不同地区规模化猪场猪瘟抗体水平的检测与分析

文│吉慧敏 刘佳倩 刘铮铸（河北科技师范学院动物科技学院、河北省特色动物种质资源挖掘与创新重点实验室）

王会杰 郑庆丰（河北省秦皇岛市农业农村局）

猪瘟是一种烈性传染病，历史十分久远，美国曾经暴发过大规模的疫情，在其他众多国家也发生过，给各国养猪业均造成了重大损失。世界动物卫生组织（OIE）要求，猪场一旦发生猪瘟必须立即上报。在我国，该病被归为一类疫病。近几年，随着我国养殖业的发展和养殖规模的扩大，猪瘟的流行趋势在一定程度上发生了变化。

研究发现，在诸多家养动物中，猪是猪瘟惟一的易感对象。成年后的猪群很少发病，但是成年猪却是严重的带毒者，该种带毒猪通过垂直传播将病毒由亲代传给子代。猪瘟的临床表现也由急性典型逐渐转变为急性典型与慢性非典型共存。

一直以来，我国实行防疫为主、防重于治的策略，在一定程度上可以减少猪瘟的患病率及传染率，但是猪瘟的流行范围广泛，发病无季节性且病死率极高，因此目前防控猪瘟最有效的方法还是接种疫苗。

母猪的抗体水平关乎仔猪出生后从母体直接获得的母源抗体，故在规模化猪场对母猪及时进行抗体水平检测至关重要。而酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种适合于大批量检测的方法，该技术对于诊断猪瘟有较高的灵敏度，检测结果也比较稳定，ELISA法目前已成为检测猪瘟抗体水平应用最为广泛的方法。因此，本研究拟采用ELISA法对我国6省区11个地区的部分规模化猪场的母猪，在接种猪瘟疫苗后进行抗体水平检测，为生产一线提供一定参考依据。

◎图1 不同地区猪瘟抗体阳性率检测结果

一、材料与方法

1.试验材料。

（1）血样的采集与处理。在我国河北（衡水、石家庄）、河南（卫辉、鹤壁）、辽宁（沈阳、铁岭、鞍山）、山东（德州、临沂）、四川（眉山）和新疆（库尔勒）6省区11个地区的部分规模化猪场中，对二元成年母猪免疫接种猪瘟疫苗20天后，在前腔静脉处进行血样采集，共采集824头份。将采集好的血样置于37℃环境中2小时，凝固后1500转/分钟离心5分钟，取上清液。要求上清液色泽清亮、无溶血现象，之后置于-20℃冰箱中保存，待用。

（2）试剂盒。猪瘟病毒抗体检测ELISA试剂盒（阻断法）购于无锡优联生物科技有限公司，-4℃冰箱保存，用前置于37 ℃恒温箱中回温2小时。

2.试验方法。用已购试剂盒对824头份母猪血清的抗体水平进行检测，操作过程严格按照试剂盒说明书进行。

（1）样品和洗涤液准备。在血清稀释板中，用样品稀释液按1∶1的体积稀释待检血清、阴性对照和阳性对照。洗涤液用纯水做20倍稀释，之后置于2～8℃环境中，可存放7天。

（2）结果判定。在酶标仪上630纳米（nm）波长处读取各孔的OD值。阴性两孔的对照平均OD630nm值应大于0.500，阳性对照的阻断率［阻断率＝（1-S/N）×100%，公式中S代表样品OD630nm值，N代表阴性对照平均OD630nm值］大于40%时，试验方可成立。检测结果的阴、阳性判定依据见表1。当阻断率≥50%时，猪瘟抗体检测合格，具备一定的抗猪瘟病毒能力。

（3） 数据处理。采用SPSS 20.0软件的Waller-Duncan法，对不同地区母猪群猪瘟抗体阻断率进行差异显著性分析，结果用平均值±标准差的方式呈现。同时计算阻断率的离散程度（变异系数），变异系数越大，猪群的抗体水平整齐度越差。

变异系数＝标准差/抗体的平均值×100%。

二、结果与分析

用已购猪瘟病毒抗体检测ELISA试剂盒对6省区11个地区共计824份母猪血清进行了检测，各地区猪场的猪瘟抗体水平检测结果见表2和图1、图2、图3。

由表2和图1、图2、图3可知，6省区11个地区规模化猪场猪瘟抗体的阳性率中，最高的是河南省卫辉和鹤壁地区，均为100.00%，最低的是河北省石家庄地区，为75.00%，整体上达到了我国猪瘟强制性免疫疫苗抗体阳性率70%的要求。抗体合格率，最高的是河南省鹤壁地区，为98.23%，最低的是河北省石家庄地区，为60.00%。变异系数，最大的是河北省石家庄地区，为38%，最小的是河南省鹤壁地区，为16%。其中，河北省衡水地区（88.94%，24%）、河南省卫辉地区（87.50%，21%）和鹤壁地区（98.23%，16%）、辽宁省鞍山地区（94.74%，18%）、山东省临沂地区（89.36%，26%）的抗体合格率较高，变异系数也较小，表明这几个地区母猪群的抗体水平较高且整齐度也较好。

不同地区母猪群猪瘟抗体阻断率差异显著性分析结果见表3。

由 表3 可 知， 河 南 省 鹤壁地区的阻断率最高， 为（84.10±13.37）%，河北省石家庄地区最低，为（59.29±22.73）%，剩余其他各地区依次为河北省衡水地区、辽宁省鞍山地区、山东省临沂地区、河南省卫辉地区、山东省德州地区、辽宁省铁岭地区、辽宁省沈阳地区、新疆维吾尔自治区库尔勒地区和四川省眉山地区，依次为（73.10±17.56）%、（72.73±13.23）%、（71.89±18.53）%、（71.04±14.80）%、（68.28±19.33）%、（67.53±19.72）%、（62.90±18.66）%、（62.19±17.73）%和（61.66±20.04）%。进一步分析可知，石家庄地区与卫辉、临沂、鞍山、衡水、鹤壁地区均呈极显著性差异（P＜0.01），眉山地区与临沂、鞍山、衡水、鹤壁地区均呈极显著性差异（P＜0.01），库尔勒地区与鞍山、衡水、鹤壁地区均呈极显著性差异（P＜0.01），沈阳地区与衡水、鹤壁地区均呈极显著性差异（P＜0.01），铁岭地区与鹤壁地区呈极显著性差异（P＜0.01）。

表1 检测结果的阴、阳性判定依据

◎图2 不同地区猪瘟抗体合格率检测结果

表2 各地区规模化猪场母猪猪瘟抗体水平检测结果

三、讨论

对于一个规模化猪场来说，控制猪瘟疫情、防止猪瘟感染，使猪场健康稳定生产十分重要。本研究对我国6 省区1 1 个地区部分规模化猪场二元母猪免疫猪瘟疫苗后，进行了猪瘟抗体水平的检测，不同地区猪场抗体阳性率在7 5.0 0%～1 0 0%，整体上达到了我国猪瘟免疫后抗体阳性率需达到7 0%的要求。抗体合格率在60.00%～98.23%，说明这些地区规模化猪场免疫流程较为合理，整体免疫效果较好。阻断率的方差分析显示，不同省区不同地区、同一省不同地区均有差异，有的地区之间呈极显著性差异（P＜0.01），这一结果与前人的研究结果基本一致。

祖立闯等通过对2008—2016年我国猪瘟疫苗免疫后抗体检测的文献整理和汇总，发现不同区域免疫效果差异较大。张振仓对山西关中11个猪场猪群PCV-2抗体进行检测，结果发现即使是同一县不同猪场的猪群保护率也存在差异。杜希珍等报道，在猪瘟控制比较好的猪场，母猪群猪瘟抗体合格率可达90%以上。本研究中的河南省鹤壁地区（98.23%）和辽宁省鞍山地区（94.74%）母猪群猪瘟抗体合格率也均在90%以上，说明这两个地区猪场的猪瘟控制得较好。

本研究检测对象为母猪，而对母猪猪瘟抗体免疫后的保护力检测关乎仔猪在出生后从母体直接获得的母源抗体，如若母猪带毒，便使得新生仔猪从母体获得的抗体不够或者根本没有抗体，先天免疫保护力不足，更严重的是，这些仔猪会造成对其他仔猪的持续性感染。周婷婷等对河南4个地区规模化猪场的抗体水平进行了检测，发现母猪自身免疫水平低会对仔猪母源抗体造成很大影响。因此，规模化猪场应重视母猪免疫后的抗体水平监测。

本研究发现的不同地区间猪瘟免疫效果存在差异，很重要的一个可能原因是各猪场的免疫流程不同，张文等的研究也发现免疫流程不合理会导致免疫最终效果不理想。因此，建议各猪场的免疫流程应根据当地的流行病学以及结合动物机体本身等情况制订。另外，疫苗的选用及管理也非常重要，若疫苗来源不正，或运送、保管不当，会导致疫苗抗体效价水平降低。

为了对猪瘟进行很好的防控，规模化猪场应该有一个符合自己猪场的免疫程序，明确最佳的免疫时间；猪场自身做到自繁自养、慎重引种；做好定期对免疫后抗体的监测工作；使用质量较高的猪瘟疫苗，控制好免疫疫苗的剂量。同时，规模化猪场在进行猪瘟净化时更要注重猪瘟的预防，重点注意以下几个方面：一是科学的饲养管理；二是增强猪只自身的抗体水平；三是选用合格的疫苗。

◎图3 不同地区猪瘟抗体变异系数检测结果

表3 各地区规模化猪场母猪免疫后抗体水平显著性分析结果

四、结论

本研究对河北、河南、辽宁、山东、四川和新疆6省区的11个地区部分规模化猪场的二元母猪猪瘟疫苗免疫后的抗体水平进行了检测分析，发现同一疫苗不同地区免疫效果不完全一样，建议规模化猪场建立合理的免疫流程，提高猪瘟的综合防控效果。