尿IL-18、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C在窒息新生儿急性肾损伤早期诊断中的价值

杨 雯，幸黔鲁，谢 颖 （. 贵州省遵义市妇幼保健院，贵州遵义 563000；2. 贵州省遵义医科大学第二附属医院儿科，贵州遵义 563000）

急性肾损伤(AKI)是一种肾功能在短时间内急剧下降的临床危急重症，新生儿因围产期发生窒息、缺氧、药物中毒等导致多器官功能衰竭，易患AKI，其在新生儿及儿童中的发病率及致死率均较高(其中发病率为10%～61%)[1]。临床上为改善窒息新生儿AKI的预后情况，寻找某些生物标志物来应用于窒息新生儿AKI早期诊断具有重要意义。近年来，探讨成人尿液中白细胞介素-18(IL-18)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys-C)与AKI之间的联系较多[2]，但IL-18、Cys-C在窒息新生儿AKI早期诊断中的价值研究鲜有报道。本文通过检测窒息新生儿尿液样本中的IL-18、Cys-C的水平，探讨其对窒息新生儿AKI早期诊断的价值。

1 资料和方法

1.1 研究对象

选取2017年1月－2019年2月出生后被我院重症监护病房收治的足月窒息新生患儿65例(参考有关窒息诊断标准将其分为轻度窒息38例、重度窒息27例)作为窒息组。选择同期本院出生健康正常的足月新生儿65例(均经超声检查无先天性泌尿系统疾病)为对照组。窒息组与对照组新生儿的性别、胎龄、日龄及出生时身体质量等基础资料差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性(详见表1)。研究期间共纳入65例入选的足月窒息新生患儿在1周内发生急性肾损伤(AKI)共有42例，为AKI组。窒息新生儿AKI诊断标准[3]：(1)新生儿48 h内血清肌酐(Scr)值升高≥26.5 μmol/L(≥0.3 mg/L)；(2)前7 d内经推测或经明确后新生儿出现肾损害，Scr升高至≥1.5倍基础数值；(3)新生儿尿量<0.5 mL/(kg·h)且持续6 h。本研究项目经医院伦理委员会审核通过，且参与本研究中的新生患儿及健康新生儿家长知情同意本项目并签署知情同意书。

1.2 方法

标本采集：分别采集所有新生儿6、24、48 h的新鲜尿液，每次5 mL并按组标记好，离心5 min(转速为1 500 r/min)，置于－80 ℃冰箱保存待测IL-18、Cys-C水平。此外采集新生儿6、24、48 h的静脉血2 mL，采集两份，以5 000 r/min离心5 min置于－80 ℃冰箱保存待测，其中一份用于检测血清Cys-C水平，另一份用于检测血尿素氮(BUN)、Scr水平。

检测方法：尿液样本IL-18、Cys-C水平采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测(eBiosicience BMS 267/2试剂盒购自奥地利 Vienna公司)；采用全自动生化分析仪(型号：日本 Hitachi 7600 型全自动生化分析仪)检测BUN、Scr；上述指标检测操作均严格按照试剂盒说明书进行。

新生儿急性生理学(SNAP)评分：所有研究对象在入院24 h内予以SNAP评分。其基于患儿生命体征、血生化指标、血气指标及有无窒息或惊厥等28个项目进行评分，使用入院当天相关指标中最差值计算结果。SNAP分值越高，表示病情越严重。

1.3 统计学处理

采用SPSS 21.0统计学软件对采集数据进行数据处理，计量资料用均数±标准差(±s)表示，用独立样本t检验进行组间比较；计数资料用百分比[n(%)]表示，采用卡方检验行组间比较。应用Logistic回归分析法评价校正混杂因素后尿IL-18及Cys-C水平与窒息新生儿AKI的相关性；应用受试者工作特征曲线(ROC曲线)及曲线下面积(AUC)评价有关指标对AKI的早期诊断预测价值。P<0.05为差异有统计学意义。

表1 对照组和窒息组患儿基础资料的比较

2 结果

2.1 新生儿不同时间段尿液中IL-18和Cys-C水平

窒息组新生儿出生后6、24、48 h的尿液标本中IL-18、Cys-C水平均明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)，详见表2。

2.2 新生儿出生后24 h尿液标本中IL-18、Cys-C水平与血液Cys-C、Scr、BUN水平

重度窒息组、轻度窒息组、对照组的新生儿出生后24 h尿液标本中IL-18、Cys-C水平及血液Scr、BUN、Cys-C水平差异有统计学意义(P<0.01或0.05)，详见表3。

表2 对照组和窒息组不同时间段尿液标本中IL-18、Cys-C水平的比较 (±s，n=65)

表2 对照组和窒息组不同时间段尿液标本中IL-18、Cys-C水平的比较 (±s，n=65)

与对照组同时间点比较：aP<0.01

IL-18/(ng/L)Cys-C/(mg/L)组别对照组6 h 24 h 48 h窒息组6 h 24 h 48 h 1.56±0.29 1.53±0.35 1.49±0.66 0.02±0.04 0.04±0.11 0.04±0.26 44.63±8.63a0.48±0.26a49.05±8.87a0.53±0.47a51.04±7.17a0.58±0.52a

表3 各组新生儿生后24 h尿IL-18、Cys-C水平与血液Cys-C、Scr、BUN水平的比较(±s)

表3 各组新生儿生后24 h尿IL-18、Cys-C水平与血液Cys-C、Scr、BUN水平的比较(±s)

与对照组比较：aP<0.05，bP<0.01；与重度窒息组比较：cP<0.05，dP<0.05

组别对照组轻度窒息组重度窒息组n 65 38 27尿IL-18/(ng/L)1.53±0.35尿Cys-C/(mg/L)0.04±0.11 37.58±2.71a0.43±0.27b血液Cys-C/(mg/L)1.55±0.38血液Scr/(μmol/L)75.35±17.62 76.17±23.82 57.72±7.84ac0.60±0.25bd血液BUN/(mmol/L)4.35±1.87 4.79±2.462.27±0.49b117.47±29.76ac9.14±2.45ac2.87±0.7bd

2.3 对照组和AKI组患儿各项资料的比较

AKI组患儿的胎龄、出生时身体质量与对照组差异无统计学意义(P>0.05)，而Apgar评分明显低于对照组，尿Cys-C、IL-18、MA、α1-MG水平及SNAP评分均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.01或0.05)，详见表4。

表4 对照组和AKI组患儿各项资料的比较

2.4 预测AKI早期指标的多因素分析

比较对照组和AKI组之间有统计学差异的变量进行多因素Logistic回归分析，在校正胎龄、日龄、出生时身体质量、尿MA、Apgar评分及α1-MG水平等因素后，SNAP评分与窒息新生儿AKI不相关，但尿液标本中IL-18、Cys-C水平与窒息新生儿AKI明显相关，详见表5。

表5 各个指标与AKI的相关性

2.5 尿IL-18和Cys-C预测窒息新生儿AKI诊断价值

尿IL-18预测窒息新生儿AKI的AUC值为0.691(95% CI 0.688～0.871，P=0.015)，特异度为68.16%、敏感度为65.73%；Cys-C预测窒息新生儿AKI的AUC值为0.898(95% CI 0.789～0.939，P<0.01)，特异度为82.41%、敏感度为87.26%，详见表6、图1。

表6 尿IL-18和Cys-C预测窒息新生儿AKI的AUC值

3 讨论

AKI是导致医院围产新生儿致残率与病死率的重要因素，治疗AKI的关键则在于临床快捷、经济、敏感的诊断方式。此前临床评价窒息新生儿常用的指标为Scr，因其易受影响、灵敏度差、性质不稳定等缺点严重阻碍其在临床诊断上的应用[4]；同时临床上也亟需一些可信的指标用于该病早期诊断，便于医生及时展开治疗，有效改善患者预后，从而降低患者病死率。近些年来，有研究表明成人尿液中IL-18、Cys-C与AKI之间的联系紧密，IL-18、Cys-C表现出很好的特异性与灵敏度[5-6]，但IL-18、Cys-C在窒息新生儿AKI早期诊断中的价值研究鲜有报道。因此本文就IL-18、Cys-C在窒息新生儿AKI早期诊断价值展开研究。

图1 尿IL-18和Cys-C检测ROC曲线

IL-18是近年来研究较热的一种促炎细胞因子，主要由近端肾小管中的单核吞噬细胞生成，归类于IL-1大家族[7]；有研究表明IL-18在早期AKI患者尿液标本中极易检测出，而当AKI发生后，IL-18水平呈现出明显增高趋势，AKI在刺激IL-4介导的机体炎症反应和激发FOX-O1诱导细胞增殖的过程中发挥重要作用[8]，其与机体炎症反应、肾小管增生、氧化应激及诱导细胞凋亡有重要联系[9]。Cys-C是一种有核细胞分泌生成的酶抑制剂，其具有不受年龄、药物、感染等因素影响的特点，仅与肾小球滤过率(GFR)有关，当GFR轻微下降变化均可影响Cys-C水平改变[10-11]；多项研究表明，Cys-C可作重症患者AKI诊断的优良指标[12]。

本研究结果发现，窒息组新生儿出生后6、24、48 h的尿液标本中IL-18、Cys-C水平均明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)，且尿IL-18、Cys-C水平与血清Scr、BUN呈正相关，表明尿IL-18、Cys-C可用于窒息新生儿AKI早期诊断的生物学指标。通过Logistic回归分析，排除某些混杂因素后，发现尿IL-18及Cys-C水平与窒息新生儿AKI有明显相关性。通过患者工作特征曲线分析可得，尿IL-18、Cys-C的AUC(0.691和0.898)较高，特异度和敏感度都较高，充分显示出尿IL-18、Cys-C在预测窒息新生儿AKI有较高的精确性，可用于其早期诊断。

综上所述，尿IL-18、Cys-C可作为窒息新生儿AKI早期诊断评估的优良生物学指标，易于临床检测与应用。因本研究样本量较少，仍需要更进一步的探索研究，需要更多样本研究来证实其应用实用性；同时，需要深入研究这些生物学标志物在AKI中的分子病理机制，探索出针对性解决方法，便于有效治疗早期肾损伤。