香菇多糖对癫痫大鼠学习记忆能力和海马神经元的影响*

宋小娜

癫痫是一种因大脑神经元异常放电引起短暂功能障碍的慢性疾病，属于神经系统疾病中的多发病与常见病。癫痫病因复杂，常规抗癫痫药物作用后短期效果满意，但绝大多数会反复发作而发展成为难治性癫痫。癫痫的反复发作会引起不同程度的学习和记忆功能障碍[1]，给患者带来沉重的经济和心理负担。因此，积极寻找改善癫痫患者学习记忆能力的药物就显得非常重要。香菇多糖(lentinan，LNT)为食用菌香菇中的提取物，具有抗肿瘤、免疫调节、抗衰老、抗病毒等多种生物活性[2～4]，但是否能够提高癫痫患者学习记忆能力水平，还未见相关报道。因此，本研究通过建立匹鲁卡品诱导大鼠癫痫模型，应用Morris水迷宫检测LNT对癫痫大鼠学习记忆能力的影响，苏木素-伊红(HE)染色观察海马神经元变化，以期为LNT在癫痫的治疗中提供实验依据。

1 材料和方法

1.1 实验动物SPF级S-D雄性大鼠(河南省医学动物中心，型号：201861035)30只，体质量250～300 g。分组饲养，室温控制在20～25 ℃，空气湿度控制在40%～50%，饮食与饮水均标准化供给，所有实验大鼠均适应性喂养1周后开始建模。

1.2 实验药品和试剂LNT(南京绿叶制药有限公司，国药准字号H10970108)；匹鲁卡品(Sigma公司，17023654)；其他皆为HE染色试剂。

1.3 实验设备WMT-100型Morris水迷宫(四川成都仪器厂)；TS-12U型生物组织自动脱水机(孝感市宏业医用仪器有限公司)；TDK-BMB型石蜡包埋机(孝感泰康达医疗设备公司)；9033BS-Ⅲ型电热恒温鼓风干燥箱(上海新苗医疗器械制造公司)；显微镜(日本尼康公司)等。

1.4 方法

1.4.1 癫痫模型建立参考文献[5]建立匹鲁卡品癫痫模型。如果大鼠癫痫持续发作超过1 h，或者出现严重抽搐则需要腹腔注射苯巴比妥至癫痫发作停止。根据经典发作标准，癫痫发作在Ⅳ级以上，且发作停止后状态良好，癫痫模型大鼠制备成功。

1.4.2 分组30只大鼠随机分为对照组、癫痫模型组、LNT干预组，每组10只。对照组采取常规饲养，不建立癫痫模型；模型组建立癫痫模型，常规饲养；LNT干预组在建立癫痫模型后，采用40 mg/Kg LNT灌胃，持续灌胃30 d。

1.4.3 Morris水迷宫检测灌胃30 d后，参考文献[6]检测各组大鼠学习记忆能力。

1.4.4 HE染色观察海马神经元变化水迷宫实验结束后，立即断头处死大鼠，冰面上快速分离大鼠海马组织，生理盐水冲洗干净，4%多聚甲醛固定，依次经过不同浓度酒精脱水，石蜡包埋，切片，HE染色，显微镜下观察各组海马组织病理变化。

2 结果

2.1 Morris水迷宫实验结果

2.1.1 水迷宫定位航行实验结果与对照组比较，模型组大鼠逃避潜伏期时间明显延长(P<0.05)；与模型组比较，LNT干预组大鼠逃避潜伏期时间明显缩短(P<0.05)。见表1、图1。

表1 3组大鼠定位航行实验结果 (只，

注：与对照组比较，1)P<0.05；与模型组比较，2)P<0.05

图1 3组大鼠水迷宫轨迹图

2.1.2 水迷宫空间探索实验结果与对照组比较，模型组大鼠平台象限路径百分比与平台象限停留时间明显缩短(P<0.05)；与模型组比较，LNT干预组大鼠平台象限路径百分比与平台象限停留时间明显延长(P<0.05)。见表2。

2.2 3组大鼠海马神经元变化对照组大鼠海马区神经元排列规则，边缘清晰。模型组大鼠海马神经元排列紊乱，失去带状规则，海马神经元数量明显减少。LNT干预组海马神经元损伤程度相比模型组病理损伤程度明显减轻。见图2。

表2 3组大鼠空间探索实验结果 (只，

注：与对照组比较，1)P<0.05；与模型组比较，2)P<0.05

图2 3组大鼠海马区形态学观察(HE染色，100×)

3 讨论

癫痫作为一种长期反复发作的顽固慢性病，严重影响人类的健康。癫痫的流行病学调查资料显示，全世界癫痫患病率为4‰～10‰，约有病人5千万[7]；我国癫痫患病率约为7‰，现有癫痫病人900万，是除脑血管病之外的第二大脑部疾病[8]。由于绝大部分癫痫患者需要长期服用抗癫痫药物，故很多研究者认为癫痫引起的认知障碍可能与长期服用抗癫痫药有关[9]，因此研究开发新型抗癫痫药物显得尤为重要。香菇为担子菌纲真菌的实体，味甘、平、凉，作为珍贵的药用和食用资源，一直都备受青睐。LNT为香菇中提取的有效活性成分，具有众多药用价值。通过本实验研究发现与模型组比较，LNT干预组大鼠逃避潜伏期时间明显缩短，而大鼠平台象限路径百分比与平台象限停留时间明显延长(P<0.05)。提示LNT对癫痫大鼠学习记忆能力有明显改善作用。海马属于学习记忆功能的高级中枢，当癫痫反复发作时引起海马区神经元缺失及海马硬化[10]，导致学习记忆能力下降，本实验研究模型组海马神经元排列紊乱，失去带状规则，海马神经元数量明显减少，与以往结果相符。LNT干预组海马神经元损伤程度相比模型组病理损伤程度明显减轻，提示LNT对癫痫大鼠海马神经元具有保护作用。

综上所述，LNT具有提高癫痫大鼠学习记忆能力的作用，其机制可能是通过保护海马神经元，防止海马神经元损伤。