抗Ⅱ型胶原抗体水平与血清阴性类风湿关节炎疾病活动相关性分析

余方媛，王红艳，冯丹丹，耿晶晶，占旖晴，徐 亮，袁 慧

(1.皖南医学院第一附属医院 弋矶山医院 风湿免疫科，安徽 芜湖 241001；2.皖南医学院 公共卫生学院，安徽 芜湖 241002)

血清阴性类风湿关节炎[1](seronegative rheumatoid arthritis，SNRA)是指符合1987年ACR或2010年ACR/EULAR关于RA诊断标准，但血清类风湿因子(rheumatoid factor,RF)、抗角蛋白抗体(anti-keratin antibody,AKA)、抗核周因子(antiperinuclear factor,APF)及抗环瓜氨酸多肽(anti-cyclic citrullinated peptide,CCP)抗体均阴性的患者。虽然目前现有的检查方法和水平无法检测出SNRA患者体内血清自身抗体，但不能排除可能存在潜在的相关抗体，目前国内尚无统一认识[2]。由于缺乏对SNRA有效的血清判断指标，对早期、尚未出现放射学骨破坏的SNRA患者往往很难做出及时有效的诊断和治疗，这对该疾病早期诊断提出了新的挑战。Ⅱ型胶原蛋白(typeⅡ collagen,CⅡ)[3]作为一种与RA相关的抗原在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的发病中起着重要作用。研究发现[4]在一部分血清阴性RA患者中可检测出抗CⅡ，但其水平是否与SNRA疾病活动具有相关性尚未知晓。

为进一步研究抗CⅡ抗体水平是否与SNRA疾病活动具有相关性，探讨该指标的血清水平是否能作为该疾病的辅助诊断和监测疗效指标，本研究拟检测SNRA患者血清抗CⅡ抗体水平，结合临床资料探索其对SNRA的诊断价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2018年1～9月在弋矶山医院风湿免疫科住院、门诊随访的SNRA患者共35例,均符合1987年美国风湿病学会(ACR)或2010年欧洲抗风湿病联盟(EULAR)类风湿关节炎分类标准，并且血清RF及CCP抗体均为阴性。其中男4例,女31例,年龄24～75岁，平均年龄(54.63±12.91)岁;另收集同期在弋矶山医院风湿科门诊或住院的非RA的其他风湿病患者(皮肌炎、干燥综合征、系统性红斑狼疮、风湿性多肌痛等结缔组织病)，共15例，其中男性2例，女性13例，年龄26～61岁，平均年龄(42.6±10.82)岁。另收集健康体检者，共10例，其中男2例，女8例，年龄29～65岁，平均年龄(46.6±10.10)岁。对SNRA患者进行血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP) 检测及关节影像学检查(X线、MRI)，并做出DAS28评分。

1.2 方法 血清标本制备：采新鲜血5 mL，二步离心法分离血清，-20℃冰箱保存。抗CⅡ抗体测定：酶联免疫吸附实验法，试剂盒购自上海恒远生物科技有限公司，按试剂盒说明操作。

1.3 统计学处理 用SPSS 17.0软件进行统计学分析，符合正态分布的计量数据以均数±标准差表示，组间差异比较用t检验或方差分析，组间率的比较用χ2检验，相关性分析采用Pearson相关性分析,检验水准为α=0.05。

2 结果

2.1 3组间血清抗CⅡ抗体水平表达比较 35例SNRA患者血清平均抗CⅡ抗体水平高于非RA组和健康对照组(F=3.669,P=0.032)；抗CⅡ抗体阳性率在SNRA组为28.57%，也高于非RA组和健康对照组(χ2=6.059，P=0.048)(见表1)。

表1 3组抗CⅡ抗体表达结果的比较[n(%)]

组别n抗CⅡ抗体值/(μg/L)抗CⅡ抗体阳性率SNRA组3538.38±30.0910(28.57)非RA组1524.87±13.911(6.67)健康对照组1013.75±6.960(0)P0.0320.048

2.2 两组间实验室指标表达比较 抗CⅡ抗体阳性组ESR、CRP及DAS28评分都高于抗CⅡ抗体阴性组，且差异具有统计学意义(P<0.05)，各组间指标具体见表2。

表2 两组间实验室指标表达比较

组别nESR/(mm/h)CRP/(mg/L)DAS28抗CⅡ抗体阳性1063.05±28.3974.92±34.485.32±0.75抗CⅡ抗体阴性2533.59±30.0464.42±30.314.21±1.30t17.975.5720.57P0.000.000.00

2.3 组间活动参数的相关性 通过采用Pearson相关性分析血清抗CⅡ抗体水平与临床活动参数的相关性，结果显示35例SNRA患者血清平均抗CⅡ抗体水平与ESR呈正相关(r=0.394,P=0.019),与CRP(r=0.100,P=0.566)、DAS28评分(r=0.287,P=0.094)之间无显著相关性。

2.4 不同X射线分期SNRA患者血清抗CⅡ抗体水平的比较 根据美国风湿病学会标准[5]，对35例SNRA患者双手X线正位片进行分期，Ⅰ期：关节或关节面骨质疏松；Ⅱ期：关节面下骨质疏松，偶见关节面囊性破坏或骨质侵蚀破坏；Ⅲ期：明显关节面破坏或骨侵蚀破坏，关节间隙狭窄，关节半脱位等改变；Ⅳ期：除Ⅱ、Ⅲ期病变外，并有纤维性或骨性强直。不同X射线分期患者血清抗CⅡ抗体水平差异具有统计学意义(P<0.05)，骨破坏越严重，血清抗CⅡ抗体水平越高(见表3)。

表3 抗CⅡ抗体滴度与X线分期的关系

分期n抗CⅡ抗体水平/(μg/L)Ⅰ期724.18±12.49Ⅱ期1228.57±20.84Ⅲ期1531.66±22.22Ⅳ期1131.75F532.81P0.00

3 讨论

本研究采用ELISA方法检测35例SNRA患者血清中抗CⅡ抗体水平，研究结果显示该组患者抗体阳性率为28.57%，其阳性率高于健康对照组及其他风湿病组，提示该抗体可能在SNRA的发生发展过程起着重要作用。为进一步探讨SNRA患者血清中抗CⅡ抗体与疾病急性期反应物水平的关系，对抗CⅡ抗体阳性组和抗CⅡ抗体阴性组进行比较，发现阳性组的ESR、CRP及DAS28评分都高于阴性组，且差异具有统计学意义，提示该抗CⅡ抗体在疾病发生和发展过程中起着关键作用，能够使血清中的各项急性期反应物水平增加，这与Manivel[6]的研究保持一致。相关性分析抗CⅡ抗体水平与临床活动参数之间的关系，结果表明SNRA患者血清平均抗CⅡ抗体水平与ESR呈正相关，且抗CⅡ抗体阳性组ESR、CRP及DAS28评分高于阴性组，提示检测抗CⅡ抗体与SNRA的疾病活动度有关，可能作为疾病活动强弱的辅助评价指标。本研究还发现X线分期与抗CⅡ抗体滴度有关，尤其是当患者出现骨侵蚀时，抗CⅡ抗体水平升高更明显，提示CⅡ参与了SNRA骨破坏的发生，血清抗CⅡ抗体水平与骨质破坏有一定关系，这对RA病情的进展和严重性有一定的参考价值，Mullazehi[7]的研究也证实这一观点。

早在2001年爱德华兹和剑桥就发现Th1型反应[8](RA滑膜中的T淋巴细胞可以分化为Th1样亚群，Th1型细胞分泌的IFN-g可以诱导局部滑膜巨噬细胞的活化，然后释放炎性细胞因子，如IL-1b，IL-1b可以激活滑膜细胞产生各种细胞因子和炎症介质)与抗CⅡ抗体的产生有关，抗CⅡ抗体被认为与软骨胶原结合，激活补体系统并吸引炎性细胞趋向组织部位，继发炎性浸润，最终导致关节胶原酶升高，引发组织损伤，从而在疾病早期阶段对炎症过程产生作用[9-10]。因此我们认为抗CⅡ抗体可能参与了疾病的发生和发展的过程，其能否作为疾病早期诊断和判断预后的重要指标需进一步研究探讨。目前由于早期SNRA患者体内尚无检测出血清自身抗体的报道，故一定程度上无法做到早期诊断和及时治疗，而检测血清抗CⅡ抗体水平让该疾病的早期诊断成为了可能。Strollo等[11]的研究也证实了这一观点，推测结合抗CⅡ抗体与RF、抗CCP抗体有可能提高SNRA诊断的准确性。

综上所述，本研究表明血清抗CⅡ抗体水平与SNRA的疾病活动度有相关性，且血清抗CⅡ型胶原抗体血清的检测有助于提高SNRA的诊断,可作为辅助诊断和监测疗效的指标，而目前本研究对于抗CⅡ抗体对RA患者关节炎症及破坏的具体机制还需进一步研究和挖掘。