1.1动物分组及给药 雌性SD大鼠50只，体重(200±20)g，购自吉林大学基础医学实验动物中心。适应性喂养3 d后，随机分为对照组、模型组、阿仑膦酸钠组、五味子水提物组和醇提物组，每组10只。病理模型制备方法：大鼠经腹腔注射40 mg/kg戊巴比妥钠溶液麻醉，取俯卧位固定于手术台上，剃毛器在背部两侧剃毛备皮，碘伏消毒，由脊柱旁1～2 cm、肋下1 cm处打开腹腔，找到埋于白色脂肪中的卵巢(黄红色)，拉出、结扎，行卵巢切除术，还回腹腔并缝合肌肉和皮肤，同法摘除另一侧卵巢〔6〕。对照组大鼠做假手术，即打开腹腔在卵巢旁取等大体积的脂肪组织切除。术后给予生理盐水配制的青霉素溶液(1万U/ml)，连续饮用3 d，预防感染。用成人常规用药量按人鼠体重系数换算大鼠等效剂量，阿仑膦酸钠1.428 mg/(kg·d)；五味子水提物组和醇提物组分别给予水提物和醇提物1.5 g生药/(kg·d)(相当于人用9 g/d)，对照组和模型组灌胃给予生理盐水1 ml/d，连续给药3个月。

1.2主要试剂及仪器 阿伦膦酸钠：购自MSDPHARMA(SINGAPORE)PTE LTD.Savio IndustrialS.R.L(Italy)(批号：M033342)。五味子提取物制备方法：8倍体积水，室温浸泡12 h，过滤再次浸泡12 h，合并滤液，浓缩得五味子水提物(0.375 g生药/ml)；五味子水提物残渣70%酒精浸泡12 h，过滤再次浸泡12 h，合并滤液，浓缩得五味子醇提物(0.375 g生药/ml)。BMP-7、TRACP试剂盒：购自北京华英生物技术研究所。骨骼强度测定仪(YLS-16A型)：济南益延科技发展有限公司。

1.3实验方法

1.3.1BMP-7、TRACP测定 取材前12 h禁食不禁水。各组大鼠麻醉状态下打开腹腔，腹主动脉取血，室温静置30 min后，3 000 r/min离心15 min，取上清，-20℃保存待测。按试剂盒说明采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定BMP-7、TRACP水平。

1.3.2骨强度的测定 完整剥离右侧胫骨，仔细去除周围软组织，保留骨膜，立即应用小动物骨骼强度测定仪以骨折为终点测定骨强度。

1.4统计学方法 采用SPSS13.0软件行t检验。

2 结 果

2.1五味子不同提取物对去卵巢骨质疏松大鼠BMP-7和TRACP的影响 与对照组比较，模型组大鼠BMP-7显著下降(P<0.01)、TRACP显著增加(P<0.01)。与模型组比较，阿仑膦酸钠组BMP-7显著增加(P<0.01)，TRACP显著下降(P<0.01)；五味子水提物组和醇提物组大鼠BMP-7均明显增加(均P<0.01)，五味子醇提物组增加更加显著(<0.01)；两组大鼠TRACP均显著下降(均P<0.01)。见表1。

表1 五味子不同提取物对去卵巢骨质疏松大鼠血清BMP-7和TRACP的影响

与对照组比较:1)P<0.01；与模型组比较:2)P<0.01，与五味子水提物组比较：3)P<0.01；下表同

2.2五味子不同提取物对去卵巢骨质疏松大鼠胫骨骨强度的影响 与对照组〔(6.74±0.39)kg〕比较，模型组大鼠胫骨骨强度显著下降〔(5.47±0.41)kg，P<0.01〕。与模型组比较，阿仑膦酸钠组大鼠胫骨骨强度显著增强〔(7.53±0.27)kg,P<0.01〕；五味子水提物组大鼠胫骨骨强度〔(4.89±0.33)kg〕变化不显著，五味子醇提物组大鼠胫骨骨强度显著增强〔(7.01±0.27)kg,P<0.01〕。

3 讨 论

对雌性大鼠实施卵巢切除术，雌激素生成减少，破骨细胞骨吸收作用强于成骨细胞骨形成继而发展成为骨质疏松。骨新陈代谢时许多血清生化指标随之变化，主要有BMP-7、TRACP、骨特异性碱性磷酸酶(BALP)、骨钙素(BGP)、骨保护素(OPG)、 尿吡啶啉(Pyr)、尿脱氧吡啶啉(D-Pyr)、Ⅰ型胶原氨基末端肽(NTX)、Ⅰ型胶原羧基末端肽(CTX)等〔7，8〕。BMPs是TGF-β超家族成员，BMP-7是骨形成最早的信号分子，主要由骨骼及肾脏产生，有研究认为BMP-7是中医“肾主骨”理论的主要物质基础，其作用机制是骨髓间充质细胞在BMPs作用下分化为成骨及软骨细胞〔9～12〕。TRACP是破骨细胞在骨吸收时产生和分泌的一种糖蛋白。在骨吸收过程中，破骨细胞在骨表面形成富含肌动蛋白的封闭带，锚定在矿化的骨基质上，由此形成吸收腔隙。破骨细胞向腔隙内分泌H+和TRACP等降解骨基质而行使骨吸收功能〔13～15〕。本研究说明五味子水提物和醇提物都能够增强成骨细胞活性，并抑制破骨细胞降解胶原纤维和骨质吸收，但五味子醇提物比五味子水提物作用效果更加显著。综上，五味子醇提物通过抑制破骨细胞骨吸收同时增加成骨细胞活性而增强去卵巢骨质疏松大鼠骨强度。