健体酒的安全性评价研究

张成香，李世芬，环 飞，严 婷，朱雪峰

（南京医科大学江苏省医药农药兽药安全评价与研究中心，公共卫生学院，江苏南京 211166）

人参、黄精、马鹿茸、淫羊藿等是我国传统的中药材，它们的化学成分非常复杂，且具有增强体质的功能。健体酒以人参、马鹿茸、黄精、淫羊藿等为主要原料研制而成。按照我国卫生部《保健食品检验与评价技术规范》 （2003年版） 的要求，对受试物进行安全性毒性试验，为进一步研究提供了试验依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物和受试物

受试物是健体酒，它的人体推荐剂量为6 mL/人/日（16.7倍浓缩液，体重按60 kg计）；清洁级小鼠，扬州大学比较医学中心提供，生产许可证号SCXK（苏） 2012-0004，合格证编号201601435；清洁级SD大鼠，上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，生产许可证号SCXK（沪） 2013-0016，合格证编号2008001660090。

1.2 方法

1.2.1 小鼠急性经口毒性

用最大耐受量（MTD）法行小鼠急性毒性试验，设计剂量为25.200 g/kg·bw。动物检疫3 d，试验前动物禁食16 h，可自由饮水。样品直接采用16.7倍浓缩液进行灌胃，样品比重为1.26，按最大灌胃量（20 mL/kg·bw），一次性给样，受试物给予剂量为25.200 g/kg·bw。给样后连续观察14 d，观察小鼠中毒表现及死亡情况。

1.2.2 遗传毒性试验

（1） Ames试验。鼠伤寒沙门氏菌突变型菌株TA97，TA98，TA100，TA102为试验模型。活化系统是多氯联苯诱导的大鼠肝S-9。S-9以5 000，1 000，200，40，8 μg/皿5组活化并试验，每个剂量组重复6次，采用平板掺入法。

（2）小鼠骨髓细胞微核试验。试验取用60只成年健康ICR小鼠，按体重随机分为6组，每组10只，雌雄各半。受试物按15%乙醇的酒基配制，高、中、低剂量组分别含受试物（预处理浓缩液）质量分数为100%，50%，25%，以10 mL/kg·bw灌胃，使用30 h给受试物法。30 h后，常规制片，固定染色。每只鼠统计200个嗜多染红细胞和成熟红细胞数（NCE），并计算嗜多染红细胞与成熟红细胞比值（PCE/NCE）。

（3） 小鼠精子畸形试验。选取体重25～35 g ICR种的清洁级性成熟雄性小鼠30只，适应环境3 d后进行试验。随机分为6组，每组5只小鼠。受试样品用15%乙醇的酒基配制，低、中、高剂量组分别含受试样品（预处理浓缩液） 质量分数为25%，50%，100%，以10 mL/kg·bw连续5 d灌胃，每天1次。于第35天处死小鼠，制备精子涂片并计算小鼠精子畸形发生率。

1.2.3 30 d喂养试验

SD大鼠100只随机分为5组，每组20只，雌雄各半。根据受试样品供应方提供的人体推荐剂量，分为3.0，6.5，10.0 mL/kg这3个剂量组，另设空白对照组（0 mL/kg，无菌水） 和溶剂对照组（0 mL/kg，含15%乙醇酒基）。试验30 d期间，动物可自由饮水进食，每天至少观察动物1次，每周称重1次、检测2次食物摄入量。30 d后，处死试验大鼠，并行常规血液学检查和血液生化学检查。取肾脏、肝脏、脾脏、卵巢或睾丸等脏器，计算脏器系数；取高剂量及对照组的大鼠脾脏、肝脏、胃、肾脏、十二指肠、睾丸或卵巢，组织固定后制成石蜡切片行组织病理学检查。

1.2.4 统计分析方法

统计软件为SPSS23.0，微核试验结果采用Poisson分布U检验统计。满足方差齐要求的数据，用单因素方差分析方法中的多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法统计；非正态分布或方差不齐的数据，进行变量转换后统计；仍然不齐则用秩和检验进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 小鼠急性毒性试验

健体酒雌、雄性小鼠急性经口MTD＞25.2 g/kg·bw，根据急性毒性剂量分级标准，该样品属于无毒级。

2.2 小鼠Ames试验

该受试样本对鼠伤寒沙门氏菌TA97，TA98，TA100，TA102这4株试验菌株，在加与不加活化系统S-9的情况下，均未见致基因突变的作用，即污染物致突变性检测（Ames试验）结果为阴性。

2.3 小鼠骨髓微核试验

受试样品的各剂量组微核率与阴性对照组相比，无显著差异（p＞0.05），而阳性对照组则显著高于阴性对照组（p＜0.01）。未见健体酒对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核形成及嗜多染红细胞与成熟红细胞比值（PCE/NCE） 产生影响。

2.4 小鼠精子畸形试验

各剂量组精子畸形率与阴性对照组比较，无显著差异（p＞0.05），而阳性对照组的小鼠精子畸形率较阴性对照组有显著提高（p＜0.01）。因此，受试物对小鼠精子畸形率不产生影响。

2.5 大鼠30 d喂养试验

2.5.1 健体酒对大鼠体重的影响

受试样品各剂量组雌、雄大鼠的体重增长情况良好，与对照组比较均无显著差异。各剂量组雌、雄大鼠的增重、进食量及食物利用率与对照组比较差异均无显著性。结果表明，该健体酒对大鼠体重增长、进食量及食物利用率均未见明显影响。

2.5.2 健体酒对大鼠血液和血生化的影响

受试样品各剂量组大鼠的血液生化学指标均在正常参考范围内，与对照组比较，均无统计学差异（p＞0.05）。

健体酒对大鼠血液学指标的影响（X±SD） 见表1，健体酒对大鼠部分血生化的影响（X±SD）见表2。

2.5.3 健体酒对大鼠脏器绝对重量及相对重量的影响

各剂量组的各项指标与0 mL/kg·bw/d（溶剂对照组） 比较，均无统计学差异（p＞0.05）。空白对照组与溶剂对照组比较，差异无统计学意义（p＞0.05）。

健体酒各组大鼠脏器绝对质量及相对质量（X±SD） 见表 3。

2.5.4 病理学检查

试验各组大鼠整体解剖均未见结构异常。显微镜观察结果显示，未见由该受试样品引起的肾、肝、胃、脾、十二指肠、睾丸或卵巢脏器毒性病理性改变。

因此，在试验条件下，大鼠30 d喂养试验各项指标均无异常，给予动物人体推荐剂量100倍的健体酒，未观察到有害作用。

3 结论

健体酒是按一定比例将人参、马鹿茸、淫羊藿等提取物混合研制而成。人参是多年生的草本植物，味甘微苦性温，是中药中的珍品。人参皂苷为人参的主要活性成分，已被证明有提高免疫力、抗肿瘤、抗氧化、降低血糖、健胃、保护心血管等功能[1-5]，且适合长期服用。已有的研究证明，鹿茸含有多种人体必需的氨基酸、磷脂及微量元素[6]。鹿茸血酒可增加有氧代谢能力和乳酸代谢，并增加肝糖原的储备量。鹿茸血酒的抗疲劳作用与肝糖原的储备直接相关。肝糖原储备的增加可在较长时间里维持血糖水平，从而为机体提供更多的能量。在进行剧烈体力活动后，鹿茸血酒可降低糖原的消耗利用，进而增强体能和耐力，缓解体力疲劳[7]。淫羊藿含有多糖、黄酮类、萜类化合物及微量元素等多种活性物质，具有强筋骨、补肾壮阳、祛风除湿的功效。已有文献表明，淫羊藿苷对于提高大鼠运动能力有促进作用[8]，且具有调节细胞增殖、抗肿瘤、防治骨质疏松等作用[9-11]。

表1 健体酒对大鼠血液学指标的影响（X±SD）

表2 健体酒对大鼠部分血生化的影响（X±SD）

表3 健体酒各组大鼠脏器绝对质量及相对质量（X±SD）

小鼠急性毒性试验是评价药物安全性的一项重要指标，污染物致突变性检测（Ames试验）、小鼠骨髓细胞微核试验和小鼠精子畸形试验是评估遗传毒性试验的重要指标，而大鼠30 d喂养试验则用来评估受试物的短期毒性[12-14]。结果表明，健体酒属于无毒级，同时未观察到有致突变作用，30 d喂养对大鼠各观察指标均未产生明显影响。因此，在推荐剂量内服用健体酒是安全可靠的，该产品在保健食品开发领域具有较好的前景。